达斯玛保丸质量标准研究

达斯玛保丸质量标准研究 ? 62?ChilieSeJourna1ofInformationonTCM0ct.201lVo1.18No.10 达斯玛保丸质量标准研究 李玲莉,王兰霞.,倪琳.,杨锡.,张妍.,张晓萍3,田喜莲 (1.甘肃中医学院,甘肃兰州730000;2.甘肃省食品药品检验所,甘肃兰州730000; 3.兰州大学药学院,甘肃兰州730000;4.甘肃奇正藏药有限公司,甘肃兰州730000) 摘要:目的建立达斯玛保丸的质量标准.方法采用薄层色谱法对处方中木香,紫草茸,翼首草, 藏茜草, 安息香进行定性鉴别;采用高效液相色谱法测定诃子中没食子酸的含量.结果薄层色谱鉴别 方法专属性强,阴性无 干扰;没食子酸在0.485,4.850lag内呈良好线性关系(,=0.9993),平均回收率为 99.31%,RSD=1.12%(//=9). 结论本方法准确,简便,专属性强,重复性好,可用于达斯玛保丸的质量控制. 关键词:达斯玛保丸;薄层色谱法;高效液相色谱法;没食子酸;质量标准 D0I:10.3969/J.iSSI1.1005—5304.2011.10.024 中图分类号:R284.1文献标识码:A文章编号:1005—5304(2011)10—0062—03 StudyonQuMityStandardforDasimabaoPillsLILing...1i,WANGLan—xia2,NILin,YANGXi.,ZHA NGYah., ZHANGXiao—ping,TIANXi—lianrJ.GansuCollegeofTCM,Lanzhou730000,China2.GansuInstituteforFoodand DrugControl,Lanzhou730000,China;3.SchoolofPharmacy,LanzhouUniversity,Lanzhou730000,China4.Gansu CheezhengTibetanMedicineCo.,L融Lanzhou730000,China) Abstract:0bjectiveToestablishthequalitystandardofDasimabaoPills.MethodsRadix Aucklandiae,LacLacca,Hookerwingheadroot,RadixEtRhizomaRubiaeandBenzoinwere identifiedbyTLC.ThecontentofgallicacidinDasimabaoPillswasdeterminedbyHPLC.ResultsThe characteristicofidentificationbyTLCwasdistinctandhighlyspecific.Thelinearrangeofgallicacid was0.485—4.850lag(r0.9993).Theaveragerecoverywas99.31%andRSDwas1.12%(/7.=9). ConclusionThemethodisaccurateandconvinient,withgoodspecifityandreproducibility,andcanbe usedforthequalitycontrolofDasimabaoPills. Keywords-DasimabaoPills;TLC;HPLC;gallicacid;qualitystandard 藏药达斯玛保丸(藏文读音:达斯玛保日布)收载于《中华 人民共和国卫生部药品标准(藏药)》(第一册),由诃子,木香, 藏木香,紫草茸,翼首草,藏茜草,安息香,麝香等15味药组 成,具有清热解毒,消炎杀疠等功效,用于脑膜炎,流行性感冒, 通讯作者:王兰霞,E-mai1:lanxia—wang~163.com 肺炎,咽炎,疮疡,各种瘟疠疾病.其原标准项下没有鉴别项 和含量测定项.为了有效控制产品质量,本研究采用薄层色谱 法对木香,紫草茸,翼首草,藏茜草,安息香进行了定性鉴别, 用高效液相色谱法对达斯玛保丸中没食子酸进行了含量测定. 1仪器与试药 LC2010A高效液相色谱仪(日本岛津);KQ250B型超声器 3讨论 对盐酸麻黄碱的含量测定,虽然2005年版《中华人民共和国 药典》(一部)中麻黄药材含量测定项下流动相为乙腈一0.1%磷酸 (9:87),但由于本方成分复杂,干扰因素较多,主峰分离效果不 佳,拖尾严重.我们通过预试验,将流动相中乙腈和水的比例作了 调整,改为乙N-o.I%磷酸(4:96),峰形对称,符合检测要求. 本试验分别采用不同体系和比例的流动相进行色谱分离:乙 腈一0.1%磷酸(7:93),乙腈一0.1%磷酸(6:94),乙腈一0.1%磷酸 (5:95),乙腈,0.1%磷酸(4:96),乙腈一0.1%磷酸(3:97).结果 明,以乙腈一0.1%磷酸(4:96)为流动相分离盐酸麻黄碱能得到 的分离效果最佳,峰形对称且柱效高,故选择本系统作为流动相. 选用色谱柱:Hypersi1ODS2柱(250mmX4.6mm,5pro),大 连依利特科技公司,柱号:E1922458;BenetnachC.柱(250mmX 4.6mm,5lam),柱号:E25053;BenetnachCl8柱(250mm×4.6mm, 5lam),江苏汉邦科技公司,柱号:C9803563.分别采用同一体 系和比例的流动相甲醇一水(23:77)进行色谱分离,结果表明 以本试验所用色谱柱分离效果为佳. 为确定供试品溶液最佳提取制备条件,采用(3)正交表进 行正交设计,对提取溶媒,提取方式,提取次数,提取时间进行 考察,各因素对试验结果均无显着影响.经直观比较分析,从省 时,节约,提取效率高,盐酸麻黄碱提取完全的前提出发,结合 生产实际,综合比较,最终确定了供试品溶液的最佳提取条件. 参考文献: [1]李英,廖广仁,刘秋琼,等.麻梗祛痰口服液质量标准研究[J].中国药 房,2009,20(12):924,925. [2]国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[S].北京:化学工业出 版社,2005:80—81,187. (收稿日期:20l1—01-11,编辑:陈静) 2O11年10月第18卷第10期中国中医药信息杂志?63? (昆LIJ超声仪器有限公司);硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂). 木香对照药材(批号12091200506),紫草茸对照药材(批号 t0529701),安息香对照药材(批号1186200101),没食子酸对 照品(批号110831200302,供含量测定用)均购自中围药品生物 制品检定所;翼首草对照药材,藏茜草对照药材,达斯玛保丸样 品(批号20100402,20100403,20100404)由青海久美藏药药业有 限公司提供;甲醇为色谱纯,其他试剂均为分析纯;水为超纯水. 2定性鉴别 2.1木香 取本品5g,研细,置于具塞锥形瓶中,加氯仿l0mL,超声 处理30min,放冷,滤过,滤液作为供试品溶液.另取木香对照 药材1g,同法制成对照药材溶液.再取缺木香的阴性样品5g 同法制成阴性对照溶液.照薄层色谱法[2010年版《中华人民 共和国药典》(一部)附录?B]试验,吸取上述3种溶液各5pL, 分别点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿一环烷(5:1)为展开 剂,展不,取出,晾于,喷以1%香草醛硫酸溶液显色,在105~cJJ~ 热至斑点清晰.供试品色谱巾,在与对照药材色谱相应的位置 上,显相同颜色的斑点,【jJj性对照无干扰. 2.2紫草茸 取本品5g,研细,置具塞锥形瓶中,加乙酸乙酯2OmL,超 声处理30min,滤过,滤液浓缩至5mL,作为供试品溶液.另取 紫草茸对照药材0.2g,同法制成对照药材溶液.再取缺紫草 茸的阴性样品5g,同法制成阴性对照溶液.照薄层色谱 法[2010年版《中华人民共和国药典》(一部)附录VIB]试验, 吸取上述3种溶液各1OL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以 氯仿一甲苯一甲酸一丙酮(4:4:0.1:0.6)为展开剂,展开,取出, 晾干,105?加热至斑点清晰.供试品色谱中,在与对照药材色 谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,阴性对照无干扰. 2.3翼首草 取本品5g,研细,置具塞锥形瓶中,加乙醚20mL,超声处 理30min,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2mL使溶解,另取翼首 草对照药材2g,同法制成对照药材溶液.再取缺翼草阴性 样品5g,同法制成阴性对照溶液.照薄层色谱法[2010年版《中 华人民共和围药典》(一部)附录?B]试验,吸取对照溶液5L, 供试品溶液及阴性对照溶液各2L,分别点于同一硅胶G薄层 板上,以环己烷氯仿一乙酸乙酯一甲酸(20:5:8:0.1)为展开 剂,展开,取出,晾r丁,置日光及紫外光灯(365nm)下检视.供试 品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,相川颜色的斑 点或荧光斑点,阴件对照无干扰. 2.4藏茜草 取本品5g,研细,置具塞锥形瓶中,加乙醚2O【nI.,超声处理 10min,滤过,弃滤液,药渣加80%丙酮l0mIJ,超声处理10min, 滤过,滤液作为供试品溶液.另取藏茜草对照药材2g,同法制成 对照药材溶液.再取缺藏茜草的阴性样品5g,间法制成阴性对照 溶液.照溥层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》(一部) 附录?B]试验,吸取上述3种溶液各5pL,分别点于同一硅胶G 薄层板上,以正己烷一乙酸乙酯一甲酸(5:4:0.5)为展开剂,展开, 取出,晾干,置紫外灯(36513111)F检视.供试品色谱中,与对照药 材色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点,而阴性对照无干扰. 2.5安息香 取本品5g,研细,置具塞锥形瓶中,加甲醇1OmL,超声处 理10min,取上清液,蒸干,残渣加甲醇5mL使其溶解,作为供 试品溶液.另取安息香对照药材0.1g,同法制成对照药材溶 液.再取缺安息香的阴性样品5g,同法制成阴性对照溶液. 照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》(一部)附录 ?B]试验,吸取上述3种溶液各5L,分别点于同一硅胶GF254 薄层板上,以石油醚(6O,9O?)一正己烷一乙酸乙酯冰醋酸 (6:4:3:0.5)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外灯(254rim) 下检视.供试品色谱中,在与对照药材色潜相应的位置上,显 相同颜色的荧光斑点,而阴性对照无干扰. 3没食子酸含量测定 3.1色谱条件 色谱柱:DiamonsilC18柱(5um,4.6mm×250mm):流 动相为甲醇0.2%磷酸(8:92);检测波长为273i3m:流速为 1.0mL/min;进样体积为1OuL;柱温为3O?.理论板数按 没食子酸计算应不低于4000. 3.2溶液的制备 3.2.1供试品溶液的制备取本品研细,精密称取2g,置具 塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇5OmL,称定重量,超声处理(功 率420W,频率40kHz)40min,取出,放冷,用50%甲醇补足减 失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,用0.45um膜滤过,即得. 3.2.2对照品溶液的制备精密称取没食子酸对照品适量, 加甲醇制成每1mL含0.2425mg的溶液,即得. 3.2.3阴性供试品溶液的制备按处方比例及制备工艺,配 制不含诃子的阴性供试品,间法制备阴性供试品溶液. 3.3专属性试验 按照上述色谱条件,精密吸取对照品溶液,供试品溶液和 阴性供试品溶液各lOuL,分别注入液相色谱仪.结果供试品 中没食子酸与相邻组分基线完全分离,且峰形良好,样品中其 他组分对没食子酸的测定无于扰,结果见图1. A C tImin 注:A.对照品;B.供试品;c.阴性供试品 图1达斯玛保丸高效液相色谱图 ? 64?ChineSeJournalofInformationonTCMOct.2O11VO1.18No.1O 3.4标准曲线的绘制 分别精密吸取没食子酸对照品溶液(0.2425mg/mL)2,5, 1O,l2,15,20L注入液相色谱仪,测定其峰面积,并以峰面 积(A)为纵坐标,进样量()为横坐标,绘制标准曲线,得回归 方程:A=2.7499×10C+2.2959×10,,=0.9993,结果表 明,没食子酸在0.485~4.850lag范围内呈良好的线性关系. 3.5精密度试验 精密吸取没食子酸对照品溶液(0.2425IIlg/TIlL),进样量为 5L,按上述色谱条件,连续进样6次,测定峰面积,RSD=O.55%. 3.6稳定性试验 取同一供试品(批号20100403)溶液,按上述色谱条件,分 别在0,4,8,12,16,20,24h进样10L,测定其峰面积, 计算RSD=O.80%.表明供试品中没食子酸在24h内稳定. 3.7重复性试验 取同一批供试品(批号20100403),按”3.2.1”项下方法 制备6份供试液,在上述色谱条件下测定,结果RSD=0.64%,表 明含量测定方法重复性较好. 3.8加样回收率试验 取已知含量的供试品(批号20100403)约lg,精密称定, 分成3组(每组3份),置5OmL容量瓶中,每组再分别精密加入 没食子酸对照品溶液(0.2425mg/mL)15,20,25mL,加50% 甲醇至40?IL,超声处理40min,放冷,加50%甲醇稀释至刻度, 摇匀,滤过,取续滤液,进样,测定,结果见表1. 表1加样回收率试验结果 3.9样品测定 按照”3.2.1”项下方法制备供试品溶液,对3批样品分别 测定没食子酸的含量,结果见表2. 表2样品含量测定结果(mg/g) 4讨论 我们曾对处方中麝香,藏木香进行了薄层鉴别研究,经多 次试验,结果供试品色谱中,在与麝香酮及土木香内酯对照品 色谱相应的位置上,未显相同颜色的斑点,方法尚不成熟,故不 列入正文,有待进一步研究. 没食子酸的含量测定文献报道很多,主要以薄层色谱法和 高效液相色谱法..为主.曾试验流动相:水一乙醇(98:2), 甲醇一冰醋酸_N,N二甲基酰胺一水(2:1:4O:157),0.2%磷酸一 甲醇(85:l5),乙腈一4%磷酸(5:95)等,结果分离效果均不佳, 最终改换流动相为O.2%磷酸一甲醇(92:8),色谱峰之间得到 了很好的分离. 在供试品溶液的制备中,我们对提取溶剂,提取方法,提 取时间等进行了考察,结果以50%甲醇为提取溶剂,超声处理 40min为最佳.本试验建立了用高效液相色谱法测定诃子中 没食子酸含量,结果表明,该方法可操作性强,检测灵敏度高, 结果准确可靠,重复性好,可用于该制剂的质量控制. 参考文献: [1]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部标准(藏 药):第一册[s].西宁:青海民族出版社,1995:312. [2]国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[s].北京:中国医药科 技出版社,2010:128. [3]黄夏敏.高效液相法测定生津咽喉片中没食子酸的含量[J].中国新药 与临床药理,2002,13(1):37. [4]张敏娟,甘青梅.HPLC法测定达斯玛保丸中没食子酸含量[J].药物分析 杂志,2008,28(6):980. [51许乾丽,茅向军,熊慧林,等.HPLC测定宁泌泰胶囊中没食子酸的含 量[J].中成药,2001,23(9):644. [6]徐莱.ILPLC测定舒冠通胶囊中没食子酸的含量[J].中成药,2007,29 (9):附15一附16. [73卢永昌.HPLC测定藏成药气味诃子散中没食子酸[J].中草药,2006, 37(9):1350—1351. (收稿日期:2O11-01-07,编辑:陈静) 本刊对综述论文的要求 医学综述是查阅了医学某一专题在一段时期内相当数量 的文献资料,经过分析研究,选取有关情报信息,进行归纳整理 作出综合性描述的文章.撰写时应注意以下几点. ?选题要新.即所综述的选题必须是近期本刊未曾刊载过 的.?说理要明.说理必须占有充分的文献,处处以事实为依 据,尤其是要有自己的见解.?层次要清.即在写作时思路要 清,先写什么,后写什么,写到什么程度,前后如何呼应,都要有 一 个统一的构思.?文献要新.以5年内的文献为宜,尽可能 引用原始一次文献,文献数量20~40条为宜.?篇幅字数以 6000字左右为宜.(本刊编辑部)