纤维切片的制作

一、实验仪器与用品L1100A(HTG)三目显微镜配备4X、10X、40X、100X共四个物镜，10X,12.5X、14X、16X共4对计8个目镜，配备DV-2B(130万像素)数码摄像仪，图像分析测量软件，加密狗，台面分划尺（最小刻度10微米即0.01MM）   载玻片、盖玻片、Y172型哈氏切片器、自制纤维切割刀片、火棉胶、甘油（用带胶头滴管的试瓶装）、擦镜纸、玻璃棒、镊子、蒸馏水。二、纤维纵向切片的制作1．取试样一小束，手扯整理平直，用右手拇指和食指夹取约20~30根纤维，在载玻片上滴一滴甘油，将夹取的纤维按在载玻片上，复上盖玻片，并抽去多余的纤维，使附在载玻片上的纤维保持平直，注意纤维要散开不要有重迭，盖玻片和载玻片之间不要有气泡。（我们要测试的一般都是织物成份，所以先要纵织物中拆散出来一部分纱线，将纱线充分解捻，以手扯法整理平直成散纤维状态。）2．如果用蒸馏水代替甘油时，最好在盖玻片的两角用吸水纸在盖玻片的两对顶角上各吸一次，使盖玻片粘着并增加视野的清晰度。观察较粗纤维时，也可以不用甘油和水，但是需要保证载玻片和盖玻片的干净。三、纤维横截面切片的制作1．取哈氏切片器，旋松均给螺钉螺丝使均给刀不与底板接触，然后将定位螺钉拉起，将螺座转到与底板成一定角度错开的位置（最好不要取下），将左(凸)底板从右（凹）底板上抽出。哈氏切片器结构如下图所示：1—金属板（凸槽）  2—金属板（凹槽）  3—精密螺丝4—螺丝  5—定位销子  6—螺座2．取一束试样纤维，用手扯法整理平直，把一定量的纤维放入右底板的凹槽中，将左底板插入，压紧纤维，放入的纤维数量以轻拉纤维束时稍有移动为宜。3．用自制纤维切割刀片切去露在底板正、反两面外边的纤维。在切片时，刀片应尽可能平行于金属底板（即刀片和金属底板间夹角要小），并保持两者间夹角不变，在切割纤维时一定要注意安全。4．转动螺座恢复到原来位置，用定位销加以固定，然后旋紧定位螺丝。此时，精密螺丝下端的推杆应对放入凹槽中的纤维束的上方。5．旋转精密螺丝使纤维束稍稍伸出金属底板面，然后在露出的纤维束上涂上一层薄薄的火棉胶，并且让火棉胶充分渗入试样。（测试中心说可以用甘油代替火棉胶，尚没有试验其可行性。现经试验，甘油不容易凝固，且黏着性差，不适合代替火棉胶）6．待火棉胶凝固后，旋转精密螺丝一到两格，使纤维露出小小小。用锋利刀片沿金属底板表面切下第一片切片。由于第一片切片厚度无法控制，一般舍去不用。从第二片开始作正式试样切片，切片厚度可由精密螺丝控制（大概旋转精密螺丝刻度上的一格左右，即最小切片厚度20μm），在切割纤维时一定要注意安全，最好是刀片推送方向为切向螺座位。7．用镊子夹取切割良好的切片放在滴有甘油的载玻片上，盖上盖玻片，然后放在显微镜下观察。注1：切片制作时，羊毛切取较为方便，细的其它纤维切取较为困难，因此，可将试验纤维包在羊毛纤维内进行切片，这样容易得到好的切片。注2：制作切片时，原则上纤维厚度应小于或等于横向尺寸（纤维直径或宽度），以免纤维倒伏，否则在显微镜下观察到的是一小段一小段的纤维纵向形态。四、显微镜的结构及其使用方法(一)、显微镜的构造显微镜的构造主要分为三部分：机械部分、照明部分和光学部分。1．机械部分（1）镜座：是显微镜的底座，用以支持整个镜体。（2）镜柱：是镜座上面直立的部分，用以连接镜座和镜臂。（3）镜臂：一端连于镜柱，一端连于镜筒，是取放显微镜时手握部位。（4）镜筒：连在镜臂的前上方，镜筒上端装有目镜，下端装有物镜转换器。（5）物镜转换器(旋转器)：接于镜筒的下方，可自由转动，盘上有3－4个圆孔，是安装物镜部位，转动转换器，可以调换不同倍数的物镜，当听到碰叩声时，方可进行观察，此时物镜光轴恰好对准通光孔中心，光路接通。（6）镜台(载物台)：在镜筒下方，形状有方、圆两种，用以放置玻片标本，中央有一通光孔，我们所用的显微镜其镜台为方形，上面装有玻片标本定位夹，用以夹持定位玻片标本。镜台下有两个旋转调节轮，可使玻片标本作左右、前后方向的移动。旋转上面的调节轮可以使镜台做前后4.5CM的移动，旋转下面的调节轮可以使镜台做左右7.7CM的移动。（7）调节器：是装在镜柱上的大小两种螺旋，调节时使镜台作上下方向的移动。①粗调节器(粗螺旋)：大螺旋称粗调节器，移动时可使镜台作快速和较大辐度的升降，所以能迅速调节物镜和标本之间的距离使物象呈现于视野中，通常在使用低倍镜时，先用粗调节器迅速找到物象。向后螺旋是上升，向前旋转是下降。②细调节器(细螺旋)：小螺旋称细调节器，移动时可使镜台缓慢地升降，多在运用高倍镜时使用，从而得到更清晰的物象，并借以观察标本的不同层次和不同深度的结构，其旋转方向同粗调节器。2．照明部分      我们部门采用的是电源灯泡光源（1）光源调节旋钮，可以自动调节光源强弱。（2）过滤镜，折射掉一部分光线。（3）光圈(虹彩光圈)：在聚过滤镜上方，由十几张金属薄片组成，其外侧伸出一柄，推动它可调节其开孔的大小，以调节通过的光量。3．光学部分（1）目镜：装在镜筒的上端，配备10X,12.5X、14X、16X共4对计8个目镜，面刻有10X,12.5X,14X,16X符号以表示其放大倍数，一般装的是10×的目镜。 （2）物镜：装在镜筒下端的旋转器上，配备4X、10X、40X、100X共四个物镜，，其中最短的刻有“4”符号的为低倍镜，较长的刻有”10”“40”符号的为高倍镜，最长的刻有“100”符号的为油镜（oil），此外，在高倍镜和油镜上还常加有一圈不同颜色的线，以示区别。  在物镜上，还有镜口率的标志，它反映该镜头分辨力的大小，其数字越大，表示分辨率越高，各物镜的镜口率如下表： 物镜  镜口率(N.A.)  工作距离(mm)4×      0.1           23.1 10×     0.25          4.1 40×     0.65          0.6 100×    1.25          0.38 表中的工作距离是指显微镜处于工作状态(物象调节清楚)时物镜的下表面与盖玻片(盖玻片的厚度一般为0.17mm)上表面之间的距离，物镜的放大倍数愈大，它的工作距离愈小。 1物镜　　　2物镜转换器(旋转器)显微镜的放大倍数是物镜的放大倍数与目镜的放大倍数的乘积，如物镜为10×，目镜为10×，其放大倍数就为10×10=100。（二）、显微镜的使用方法1．低倍镜的使用方法（1）将光源亮度调节到最暗，开启电源开关启动显微镜。（2）拔出显微镜侧面人机观察切换按钮（在目镜的一侧）使显微镜处于人眼观测工作状态。（2）对光：用拇指和中指移动旋转器(切忌手持物镜移动)，使低倍镜对准镜台的通光孔(当转动听到碰叩声时，说明物镜光轴已对准镜筒中心)。调节光源亮度，直到视野内的光线均匀明亮为止。（3）调节双目目镜距离，调节瞳距，调节以两眼看到的光圈从两个最终变成一个为适宜。（3）放置玻片标本：取一玻片标本放在镜台上，一定使有盖玻片的一面朝上，切不可放反，用定位器夹住，然后旋转推片器螺旋，将所要观察的部位调到通光孔的正中。（4）调节焦距：向后方向转动粗调节器，使镜台缓慢地上升至物镜距标本片最近处，注意在上升镜台时，切勿在目镜上观察。一定要看着镜台上升，以免上升过多，造成镜头或标本片的损坏。（5）镜上观察，向前方向缓慢转动粗调节器，使镜台缓慢下降，直到视野中出现清晰的物象为止。如果物象不在视野中心，可调节推片器将其调到中心(注意移动玻片的方向与视野物象移动的方向是相反的)。如果视野内的亮度不合适，可通过光源亮度大小旋钮或通过拨动光圈的大小来调节，如果在调节焦距时，镜台下降已超过工作距离而未见到物象，说明此次操作失败，则应重新操作，切不可心急而盲目地上升镜台。2．高倍镜的使用方法（1）选好目标：一定要先在低倍镜下按照低倍镜的使用把需进一步观察的部位调到中心，同时把物象调节到最清晰的程度，才能进行高倍镜的观察。（2）转动转换器，调换上高倍镜头，转换高倍镜时转动速度要慢，并从侧面进行观察(防止高倍镜头碰撞玻片)，如高倍镜头碰到玻片，说明低倍镜的焦距没有调好，应重新操作。（3）调节焦距：转换好高倍镜后，在目镜上观察，此时一般能见到一个不太清楚的物象，可将细调节器的螺旋移动约0.5－1圈，即可获得清晰的物象(切勿用粗调节器!)。如果视野的亮度不合适，可用光源旋扭和光圈调节器加以调节，如果需要更换玻片标本时，必须转动粗调节器(切勿转错方向)使镜台下降，方可取下玻片标本。3．油镜的使用方法（1）在使用油镜之前，先要经低、高倍镜观察，然后将需进一步放大的部分移到视野的中心。（2）将集光器上升到最高位置，光圈开到最大。（3）转动转换器，使高倍镜头离开通光孔，在需观察部位的盖玻片上滴加一滴香柏油，然后慢慢转动油镜，在转换油镜时，从侧面水平注视镜头与玻片的距离，使镜头浸入油中而又不以压破载玻片为宜。（4）用左眼观察目镜，并慢慢转动细调节器至物象清晰为止。如果不出现物象或者目标不理想要重找，在加油区之外重找时应按：低倍→高倍→油镜程序。在加油区内重找应按：低倍→油镜程序，不得经高倍镜，以免油沾污镜头。（5）油镜使用完毕，先用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头上和标本上的香柏油擦去，然后再用干擦镜纸擦干净。（三）显微镜使用的注意事项1．为延长光源灯泡的使用寿命，开启和关闭显微镜时一定要将光源调节到最暗。2．轻拿轻放，不可把显微镜放置在实验台的边缘，以免碰翻落地。3．保持显微镜的清洁，光学和照明部分只能用擦镜纸擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，机械部分用布擦拭。4．水滴、酒精或其它药品切勿接触镜头和镜台，如果沾污应立即擦净。5．放置玻片标本时要对准通光孔中央，且不能反放玻片，防止压坏玻片或碰坏物镜。6．不要随意取下目镜，以防止尘土落入物镜，也不要任意拆卸各种零件，以防损坏。7．显微镜在使用和维护时可以参照供货商提供的《L1100A生物显微镜使用说明》。