1）将标本用无菌生理盐水稀释成不同浓度：

1）将标本用无菌生理盐水稀释成不同浓度： 1)将标本用无菌生理盐水稀释成不同浓度:10-1、10-2、10-3、10-4、10-5等。 2)取不同稀释度的标本各1ml分别注入直径90mm无菌平皿，迅速加入溶化并冷却至约50?的营养琼脂15ml，轻轻转动平板使之充分混匀，待凝固后翻转平板。 3)置35?温箱孵育18~24h，计数菌落形成单位(colony forming unit，CFU)，按下式算出每ml标本中的细菌数: 1ml标本中的活菌数=全平板CFU×稀释倍数 7(细菌接种的注意事项 (1)细菌接种过程中需注意无菌操作，避免污染，因此每一步操作均需严格按要求进行。操作时不宜说话或将口鼻靠近培养基表面，以免呼吸道排出的细菌污染培养基。 (2)所有操作均需在酒精灯火焰附近进行，平皿盖、试管塞、瓶塞均应拿在手上打开(具体见前述)，禁止将盖或塞事先取下放置在桌面上。 (3)取菌种前灼烧接种针(环)时要将镍鉻丝烧红，烧红的接种针(环)稍事冷却再取菌种，以免烧死菌种。 (4)取菌时注意菌落不要取得太多，应蘸取而不宜刮取，否则平板划线很难分离出单个菌落。 (5)平板划线时注意掌握好划线的力度和角度，用力不能过重，接种环和培养基表面大约呈30~40?角，划线要密而不重复，充分利用培养基，并注意不能划破平板。半固体培养基接种时注意穿刺线要直，并沿原穿刺线退出。 (6)接种完毕后，需在培养基上做好标记再放置温箱孵育。废弃的有菌材料(如玻片、有菌的平板、试管、吸管等)均需灭菌后再清洗。发生有菌材料污染应及时进行消毒处理。 三、细菌的培养方法 1(需氧培养法 该法适用于需氧菌和兼性厌氧菌。将接种后的培养基(试管放试管架上，平板底上盖下)置35?培养箱，培养18-24h。大多数细菌生长速度快，在孵育18~24h后即可见到生长现象，但若标本中的菌量少或生长速度慢的细菌(如结核分支杆菌)，则需培养3~7天甚至4~8周后才能观察到生长现象。 2(CO2培养法 (1)CO2孵育箱:能自动调节箱内CO2的浓度和温度，使用方便。 (2)烛缸法:取一有盖磨口标本缸或玻璃干燥器，在盖及磨口处上涂上凡士林。将接种后的培养基放入缸中，并在缸内放一支点燃的蜡烛，加盖密封。随着缸内蜡烛燃烧产生的CO2增加，蜡烛逐渐自行熄灭，此时缸内的CO2浓度约为5~10%，置35?培养箱孵育18~24h后观察结果。(见图4-7)