实验三血糖的测定
山东医学高等专科学校《生物化学》实验
教研室 生物化学 课程 生物化学实验 专业 2012级临床 指导教师 徐燕
生物化学实验指导 教材 内容 实验三 邻甲苯胺法测定血糖 学时 2
教学
1.掌握邻甲苯胺法测定血糖的原理和方法 目的
和要 1.掌握分光光度计的使用方法
求 教 教学 重点:邻甲苯胺法测定血糖的原理和方法 学 重点难点:分光光度计的原理和使用方法 难点 要
求 教学学生动手操作为主,课堂演示为辅 媒体
复习血糖的来源和去路 旧课
(一)原理
血液中所含的葡萄糖,称为血糖。它是糖在体内的运输形式。目前国内医
院多采用葡萄糖氧化酶法和邻甲苯胺法测定血糖。前者特异性强、价廉、方法
简单,其正常值:空腹全血3.6,5.3毫摩尔/升(65,95毫克/升),血浆为3.9,
6.1毫摩尔/升。后者由于血中绝大部分非糖物质及抗凝剂中的氧化物同时被沉
淀下来,因而不易出现假性过高或过低,结果较可靠,其正常值:空腹全血为
3.3,5.6毫摩尔/升(60,100毫克/升),血浆为3.9,6.4(70,115毫克/升)。
本实验采用邻甲苯胺法测定血糖。其原理是葡萄糖在酸性介质中加热脱水反应
生成5-羟甲基-2-呋喃甲醛,分子中的醛基与邻甲苯胺缩合成青色的希夫氏碱,教讲 与同样处理的标准液进行比色,即可计算出血糖的含量。 学授
过新 (二)试剂和器材
程 课
1.试剂
邻甲苯胺试剂:称取硫脲1.5,溶于750,L冰醋酸中,加邻甲苯胺150,
L及饱和硼酸40,L,混匀后加冰醋酸至1000,L,置棕色瓶中,冰箱保存。
葡萄糖标准溶液:5.0mg/mL,临用时稀释成1.0mg/mL。
2.材料
人血清
3.器材
分光光度计、水浴锅、移液器
1
(三)实验步骤
取3支试管编号后,分别加入试剂,按下
操作:
加入物 空白管 标准管 测定管
0.1 血清 — —
0.1 葡萄糖标准应用液 — —
0.1 蒸馏水 — — 讲
授 3.0 3.0 3.0 邻甲苯胺显色剂 新
课 混匀后,置沸水浴中,加热12分钟,取出置冷水中冷却5分钟。分光光
度计630nm,以空白管调零,读取标准管和测定管的吸光度。
(四)结果与分析
血清葡萄糖(mmol/L)=(测定管吸光度/标准管吸光度)×5
(五)注意事项
(1)试剂成分的质量、邻甲苯胺试剂的新老以及加热温度和加热时间等
都会影响显色强度。因此,测定管、标准管、空白管的加热时间及温度必须完
全一致。
(2)邻甲苯胺法的测定结果基本上与葡糖糖氧化酶法和己糖激酶法相同,
但对尿毒症患者,邻甲苯胺法的测定结果略有偏高。
课堂血糖测定的临床意义 提问
课堂血糖测定的原理和方法 小节
布置利用所学的有机化学知识推导计算公式的来源 作业
《生物化学》潘文干主编(第,版)(人民卫生出版社 参考
《基础医学实验指导》自编 书目
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