!"#$%&’() *+, -’.!&/0 "+,.%&/0 +’ 123 4552
中图分类号:!"#$%& 文献标识码:’ 文章编号:$((")(*$*(+((&)(&)(((,)(+
禽流感6*789: ":;<=>:?9,*"@是由禽流感
病毒 6*"#@引起的一类烈性传染病,几乎所
有的野生及家养禽类都可感染。高致病力禽
流感 6A-*"@被国际兽医局列为 " 类烈性传
染病,一旦爆发会给养禽业带来毁灭性的危
害。BCD2 年美国禽流感和 BCCE 年墨西哥禽
流感造成相当于现今 B5 多亿美元的经济损
失。BCCD 年伊朗爆发了 AC+4 亚型禽流感,
其损失可达 B555 万美元。BCCC 年 2 月香港
卫生署从患病儿童身上分离到 AC+4亚型禽
源流感病毒,以及 BCCF 年香港禽流感 AE+B
病毒“杀人”事件,赋予了 A-*"# 全新的公
共卫生意义。最近,哈尔滨兽医研究所相继
从家禽中分离到 AE亚型禽流感病毒,并且
均对鸡呈高致病力,说明 A-*" 已经在我国
个别地区出现,并且有在一定范围内爆发的
可能。
$ -./的分类及 01-./的划分
*"# 属 * 型流感病毒,根据
面粘蛋
白的血凝素的不同可分为共 ABGABH 共 BH
个亚型,根据表面糖蛋白的神经氨酸酶的不
同可分为 +BG+C 共 C 个亚型,目前发现的
A-*"# 都是 AE 和 AF3其绝大多数又是非致
病性的。
国际禽病组织 ’"$ 对 A-*"# 从 2 方面
给予了定义:6B@ 任何 *"# 如果给 D 只 IGD
周龄的易感鸡接种 B5 倍稀释的尿囊液毒
5J4K<,于 B5L 内死亡等于或大于 H 只,即认
为是 A-*"#;64@如果一个毒株不是 AE和 AF
亚型,但能致死 BGE 只鸡,则需要做细胞培
养;在不加胰酶的情况下,观察 (-$ 和蚀斑
形成,如果均为阴性则可以认为该毒株不是
A-*"#。 62@ 对所有低致病性 *"# 和其它
*"#,如果不加胰酶能够在细胞上生长,则
要测定血凝素联结肽的氨基酸序列,如果序
列与其他 A-*"# 类似,则认为是 A-*"#,
该定义弥补了过去仅凭死亡率定义的缺陷。
但也有可能出现上述 2 项相互矛盾的情况。
以往曾发生过在试验室证明是非致病性
*"#,在田间却引起了 H5MGD5M的死亡,而
直接实验室证明是高致病性的 *"#,在田间
却仅引起了 B5M的死亡。
+ 流行特点
*"# 广泛分布于世界范围内的诸多家
禽和野禽中,同时也感染人和猪、马以及鲸
鱼、雪豹等多种哺乳动物。%N9<< /:>OPN等报
道,已发现的带毒鸟类达 DD 种,实际能感染
的鸟类可能大大超过这个数字。家禽中以火
鸡最为易感。尽管商品鸭中 *"感染较多见,
但也只有 BCFH 年在澳大利亚和 BCD2 年在
爱尔兰发生过 A-*"。
目前,对于 A-*"# 的传播机理尚不明
确。许多研究者认为,无论是通过呼吸道感
染还是肠道感染,病毒传播似乎都与释放出
来的病毒数量有关。但 A-*"# 由于迅速致
死动物,在感染过程中几乎没有排毒过程。
因此,无论在自然界还是通过实验感染,
A-*"# 从感染动物传给易感动物的能力都
比 *"# 要差。水可能是重要的传播媒介,鸟
和水禽的粪便是重要的毒源。候鸟迁徙是主
要散毒途径,哺乳动物和其他动物应当考虑
为 A-*"# 的一种潜在毒源,对家禽来讲,人
是最主要的机械传播者,观赏鸟的进出口、
空气传播等也可能为 A-*"# 提供流行途
径。
& 临床症状及病理变化
A-*" 以突然死亡和高死亡率为主要特
征,病程较长者可出现头和面部水肿,冠和
肉垂发绀,脚鳞出血等症状。剖检后,突然死
亡者无明显病理变化,病程稍长者,可见出
血性病变,常见的有喉头气管出血、有粘液,
心冠脂肪点状出血、心包脚厚、心肌迟缓且
柔软。腺胃乳头出血、溃疡,在腺胃粘膜上有
一层脓性分泌物等病变。整个肠道、尤其是
十二指肠、直肠和泄殖腔出血严重。胰脏常
有出血或坏死斑。肾脏常肿胀、有尿酸盐沉
积。脾脏偶有肿胀或出血等。法氏囊有时会
有出血、肿胀或萎缩。青年禽或成禽的生殖
系统病变严重,主要表现为卵黄性腹膜炎,
卵泡膜出血,严重者卵黄变黑、变形、破裂,
输卵管子宫部形成米粒大的水肿。
* 01-./的分子基础及致病机理
*"# 的表面糖蛋白血凝素 6A*@是病毒
致病力的主要决定分子。*"# 感染细胞的先
感染的角色,肺炎支原体感染
后使得蓝耳病病毒和 *-- 等
细菌的感染更加容易。肺炎支
原体感染后,在支气管周围会
有淋巴小结增生聚集,进一步
感染会使机体的中性粒细胞及
淋巴细胞和巨噬细胞趋向集中
到支气管腔及肺部,这样就给
-//% 病毒在肺部持续感染和
破坏营造了良好环境,降低肺
泡巨噬细胞对病原的吞噬和清
除能力,使肺脏对继发细胞感
染的抵抗力下降,导致呼吸道
免疫系统被抑制;感染猪则逐
渐消瘦而后成僵猪或死亡,此
时虽用再好的药物及疫苗往往
也不见效,最好的办法是将重
病猪淘汰,避免病原持续散播。
肺炎支原体与蓝耳病病毒
的关系比较复杂,以下的试验
结果给了我们一些启发:6B@感
染试验:支原体感染,无论在任
何时间6蓝耳病感染前、支原体
与蓝耳病同时感染或蓝耳病感
染后 @,均可使蓝耳病肺炎加
重,病程延长;如受蓝耳病和支
原体双重感染的猪,在感染后
2DL 仍能看到明显症状;若仅
有蓝耳病,感染后 2 周症状就
基本消失。另外蓝耳病感染也
会加重支原体肺炎症状并使病
程拖长。尽管支原体引起的疾
病较轻微,但它却是 -/,( 的
主要诱发者,因此即使猪群发
生低水平支原体感染,也能使
蓝耳病很快表现出临床症状。
64@免疫试验:注射支原体疫苗
可同时降低支原体和蓝耳病混
合感染后的肺炎病变,也就是
说免疫后不但可以预防支原体
感染,而且对减轻蓝耳病病毒
感染也有作用。不过,在注射支
原体疫苗前已受到蓝耳病病毒
感染或注射疫苗后紧接着感染
蓝耳病或一周内再注射弱毒疫
苗,这些都会降低支原体疫苗
的保护效果。
由上可知,两者关系密切,
支原体肺炎的控制成败易受蓝
耳病影响,蓝耳病也会因支原体
感染而变本加厉。总之,肺炎支
原体和蓝耳病病毒在 -/,( 中
扮演着非常重要的角色,这也正
是预防 -/,(的关键所在。
高致病力禽流感综述
杨翠华 宫新城 韩永卫 钟秀会 6河北农业大学,河北 保定 5FB55B@
收稿日期:4554QB4Q25
·兽医专辑·疾病综述
HQ Q
畜禽业 !""# 年第 # 期 总第 $%% 期
决条件是 &’ 能否被裂解为 &’$和 &’!。当 ’() 吸附到细胞
膜受体上时,被称为“融合肽”的 &’!* 末端可插入细胞膜的
脂质双层,在病毒囊膜和细胞膜之间形成一个通道,两膜进
一步融合,病毒核酸得以进入宿主细胞。在病毒复制过程中,
&’ 基因可指导合成一条约 %+" 个氨基酸肽链,在加工过程
中切除 * 末端信号肽后,剩余的肽链可被细胞内蛋白酶裂解
为 &’$ 和 &’!,这两条肽链以二硫键相连,形成一定的空间
结构位于病毒的囊膜表面。如果细胞内缺乏相应的蛋白酶,
&’ 不能裂解为 &’$和 &’!,所产生的病毒离子将不能入侵
其他细胞,这样病毒的感染将局限于一定的细胞内。通过研
究发现 &,’() 血凝素裂解位点上有多个碱性氨基酸,所以可
被组织内多种蛋白酶识别并切割,从而决定了高致病力毒株
在机体的广嗜性,其结果 &,’() 迅速突破器官屏障而造成全
身性感染,甚至导致宿主的死亡。
此外裂解位点附近的糖链也可能影响到酶对 &’ 的裂
解。$-.# 年在美国宾夕法尼亚州流行的低致病性 &%*!与后
来大爆发的高致病力毒株之间的核苷酸及氨基酸分析表明,
两者在裂解位点上均具有相同的碱性氨基酸序列,不同的是
高致病力毒株仅在一个糖基化位点发生病变,失去一个寡糖
链。该寡糖链应位于 &’$和 &’!裂解位点附近。它的存在可
能导致蛋白酶裂解作用的发生。如果裂解位点插入碱性多肽
序列,也可能使其对裂解的敏感性增加,而引起致病性增强,
美国东南禽病研究所的 ,/0123 等对墨西哥中部爆发 &%*!毒
株的研究表明,自然发生的非致病性 ’() 可通过碱性氨基酸
在血凝素蛋白裂解位点的迅速插入而获得高致病性的表现
型。这种外源碱性氨基酸的插入现象在流感病毒的适应和进
化过程中普遍存在,也是高致病力毒株产生的重要原因之
一。
! 实验室诊断
由于 &,’( 临床症状和剖检变化差异较大且无特异性,
所以确诊要靠病原学和血清学等实验室检查。
!"# 病原学检查
%4$4$ 病原分离:以棉拭子从泄殖腔中采集病料,放入加有抗
生素的无菌培养液中,最好在低温567或89"7:或以液氮或干
冰保存。病料样品在保存或运送前可制成 $"; < =的悬液,低速
离心、澄清。通常用于分离病料的材料是 >,?鸡胚。取处理好
的病料 "4#@A,以尿囊腔途径接种 -B$$ 日龄鸡胚,#97孵化
61,弃去 !6C 死亡鸡胚,收获剩下的活胚及死胚尿囊液。系列
稀释后测定血凝效价,阳性者证明有 ’() 存在,然后进入禽
流感病毒分型鉴定。初代尿囊液和血凝实验结果如为阴性者
再传 $ 代,再测血凝效价,仍为阴性是判为 ’(阴性;传代后测
血凝效价为阳性时,需做进一步鉴定实验。
%4$4! 毒力鉴定:’() 的毒力可以通过实验动物测得,也可利
用分子诊断技术结合序列分析从实验室直接获得。常规实验
中一般采用静脉接种致病指数5(),(:测定法来衡量分离毒的
致病型。其方法为取经纯化的 $" 倍稀释的感染 ’(及胚尿囊
液,以 "4!@A <只的剂量接种 $" 只 +B. 周龄 >,? 鸡,观察 $"1
后计算 (),(值。当 (),(值大于 $4! 时,断定此分离株为 &,’(
病毒株。该方法进行感染病毒的毒力测定需在病毒分离的基
础上,整个过程至少需要 # 周以上。哈尔滨兽医研究所详细
分析了 ’() 遗传变异及其分子结构与致病性的关系,在此基
础上利用 DE8,FD 技术结合序列分析,攻克了 ’( &%和 &9亚
型病毒高低致病力鉴别的分子诊断技术,该法在一周内便可
确定感染的 &%或 &9亚型禽流感是高致病力还是低致病力。
目前一般认为核酸序列分析方法似乎是一种更准确可行
的方法。特别是它能从分子水平提示 &,’() 甚至潜在的
&,’() 毒株。陈福勇等采用 DE8,FD 法从禽流感 ’ <鸡 <北
京 < $ < -+5&-*!:株克隆了核蛋白5*,:基因。将其序列与数株 ’
型流感病毒 *, 序列进行比较,相互间同源型在 -%46GB
-+4+G。这一结果为研究核酸探针和其他方法诊断禽流感奠
定了基础。吴清民等将 ’() &-*!亚型毒株 *,基因 #’端较为
保守的、约 #%"HI 的编码序列通过限制性内切酶 &J/((( 切
割、分离后制备成探针,可特异性的与 ’ 型流感病毒的基因
组 D*’ 或含有该病毒核蛋白基因 3K*’ 的重组载体结合。贾
永清等对 &,’( 分离株 ’ < LMMN/ < L2JO;1MO; < # < -+ 5&%*$:&’
基因进行了序列测定,并对其核苷酸和所推导的氨基酸序列
与有关的 &% 亚型毒株进行了比较分析。张建林等也对 * <
LMMN/ < L2JO;1MO; < $ < -+5&%*$:病毒株进行了全基因克隆和序
列分析。
!"$ 血清学鉴定
’() 能凝集马、驴、山羊、绵羊的细胞,且血凝性不能被新
城疫和减蛋综合症的抗体抑制,而能被 ’(的抗体所抑制,则
分离的病毒可能是 ’()。’() 血凝素亚型的鉴定必须通过
’() 与 &$B&$+亚型的抗血清进行 &( 试验,鉴定毒株的血凝
素亚型。也可用酶联免疫吸附试验5P=(>’:以酶标记抗原5抗
体:与抗体5抗原:反应,通过显色反应检测相应抗体或抗原。
全病毒 P=(>’ 和斑点 P=(>’ 长期以来被广泛应用于 ’(
的实验室诊断中。李海燕等以重组杆状病毒表达的禽流感病
毒和蛋白50*,:为包被抗原,建立了 0*,8P=(>’ 诊断技术,可
检测禽流感病毒各亚型阳性血清,并能检出已知各亚型 ’( 病
毒株及所有变异 ’(病毒株的阳性血清。
% 防制
虽然目前 &,’() 毒株比较少,但其危害性相当大,所致
疫病爆发时造成鸡群突然死亡和高死亡率。因此我们应该利
用分子诊断技术及时发现高致病力和潜在致病力的高致病力
毒株,及时捕杀。鉴于水禽在贮存并传播 &,’() 等方面的意
义,定期检测鸭等水禽体内及水中的 ’() 存在情况,对于预
防控制 &,’(的爆发或流行将有十分重要的意义。同时 &,’(
病程较长时,除了与鸡传染性法氏囊、传染性支气管炎、减蛋
综合症等病毒混合感染外,几乎无一例外的存在大肠杆菌的
感染史,在诊断和防制时应引起注意。
目前对 &,’( 仍不主张治疗,而对温和型禽流感也无可
靠的治疗方法。盐酸金刚烷胺对低致病性毒株引起的温和型
禽流感有一定防治效果,可在感染前数日或感染早期应用。而
中药预防和治疗现在仍未见有报道。清热解毒药如板蓝根、葛
根、大青叶、双花、连翘、公英、射干、山豆根等,能否对于预防
和控制 ’() 有一定作用,可能需要进一步的研究。
对于 &%和 &9亚型以外的 ’(防制,应结合我国的国情,
采取预防为主的防制策略。除进行常规防制外,疫苗免疫是控
制禽流感疫情的关键环节、主动措施和最后防线。目前全国
&-亚型禽流感的疫情基本明了;农业部制定研制的禽流感灭
活疫苗安全有效。$--% 年墨西哥 ’( 的有效扑灭正是籍助长
达 # 年的 . 亿 % 千万羽份禽流感灭活疫苗的预防注射。现在
常用的疫苗有:弱毒疫苗、灭活油乳剂疫苗、亚单位疫苗、重组
活载体疫苗、核酸疫苗等。
参考文献&略’
·兽医专辑· 疾病综述
98 8