HPLC法测定复方胆氨片中氯氮卓的含量
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编辑,雅兰
HPLC法测定复方胆氨片中氯氮卓的含量
车思敏
(南京康爱医院,江苏南京210037)
摘要:目的采用高效液相色谱法测定复方胆氨片中氯氮卓的含量.方法采用
RP-HPLC进行测定.采用氰基键合硅胶色谱柱(ZorbaxCN,
4.6mmX150mm,5itm],流动相为乙腈一水相(O.5%庚烷磺酸钠水溶液,磷酸调pH
值3.0)(50:50),检测波长为254nm,外标法.结果氯氮卓在
O5~10~g/rrd(5,=0.9997)浓度范围内线性关系良好,回收率为102.5%(n=9),R.SD为
1.7%.结论该方法操作简便,结果准确,重现性好.
关键词:氯氮卓:高效液相色谱法;含量测定
DeterminationChlordiazepoxideinCompoundSodiumCholateandAminophyllineTabletsbyHPLC
CHESi-min
(NanjingKang'aiHospitalofJiangsuProvince,Nanjing210037,China) Abstrct:ObjectiveToestablishaHPLCmethodfortheassayofChlordiazepoxideincompoundsodiumcholateandaminophyllinetablets.Method
Theassaywasperformed011aZorbax-CNcolumn(4.6mmxl5Omm,5?
J|ThemobilepbasewascomposedofaeetonitrJle-waterphase(n5%sodium heptanesulfonate,thenadjustingpHto3.00+0.02withphosphoricacid)(50:50).Thedetectionwavelengthwas254nm.ResultsGoodlinearWas
shownintherangeofO.5~lOIxg/ml(.y0.9997).Theaveragerecoverywas102.5%.ConclusionThemethodmightbesimple,rapidandaccurate.It
issuitablefortheassayofChlordiazepoxideincompoundsodiumcholateandaminophyllinetabletscompoundsodiumcholateandaminophylline
tablets.
Keywords:Chlordiazepoxide;Assay;HPLC
复方胆氨片是由胆酸钠,氨茶碱,氯氮卓等多种成分制成的复
方制剂?,主要用于治疗支气管炎,支气管哮喘急性发作以及肺气肿 及早期肺心病.氯氮卓对呼吸道平滑肌有直接松弛作用,有抗焦虑 镇静催眠作用.可对抗盐酸麻黄碱引起的中枢兴奋,恶心等不良反 应,有助于减轻因长期哮喘引起的焦虑不适等症状.本文选用氰基 柱为固定相,选择适宜的检测波长,优选了流动相系统,可以快速分 离与检测氯氮卓.方法简便可行,结果准确可靠.
1仪器与试剂
Agilent1100高效液相色谱仪,包括:二元梯度泵,自动进样器, 二级管阵列检测器.ZorbaxCN柱(4.6mmx150tara,5m1.乙腈为色谱 纯,水为超纯水,其它试剂均为分析纯.复方胆氨片及氯氮卓均为某 厂提供.
2方法与结果
2.1波长的选择精密氯氮卓对照品适量,用流动相溶解后,以流动 相为空白,照紫外分光光度法在20Ohm,350nm波长范围进行扫描, 氯氮卓在254nm处有最大吸收,选择254nm为检测波长. 2.2色谱条件与系统适用性试验色谱柱为ZorbaxcN柱f4.6minX 150mm,5m),流动相为乙腈一水相(0.5%庚烷磺酸钠水溶液,磷酸调 pH值3.0)(50:50),检测波长为254nm,流速1.0ml/min,柱温为 3O?.理论塔板数按氯氮卓峰计算,不低于2000. 2.3溶液的配制对照品储备液:精密称取氯氮卓对照品5rag,置 收稿日期:2011-06—20
簟
100ml容量瓶中,加流动相超声溶解并稀释至刻度,摇匀. 供试品溶液:取本品l0片,精密称定,研细,精密称取适量(相 当于氯氮卓50mg),置lOOml容量瓶中,加流动相适量,超声10分钟 使溶解,并用流动相稀释至刻度,摇匀,滤过.精密量取续滤液5ml置 50ml容量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀.
空白溶液:根据处方比例称取各辅料和胆酸钠,按供试品溶液的 制备方法,制备空白溶液.
2.4实验结果按上述色谱条件,分别取对照品溶液,供试品溶液和 空白溶液各201~1,进样检测.在供试液色谱图中,与对照品相应的位 置上有着相同保留时间的色谱峰,而空白溶液在此保留时间无色谱 峰出现,表明没有其它成份的干扰峰,见图l,3.
01234567min
图1空白溶液的色谱圈
医学信息2011年8月第24卷第8期MedicalInformation.Aug.2011.Vo1.24.No.8
图2对照品溶液的色谱图
图3供试品溶液的色谱图(1为氯氮卓)
2.5线性范围精密吸取对照品储备液0.5…357,10ml置50ml容 量瓶中,加流动相稀释至刻度,摇匀,制得氯氮卓浓度为0.5,3,5,7, 10~g/ml的溶液.以峰面积(A)为纵坐标,浓度c(~s/m1)为横坐标进 行线性回归,回归方程为:y=71.294x一0.868,r=0.9992在l10 Il1l浓度范围呈良好线性关系.
2.6回收率实验称取处方比例的空白辅料及标示量80%,100%, 120%的氯氮卓,(相当于氯氮卓O.010,0.0125,0.015g),各精密称取 三份,置250ml容量瓶中,流动相适量,超声使溶解,并用流动相稀 释至刻度,摇匀,滤过.精密量取续滤液5ml置50ml容量瓶中,加流 动相稀释至刻度,摇匀.在"2.2"色谱条件下进样,以峰面积按外标法 计算,求得加入对照品的量,并计算回收率.结果见表1. 表1回收率测定结果(n=-9)
~31LA.M'(mg)测定量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RsD(%) 进样5次,测定峰面积,氯氮卓的RSD为0.47%. 2.8重复性实验精密称取样品,按照供试品溶液制备方法操作,在" 2.2"色谱条件下进样,测定峰面积,计算氯氮卓的平均含量为 4.13mg/片,RSD为0.92%.
2.9溶液的稳定性精密称取样品,按照供试品溶液制备方法操作, 在"2.2"色谱条件下,分别在0…148,24h取2O注入液相色谱仪 测定,测定峰面积,计算氯氮卓的RSD分别为1.42%,表明溶液在
24h内稳定.
2.10样品测定精密称取样品,按照供试品溶液制备方法操作,在" 2.2"色谱条件下进样,按外标法计算样品的含量.测定三批样品,结 果见表2.
表2样品含量测定结果
3讨论
该品种为复方制剂,处方中还含有组成复杂的胆酸钠.多个组分 在常用的十八烷基键合硅胶柱M上保留行为往往相差很大,导致分 离效果不好或分离时间太长.因而我们选用氰基键合硅胶柱进行试 验以缩短保留时间,各组分出峰快,且与胆酸钠及辅料分离良好. 实验过程中为确定最佳的分离条件,尝试了不同的离子对浓度和比 例,进行实验.结果表明,采用乙腈一水相(0.5%庚烷磺酸钠水溶液,磷 酸调pH值3.0)(50:50)时,氯氮卓与辅料及其他成份有很好的分 离.
在实验中我们发现氯氮卓对照品溶液经光照1h,原来的氯氮卓 峰几乎完全消失,而在相对保留时间约1.5处出现一个色谱峰,该未 知物质可能是氯氮卓的光解产物.由此判定氯氮卓对光不稳定,光 照会使之分解,所以实验过程必须避光操作.此外,我们将氯氮卓对 照品溶液超声处理2O分钟后进样,发现氯氮卓峰面积没有变化,表 明氯氮卓对超声是稳定的.氯氮卓在水中微溶,我们选用50%的乙 腈做溶剂,并超声助溶.从回收率试验看,回收率均在98%,102%.对 照品溶液和供试品溶液的制备可以采用超声助溶的方法. 本法操作简便,结果准确,灵敏度高,重现性好,可作为该产品质 量控制的方法.
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