幽门螺杆菌检测试剂盒(原位杂交)幽门螺杆菌检测试剂盒(原位杂交)
规格: 20 人份 50 人份 S30332 S30333 产品型号:
幽门螺杆菌检测试剂盒(原位杂交) 幽门螺杆菌检测试剂盒(原位杂交)
(操作之前请详细阅读此说明书)
检测原理和意义
原位杂交技术的原理是采用荧光、生物素、地高辛等标记的探针,依据碱基互补配对原理,与组织切片、细胞涂片等标本中的靶序列特异杂交,经信号放大及显色后,镜下观察结果。此方法具有很高的灵敏性和特异性。
HP(幽门螺旋杆菌)是一种单极、多鞭毛、螺旋杆状细菌。研究证明,HP是引起胃炎、胃溃疡、胃非何杰金淋巴...
幽门螺杆菌检测试剂盒(原位杂交)
规格: 20 人份 50 人份 S30332 S30333 产品型号:
幽门螺杆菌检测试剂盒(原位杂交) 幽门螺杆菌检测试剂盒(原位杂交)
(操作之前请详细阅读此说明书)
检测原理和意义
原位杂交技术的原理是采用荧光、生物素、地高辛等标记的探针,依据碱基互补配对原理,与组织切片、细胞涂片等标本中的靶序列特异杂交,经信号放大及显色后,镜下观察结果。此方法具有很高的灵敏性和特异性。
HP(幽门螺旋杆菌)是一种单极、多鞭毛、螺旋杆状细菌。研究证明,HP是引起胃炎、胃溃疡、胃非何杰金淋巴瘤和粘膜相关淋巴组织性淋巴瘤(MALT)的主要病因。HP探针是根据HP的特征性基因序列
而成的,配合先进的放大系统和显色系统所组成的原位杂交检测试剂盒,具有很高的特异性和灵敏性,大大超过目前病理科常用的HP检测方法,并且不受细菌形态的影响。
试剂盒提供的材料和试剂
提 供 量 成 份 保存方法 20人份 50人份 1 HP杂交液 -20? 500ul 625ulx2 2 杂交增强液(100×) 4? 60ml 60ml 3 一抗 4? 1ml 2.5ml 4 二抗 4? 1ml 2.5ml 5 HRP聚合物 4? 1ml 2.5ml 6 DAB底物 4? 1ml 2.5ml 7 DAB 4? 20ul 50ul
8 18X18mm盖玻片 4?/室温 20片 50片
30ml 30ml 9 湿盒增效液 4?/室温
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规格: 20 人份 50 人份 S30332 S30333 产品型号:
(注意:HP杂交液请 -20?保存)
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幽门螺杆菌检测试剂盒 幽门螺杆菌检测试剂盒 泰普生物TRIPLEX
用户自备材料和试剂
1. 原位杂交加热器(泰普编号:M10061) 8. 湿盒2个
2. 微波炉 9. 二甲苯
3. 37?恒温培养箱 10. 酒精
11. PBS(pH=7.6) 4. 光学显微镜
5. 移液器 12. 苏木素
6. 计时器 13. 氨水
7. 玻片染色缸和染色架 14.盐酸酒精
实验前需配试剂
A、1X杂交增强液
取适量100X杂交增强液及蒸馏水,按1:99稀释,并将此1X杂交增强液存放于4?备用。
30 B、,湿盒增效液
取湿盒增效液及蒸馏水,按3:7配制成30%湿盒增效液备用。
实验时需配试剂
DAB显色液
50的比依据需要配制DAB显色液,以可覆盖整个组织的量为宜。取DAB与DAB底物,按照1:例混匀,避光保存备用。(现配现用)
操作步骤
1(切片处理:将4um厚度的组织粘附在APES处理的载玻片上,切片于60-70?烘烤60分钟以上。
(建议每次实验同时附加阳性、阴性对照片)
2(脱蜡及水化:
溶液 次数×时间(分)
二甲苯 3 × 10
100%酒精 1 × 3
95,酒精 1 x 3
80%酒精 1 × 3
蒸馏水 1 x 3
(注意:使用过的二甲苯,应相应延长脱蜡时间,以保证脱蜡完全)
(微波处理:将切片放入盛有1X杂交增强液的容器里,微波高火状态煮30分钟,自然冷却2-3分钟。3
(加热过程中,溶液应始终浸没组织。建议适时(每隔5-15分钟)补充杂交增强液)蒸馏水洗涤1
×1分钟,小心擦干组织周围液体。
4(杂交:
(约25 ul,根据组织大小增、减量)(本试剂盒配备,可根据4.1 每张切片滴加适量杂交液,并加盖玻片加入杂交液量进行剪裁);
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幽门螺杆菌检测试剂盒 幽门螺杆菌检测试剂盒 泰普生物TRIPLEX
4.2 放置于95?原位杂交加热器上变性5分钟;
4.3 放入含30%湿盒增效液的湿盒中,37?下孵育4-16 小时。建议过夜(,16小时)以保证低拷
贝样本的杂交效果;
4.4 48?(PBS 预温)浸泡切片,小心移去盖玻片,PBS继续浸泡5分钟;
4.5 48? PBS洗涤3x 5分钟 (轻微振荡容器);
注意:盖玻片规格应与杂交液量匹配, (切片在整个试验过程中要保持湿润状态,防止干片)
5(信号放大与显色:
5.1 小心擦去组织周围液体,滴加适量一抗(约50 ul,根据组织大小增、减量),37?,水湿盒中孵
37? 育30分钟;PBS浸泡3x2分钟(轻微振荡容器);
5.2 小心擦去组织周围液体,滴加适量二抗,室温,水湿盒中孵育(约50 ul,根据组织大小增、减量)
20分钟;室温PBS浸泡3x2分钟 (轻微振荡容器);
,室温,水湿5.3 小心擦去组织周围液体,滴加适量HRP聚合物(约50 ul,根据组织大小增、减量)
盒中孵育30分钟;室温PBS浸泡3x2分钟 (轻微振荡容器)。
5.4 小心擦去组织周围液体,滴加适量DAB显色液,室温,水湿(约50 ul,根据组织大小增、减量)
盒中孵育约10分钟(不同样本的显色时间可能有所差别,建议镜下观察显色过程);室温PBS
浸泡3x2分钟 (轻微振荡容器)。
5.5 自来水冲洗,苏木精复染(可用盐酸酒精分化及氨水返蓝)。梯度酒精脱水,中性树胶封片。
阳性结果判断
:胃小凹和黏膜
面棕褐色着色。
其他事项:
本试剂保质期为12个月。客户在收到产品时请及时检查,如发现有外包装破损、试剂盒成分不全等产品问
,或者在使用过程中有任何疑问,请及时与泰普客户服务中心联系,我们将及时为您解决。
公司信息:
公司名称:福建泰普生物科学有限公司
总部:福建省福州市金山金洲北路7号金山科技企业孵化器7号楼4层 邮编:350002
电话:800-804-8333,0591-2805 3600 传真:0591-2805 3700 研发中心:北京市昌平区北清路中关村生命科学园创新大厦A座207室 邮编:102206
电话:010-8072 0071 传真:010-8072 0072
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操作步骤简表
操 作 参 数 1 二甲苯 3X10’ 2 100%酒精 1X3’ 3 95,酒精 1X3’ 4 80,酒精 1X3’ 5 蒸馏水 1X3’ 6 微波加热 3x10’ 7 蒸馏水 1’ 8 加杂交液 适量 9 变性 95?,5’ 10 30,湿盒增效液的湿盒中孵育 37?,4-16h 11 PBS(用前48?预温)脱片,浸泡 1-5’+5’ 12 PBS(用前48?预温)浸泡 3X5’ 13 加一抗 37?,30’ 14 PBS(37?)浸泡 3X2’ 15 加二抗 室温,20’ 16 PBS浸泡 3X2’ 17 加HRP聚合物 室温,30’ 18 PBS浸泡 3X2’ 19 DAB显色, 室温,2-10’ 20 PBS浸泡 3X2’ 21 自来水冲洗 1’ 22 复染,脱水,封片 常规
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