HPLC测定清开灵注射液中胆酸含量
常增荣,张小茜 (北京市药品检验所,北京 100035)
中图分类号: R917. 401 文献标识码: B 文章编
号: 1001- 2494( 2003) 02- 0155- 01
作者简介:常增荣,女,副主任药师 Tel: ( 010) 66124414
清开灵注射液是由胆酸、珍珠母、栀子等多味中药制成
的复方制剂,具有清热解毒, 化痰通络, 醒神开窍的功效。胆
酸为其君药,故测定其含量具有十分重要的意义。关于胆酸
的含量测定 ,据报道有比色法、薄层扫描法[ 1]、HPLC 及衍生
化后采用HPLC[ 2~ 3]等,采用 HPLC 在 210, 203 nm 波长处直
接测定其含量, 灵敏度低, 基线稳定性差。本研究采用 192
nm 为
波长, HPLC 直接测定胆酸的含量, 结果满意。
1 仪器与试药
1. 1 仪器
高效液相色谱仪: 岛津 LC- 10A Class- VP; 色谱柱:
C18 , YMC- Pack ODS- A( 5Lm , 4. 6 mm @ 150 mm)。
1. 2 对照品
胆酸(中国药品生物制品检定所 ,供含量测定用, 纯度为
99. 57% )。样品: 清开灵注射液 (山西太行制药厂, 批号
000604- 2) ; 乙腈(色谱纯) ;其它试剂均为分析纯。
2
与结果
2. 1 色谱分析条件
流动相: 乙腈-水-磷酸 ( 35B 65B0. 1) , 流速 1. 1 mL#
min- 1 ;检测波长: 192 nm;柱温 40e 。
2. 2 供试品溶液及对照品溶液的制备
2. 2. 1 对照品溶液的制备 精密称取胆酸对照品 10 mg, 置
10 mL 量瓶中, 加 60%乙腈使溶解并稀释至刻度, 摇匀,即得
(每 1 mL中含胆酸 1. 0 mg)。
2. 2. 2 供试品溶液的制备 精密量取本品 10 mL , 加稀盐
酸 0. 5 mL ,用醋酸乙酯振摇提取 4 次( 20, 20, 15, 15 mL) , 合
并醋酸乙酯液,蒸干, 残渣加 60%乙腈适量使溶解, 并定量转
移至 25 mL量瓶中, 用 60% 乙腈稀释至刻度, 摇匀 , 用微孔
滤膜( 0. 45 Lm)滤过,取续滤液,即得。
2. 3 实验条件的选择
2. 3. 1 流动相的选择 曾试用流动相 A: 乙腈-水-磷酸( 50B
50B0. 05) ; B:乙腈-1%磷酸溶液( 40B60) ; C: 乙腈-1%磷酸溶
液( 35B65) ; D: 乙腈-水-磷酸( 35B65B0. 1) , 经实验, 采用流动
相 D时, 样品中胆酸与其他杂质峰完全分离。
2. 3. 2 检测波长的选择 取胆酸对照品用流动相配制成适
宜浓度的溶液,在 190~ 250 nm 波长范围内进行扫描, 结果
在 192 nm 波长处有最大吸收,取浓度为 1. 01 mg#mL- 1的胆
酸对照品溶液,用本实验流动相采用 192 nm 与文献报道的
检测波长 205, 210 nm 同时进行了比较, 结果峰面积依次为
475678, 263125, 214563,
明在 192 nm 波长下测定的灵敏
度高,峰形好, 故选择 192 nm 为测定波长。
2. 3. 3 提取方法的选择 胆酸为胆甾酸类成分, 采用样品
酸化后用醋酸乙酯提取的方法, 经试验提取 4 次可提取完
全。
2. 3. 4 对照品所用溶剂的选择 取胆酸对照品, 分别以流
动相和 60%乙腈溶解, 结果用 60%乙腈溶解较快, 故选用
60%乙腈溶解胆酸对照品。
2. 4 空白试验
按处方中药味的比例, 自配不含胆酸的群药, 按其工艺
制成空白制剂,再按/ 2. 2. 20项制备并测定,结果空白溶液与
胆酸对照品在相同保留时间处未显色谱峰, 故认为无干扰。
2. 5 线性关系考察
精密吸取胆酸对照品溶液( 2. 156 8 mg#mL- 1 ) 1, 2, 3, 4,
5 mL, 分置 5 mL 量瓶中, 加 60% 乙腈稀释至刻度, 摇匀, 分
别精密吸取 10 LL ,注入液相色谱仪, 记录峰面积,以胆酸对
照品进样量(Lg)为横坐标,峰面积为纵坐标, 绘制
曲线,
其回归方程为: Y= 43 468. 7X - 7. 4, r = 0. 999 9。结果表
明,胆酸对照品在 4. 31~ 21. 57 Lg 范围内线性良好。
2. 6 稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液 (批号 000604- 2) , 进样 10
LL ,分别于配制后 0, 2, 4, 6, 8, 12 h,依法测定, 结果表明, 供
试品溶液在 12 h 内基本稳定, RSD= 0. 169%。
2. 7 精密度试验
精密吸取同一供试品溶液 (批号 000604 - 2)进样 10
LL ,连续重复进样 5次, 求得 RSD= 0. 25%。
2. 8 重现性试验
对同一批样品 (批号 000604- 2) 5 份按/ 2. 2. 20 项下制
备, 依法测定, 胆酸平均含量 2. 335 mg# mL - 1 , RSD =
1. 49%。
2. 9 回收率试验
精密吸取已知含量的同一批号的样品(批号 000604- 2,
含量 2. 335 mg#mL - 1 ) 5 mL ,置小烧杯中, 分别精密加入胆
酸对照品 11 mg, 加水 5 mL ,加热并超声处理使溶解后, 定量
转移至分液漏斗中,按/ 2. 2. 20项下制备方法制备及上述色
谱条件,测定, 结果平均回收率为 97. 63% , RSD为 1. 73%。
2. 10 样品测定
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10 LL, 注入
液相色谱仪,依上述色谱条件, 以外标法计算含量。结果批
号为 000604- 2, 000518- 6, 010802- 4 的样品其胆酸含量
分别为 2. 34, 1. 93, 2. 10 mg#mL- 1。
参考文献
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[ J] .中国中药杂志, 1990, 15( 6) : 40.
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研究[ J] .中成药, 1996, 18( 5) : 39.
[3] 李海生,周静远,吴贵华.高效液相色谱法用于中药熊胆真伪
鉴别及质量优劣的评价[ J] .药物分析杂志, 1989, 9( 5) : 284.
(收稿日期: 2001-08- 14)
#155#中国药学杂志 2003年 2月第 38卷第 2期 Chio Pharm J, 2003 Febr uary, Vol . 38 No. 2