开场白就像一本书的书名

2021年蛋白质含量测定双缩脲试剂法实验报告2021年蛋白质含量测定双缩脲试剂法实验报告PAGE/NUMPAGES2021年蛋白质含量测定双缩脲试剂法实验报告生物化学试验汇报姓名:学号:专业:组别:生物化学与分子生物学试验教学中心试验名称蛋白质含量测定——双缩脲试剂法试验日期试验地点合作者指导老师评分老师署名批改日期试验目1.1.掌握双缩脲测定血清总蛋白基础原理、操作;1.2.掌握双缩脲试剂配制;1.3.熟悉血清总蛋白临床意义;1.4.了解双缩脲法测定血清总蛋白特点和。二、试验原理2.1.两分子尿素加热脱氨缩合成双缩脲（H2N-OC-NH-CO-NH2）,因分子内含有两个邻接肽键,在碱性溶液中可与Cu2+发生双缩脲反应,生成紫红色络合物。2.2.蛋白质分子含有大量相互相连肽键（-CO-NH-）,一样能在碱性条件下与Cu2+发生双缩脲反应,生成紫红色络合物,且在540nm处吸光度与蛋白质含量在10～120g/L范围内有良好线性关系。三、与方法:3.1.试验材料:3.1.1.试验试剂:①小牛血清;②6.0mol/LNaOH溶液;③双缩脲试剂:硫酸酮、酒石酸钾钠、碘化钾;④蛋白质液（70g/L）;⑤0.9%NaCl;⑥蒸馏水。3.1.2.试验器材:①试管;②烧杯;③容量瓶;④加样枪;⑤刻度吸管;⑥玻璃棒;⑥1100分光光度计;⑦电子天平;⑧水浴锅。3.2.试验步骤取3支试管,做好标识,按下表操作:加入物（ml）B（空白）S（标准）U（待测）小牛血清（1:10）--0.5蛋白质标准液（1:10）-0.5-0.9%Nacl0.5--双缩脲试剂4.04.04.0a.各管混匀,观察各试管颜色;b.将各试管置于37℃水浴锅中加热20min,观察颜色;c.将试管中液体倒入比色杯中,置于1100分光光度计样品槽内,在波长540nm,以空白管调零,测S和U管吸光度;d.测定结束后,将比色杯中样品回收进试管。依据公式算出结果:四、结果与讨论:4.1.试验现象:①选择三支洁净无损试管,从左往右依次加入0.9%氯化钠溶液、蛋白质标准液、对应小牛血清各0.5ml,分别命名为B试管、S试管和U试管,再分别向三支试管内加入4ml双缩脲试剂,溶液均成蓝色透明状。②将三支试管放入37℃水浴锅中加热20min,取出后,B试管呈淡蓝色,S试管和U试管均成浅紫色,且S试管颜色比U试管颜色深。（如图一）图一水浴后三支试管颜色图二分光计读数测定次数4.2.试验数据123平均吸光度管号管号S0.1850.1840.1850.1847U0.1520.1510.1520.1517结果计算:代入公式:血清总蛋白（g/L)=(Au/As)X蛋白质标准液浓度（g/L),得出结果:血清总蛋白=57.493g/L。4.3.结果讨论经查阅资料得:正常成人血清总蛋白含量为60～80g/L,而小牛血清总蛋白含量比正常成人血清总蛋白含量略低一点,此次结果得出小牛血清总蛋白含量为57.493g/L,符合情况。4.3.1.成功原因:①此次试验试剂混合水浴后出现了预期效果:B试管呈淡蓝色,S试管和U试管均成浅紫色,且S试管颜色比U试管颜色深。B试管呈淡蓝色是因为B试管中没有发生任何反应,所以展现双缩脲试剂原来淡蓝色,而S试管和U试管呈浅紫色是因为试剂中蛋白质和双缩脲发生了双缩脲反应而呈浅紫色。②吸光度测试后得到数据,经计算后得到了预期中结果,是因为前面操作严谨。4.3.2.误差①三次反复测定过程中出现了部分浮动数据,可能是因为仪器本身存在可许可误差范围。②第一次尝试使用分光光度计时候得到了负值,经查明是因为放置在其内比色杯将磨面对准了通光面,经调整后,取得了正确数据。4.4.课后复习题4.4.1.什么叫双缩脲试剂？为何要在双缩脲试剂中加入酒石酸钾钠和碘化钾？答:双缩脲试剂是一个用于判定蛋白质分析化学试剂,碰到蛋白质显紫色。它是一个碱性含铜试液,呈蓝色,由0.1g/mlHYPERLINK""\t""氢氧化钠或HYPERLINK""\t""氢氧化钾、0.01g/mlHYPERLINK""\t""硫酸铜和HYPERLINK""\t""酒石酸钾钠配制。硫酸铜、酒石酸钾钠碱性溶液中会生成紫红色络合物,在这种百分比碱性水溶液中,原来形成Cu(OH)2会与溶液中多出OH-形成[Cu(OH)4]2-络离子,酒石酸钾钠作用就是保护这种络离子不被析出变为沉淀,向试剂中加入碘化钾,可延长试剂使用寿命。4.4.2.试剂配制过程中,为何NaOH要单独配制,最终加入？答:先单独加入NaOH溶液是为了营造一个碱性环境,在碱性环境下双缩脲试剂B中Cu2+与蛋白质肽键络合产生颜色反应.假如先将双缩脲试剂A与双缩脲试剂B混合,即NaOH与CuSO4溶液混在一起,那么就会产生Cu(OH)2沉淀,药剂就会失去作用,看不到效果,也就无法判定是否存在蛋白质.4.4.3.简述血清总蛋白测定临床意义。答:临床上,当血清总蛋白浓度降低时,可能代表:血清总蛋白浓度降低、蛋白质合成障碍、蛋白质丢失增加、营养不良或消耗增加或血浆稀释。当血清总蛋白浓度增高时,可能代表:因多发性骨髓瘤而引发蛋白质合成增加或因脱水、休克而引发血浆浓缩: