【doc】BXSB小鼠胸腺内B细胞异常增生机理的初步分析

【doc】BXSB小鼠胸腺内B细胞异常增生机理的初步分析 BXSB小鼠胸腺内B细胞异常增生机理的初 步分析 f1/t{ 潍坊医学院1996年第18卷第3期l91 BXSB小鼠胸腺内 B细胞异常增生机理的初步分析 丝堡'. (免疫学教研室261042北京医科大学免疫学系) 摘要采用H—TdR掺八法检测了不同月龄与性别BXSB小鼠胸臃中B 细胞的增殖反应,初步分析B细胞异常增生的机制.结果显示发病的BXSB小 鼠胸腺B细胞具有自发增殖能力,此与正常小鼠不同,而其对LPS的应誉增殖 反应较正常小鼠高2.5倍以上.发病的BXSB小鼠胸腺基质细胞对其B细胞 的增殖无任何影响.实验结果表明发病BXSB小鼠胸腺B细胞的增加与其奉 身的异常有关,而非胸腺基质细胞的作用. 关键词BXSB小鼠1胸腺}B细胞;基质细胞j增殖反应l一一——, BXSB小鼠能白发地出现类似于人类 系统性红斑狼疮(SLE)样临床表现和免疫 病理变化,因而是研究人类SLE发病机理 的良好动物模型雄性BXSB小鼠的 SLE发病(2月龄)较雌性的(月龄)早且 严重,这与其Y染色体连锁的自身免疫增 强基因(Y—chromsomelinkedaution muneaccelerator,Yaa)有关.以前,在 对BXSB小鼠研究时曾报道过高月龄雄 性BXSB小鼠啕腺内含有较多的B细 咆.进一步研究发现BXSB小鼠胸腺内B 细咆和Ig分泌细咆(IgSC)的升高与其 SLE的发病程度呈正相关,且主要是IgG 类型的IgSC.实验在此基础上对BXSB 小鼠胸腺内B细胞异常增生的机制作了 初步分析. 1材料与方法 1.I动物BXSB小鼠由北医大三院自 美国Jackson实验室引进. 1.2膊腺B细胞的纯化按文献方 法,首先用Thy】单抗加补体去除啕腺 细胞,然后再用包被有抗小鼠IB的平皿亲 和纯化B细胞.用直接IF法测定B细胞 的纯度. 】.3胸腺基质细胞的纯化按文献方 法",用胶原酶等消化胸腺组织,然后重复 用小牛血清梯度分离纯化啕腺基质细咆. 用瑞氏染色法鉴定基质细胞的纯度. 1.4细胞增殖试验按常规的H—TdR 掺入法,测定cpm值. 2结果 2.j胸腺B细胞自发增殖能力的比较 本实验所用啕腺B细胞均从,6只小鼠 胸腺中纯化而来,并调整成相同的细胞浓 度(3X10'细咆/孔).不加任何刺激剂,自 发增殖24h,结果见图I.' 从图1可见1月龄雌性BXSB小鼠 (未发病)的啕腺B细胞培养24h和72h, 其cpm值无明显变化.表明无自发增生能 l| l92雌坊医学院1996年第18卷第3期 力.8月龄雄性BXSB小鼠(已发病)的胸 腺B细咆培养24h和72h,其cpm值显着 增加.显示存在自发增生能力,类似于其脾 B细咆的自发增生特性. 2.2胸腺B细胞对脂多糖(LPS)应答增 殖能力的比较实验中B细胞的来源及 浓度同上,另外每孔中加入4Og/m】 .结果 LPS0.1mI,培养72h测定cpm值 见图2. 经多克隆B细咆激活剂LPS刺激,8 月龄雄性BXSB小鼠(发病)啕腺B细胞 的cpm值与其脾B细咆的cpm值相似. 但显着高于1月龄雌性BXSB小鼠(未发 病)胸腺B细咆的cpm值,表明发病的 BXSB小鼠晦腺B细咆对LPS的增殖应 答能力高于未发病的小鼠晦腺B细胞. 2.3混合细胞培养结果1月龄雌性 BXSB小鼠(未发病)的胸腺B细咆(3× 10细咆/孔)中加或不加8月龄雄性 BXSB小鼠(发病)的晦腺基质细胞,混合 培养72h,测定cpm值.实验结果表明加 或不加发病的BXSB小鼠胸腺基质细胞 对未发病的BXSB小鼠啕腺B细胞的增 殖无显着影响,即无促进啕腺B细胞增生 的能力. 3讨论 近年来,人们认为正常小鼠晦腺中也 存在极少量的B细胞及其前体细胞,并参 与T细咆的选择发育过程.发病的 BXSB小鼠胸腺内B细胞和IgSC增多,并 且与其SLE的严重程度呈正相关.本实 验结果表明发病的BXSB小鼠胸腺B细 胞具有自发增生的能力,并且与其脾B细 胞相似;对多克隆激括剂LPS的应答增殖 能力也显着增高.正常小鼠晦腺内存在的 极少量B细胞的自发增殖能力和对LPS 应答增殖的能力显着低于其脾B细咆. 因此,发病的BXSB小鼠晌腺B细胞也具 有高活性.B细胞高活性是SLE小鼠的 显着特征之一.晦腺基质细咆以其表面分 子和分泌的细胞因子调控T细咆的发 育但是,发病的BXSB小鼠胸腺基质细 咆对正常小鼠的胸腺B细咆无促进增殖 的作用.本实验结果初步提示发病的 BXSB小鼠胸腺内异常增多的B细胞不同 于正常小鼠胸腺内的B细2乜,其异常增多 的原因可能与其本身的高活性相关,而与 晦腺基质细胞无直接关系.由于SLE小 鼠的B细胞高活性受其本身的基因异常 等多种因素的影响,因此,BXSB小鼠胸腺 内B细咆增多的机理需进一步深入研 究. (本文经李在连教授审阅,特此致谢.) 参考文献 1Theofi[opoulosAN?DixonFJ.Marinemodelsor systemiclupuscrythmOSUS.Adr,…_Df.1985: 37:269 2棣志伟邓鸿业.邓玉兰.等.BXSB小鼠胸腺内单克 隆g分泌细胞的分离与鉴定.北京医科太学. 1993;25(6):433 3NakanishiK.HowardM.MuraguchiA.eta__ SoIuablefactorsinvoLvedinBceildifferentiation= ldentifieti0noftwodistic【Tcc_】replacing factorsJml….1983;130(5):2219 G.drfvDI.Iz0nDJ.TucekCL.e【aITh pherlolyplchuterogeneityofm…thymicstroma[ ?II.,l0f..1990I70(1):66 j母志伟.胸腺中细胞的存在与作用.固卟医学免疫 学分册.1993;16(2):82 (收稿E:i期I995—04—29) (奉文图l,2见第205页) 雌坊医学院1996年第18卷第3期193 THEPRELIMINARYANALYSISoFTHEABNoRMAL PRoLIFERAT10NMECHANISMoFBXSBMOUSETHYMICBCELL XuZhiwei,DengHongye DezJartrneJttof,m】【0.9+261042 BXSBmoLiseisOgleofSLEmodels.AsBXSBmousegetsrfloreseriouslyill,the amountofitsthymicBeel1andIgSCraisesabnormally.Forthisre~son,thefunctionof thethymicBcellofthesickmaleBXSBmicewereexamined,includingthespontanOUS proliferationandresponsiveproliferationtoLPS.Theresultsshowthattheabnormal increaseofthethymicBcelIsofthesickBXSBmouseispossiblyduetoitsthymicBeelI, nottotlxymicstroma~cel1. KEYWORDSBXSBmouse;thymus;Bcell;stromalcell;proljferation 蜜蜂螫伤致过敏性休克1例 周茹卿郭清风 (文登中心匡院264400) 病人,女+l2岁,固左手食指被蜜蜂螫 伤两处+伴头晕,恶心,呕吐30min而来院 急诊+途中不省人事,口吐白沫.查体:病 人神志不清,血压8.7/7.3kPa+心率1】3 次/rain,律整呼吸25次/rain,双肺闻及 湿罗音.面色苍白+四肢发凉,口唇紫绀. 诊断:蜂螯伤并过敏性休克.处理:首先挑 出蜂刺.用2葡萄糖20m],氟美橙 LOmg静注{0.1肾上腺素0.5ml皮下 注射.10葡萄糖酸钙lOml,静脉注射,并 根据血压变化情况用升压药,维生素C等 治疗,约25min后+病人面色转豇润,血压 10.6/8kPa.30min后神志清醒,血压正 常+双肺湿罗音消失. 讨论蜂的尾部有刺囊和刺针,刺八 皮肤后放出毒液,毒液主要成分有蚁酸,神 经毒素,组织胺等.多数情况下蜂螯伤仅 有局部红肿,刺痛,数小时后可自愈,少数 人可发生局部水泡或坏死+严重螯伤后可 有全身症状.如发热,头痛,恶心,呕吐,腹 泻,烦躁等症状+继而肌痉挛昏迷,对蜂毒 过敏者即可出现过敏反应,严重者可出现 过敏陛休克危及病人生命. 抢救时应首先挑出毒刺.避免用力挤 压,局部可用肥t水或3氨水或5碳酸 氢钠溶液清洗,以中和毒素.疼痛严重+可 用止痛药对症治疗,酌情用抗组织胺类药 物.如非鄢根盐酸苯海拉明等. 关键词蜜蜂;过敏性休克;螫伤 (收稿日期1996—05—12)