【word】 金樱根的抗炎作用及对巨噬细胞释放NO的影响
金樱根的抗炎作用及对巨噬细胞释放NO的
影响
贵州农业科学2011,39(2):148,150
GuizhouAgriculturalSciences
[文章编号]1001—3601(2011)02—0114—0148—03
金樱根的抗炎作用及对巨噬细胞释放NO的影响
邹堂斌,解庆林
(贺州学院化学与生物
系,广西贺州542800)
[摘要]为探索金樱根的抗炎作用及对炎症因子一氧化氮(NO)的调控作用,建立小鼠二甲苯耳廓肿
胀模型,琼脂肉芽组织增生模型,并通过测定金樱根对脂多糖诱导小鼠腹腔巨噬细胞释放NO的影响观察金
樱根的抗炎作用及其与NO的关系.结果
明,金樱根能抑制二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀,琼脂肉芽组织增
生,能抑制炎症因子N0的释放.认为,金樱根具有较好的抗炎作用,这种作用与抑制NO等炎症因子释放
有关.
[关键词]金樱根;抗炎;巨噬细胞;一氧化氮(NO)
[中图分类号]$567.9[文献标识码]A
Anti—inflammatoryEffectofCherokeeRoseRootandIts
EffectonNOReleaseofMacrophage
ZOUTang—bin,XIEQing—lin
(DepartmentofChemistryandBiologicalEngineering,HezhouCollege,Hezhou,Guangxi542800,China)
Abstract:Theantiinflammatoryeffectofcherokeeroserootwasobservedbybuildingmice
dimethylbenzeneauricleswellingmode1andagargranulationhvDerb1astosismodelandtheeffectof
cherokeeroserootonNOreleaseofmicecoeliacmacrophagewasdeterminedtostudytheanti—
inflammatoryeffectofcherokeeroserootandadjustingeffectofcherokeeroserootonNOrelease
(inflammatoryfactor).Theresultsshowedthatcherokeeroserootcouldinhibitmiceauricleswelling
causedbydimethylbenzene,agargranulationhyperblastosisandNOrelease.cherokeeroserootisofgood
anti—inflammatoryeffectanditsanti—inflammatoryeffectmayberelatedt
oinhibitionofNOrelease.
Keywords:cherokeeroseroot;anti—inflammatory;macrophage;NO
金樱根(CherokeeRoseRoot,CRR)又名金樱
荔,脱骨丹,为蔷薇科植物金樱子的根或根皮,性味
酸涩,有固精涩肠作用.临床报道可用于治疗子宫
脱垂,细菌性痢疾,4,JL脱肛等症.该植物为广西优
势植物资源之一,化学成分中以鞣质类报道居多,而
鞣质在抗炎,抗氧化,抗病毒及抗癌等方面均有报
道[.一氧化氮(NO)是一种不稳定自由基,既是
一
种信使分子,又是一种细胞毒性分子,NO表现为
生理性或病理性作用,主要取决于量的多少.为探
索金樱根的抗炎作用及对炎症因子NO的调控作
用,提高其临床应用价值,特进行金樱根的抗炎作用
及对巨噬细胞释放NO的影响试验.
1材料与方法
1.1试验材料
1.1.1试剂与器具金樱根注射液(1mL相当于
0.4g药材),二甲苯(广州化学试剂厂),水杨酸钠
(陕西汉江药业集团),大黄(贺州桂东大药房),NO
试剂盒(南京建成生物工程研究所),巯基乙醇钠(上
海宝瑞化工有限公司),新生牛血清(Gibco),脂多糖
(Sigma),RPMI一1640培养基(Gibco),二氧化碳培
[收稿日期]
[基金项目]
[作者简介]
养箱(Thermo),电子天平等.
1.1.2试验动物BALB/c小鼠(舍),体重(2O?
2)g,清洁级,由中山大学实验动物中心提供.
1.2试验方法
1.2.1二甲苯致小鼠耳廓肿胀试验将30只小
鼠随机分为3组,每组10只,分为金樱根组,水杨酸
钠(2)组和对照组.药物组以0.2mL/10g体重
腹腔注射药液,对照组注射生理盐水,每日1次,连
续3d.末次给药3Omin后,均匀涂抹二甲苯50#L
于各组小鼠左耳两面致炎,右耳作对照.1h后脱颈
椎处死,沿耳廓基部剪下两耳,用直径5mm打孔器
取下相同部位耳片,称重.以对照耳重量为100,
计算药物对致炎耳的肿胀抑制率].
1.2.2小鼠琼脂肉芽组织增生试验选取小鼠3O
只,于乙醚浅麻醉下,无菌操作,在鼠背中线皮下注
射2%琼脂液0.5mI/只.24h后分组,方法同小鼠
耳廓肿胀试验.药物组以0.2mI/10g体重剂量腹
腔注射药液,对照组注射生理盐水,每天1次,连续
7d.第8天脱颈椎处死小鼠,取肉芽肿称重,比较
各组问的差异.计算药物对肉芽肿的抑制率:
肉芽肿抑制率/一[(对照组肉芽肿湿重一药
2O1O一08—31;2011-01-08修回
广西教育厅科研项目”金樱根提取物药理活性及作用机制研
究”(200808MS017);广西桂东特色资源开发与利用实验室资助项
目”通泉草VI服液药理活性研究”[2009SYS(2)07]
邹堂斌(1980一),男,讲师,从事天然产物研究与开发.
第2期邹堂斌等金樱根的抗炎作用及对巨噬细胞释放NO的影
响?149?
物组肉芽肿湿重)/对照组肉芽肿湿重]×100
1.2.3小鼠腹腔巨噬细胞分离培养及分组每只
小鼠腹腔注射0.3巯基乙醇钠0.6mL,3d后脱颈
椎处死,浸于75酒精中消毒.然后用注射器吸取
PBS液4.0mL注入小鼠腹腔,轻揉小鼠腹部,用无
菌吸管吸取腹腔PBS液,重复3次后离心,所得细
胞重悬于RPMI一1640培养基中,对细胞进行记数并
调整浓度至2×10个/mL.台盼蓝染色证实细胞
存活率达95以上,然后接种于12孔板,每孔加细
胞悬液I.0mLl4.分为正常组,金樱根组和空白
对照组,每组3个复孔,金樱根组每孔加入金樱根注
射液和脂多糖(LPS,100/~g/mI)各0.1mI,对照组
每孔加入LPS(100/~g/mI)和PBS各0.1mI,正常
组每孑L加入PBS0.2mL.置37?,5CO培养箱
中孵育.采用Griess法测定NO的稳定代谢产物
NaNO来反应NO的浓度,操作按试剂盒说明
书进行.
2结果与
2.1抑制小鼠耳廓肿胀试验
二甲苯具有较强致炎作用,涂抹在小鼠的耳廓
可引起耳部皮肤毛细血管扩张,通透性增高,引起耳
部肿胀.从表1可以看出,金樱根注射液对二甲苯
引起的小鼠耳廓肿胀有一定的抑制作用,抑制率达
9.86%.
表1不同处理对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的抑制作用
Table1Inhibitioneffectofdifferenttreatmentsonmouseauricleswellingcaus
edbydimethylbenzene
注:*表示与对照组相比,差异显着(P<O.05)(下同).
Note:*indicatethesignificantlevelat5comparedwithCK,thesamebelow
表2不同处理对琼脂致小鼠肉芽组织增生的抑制作用
Table2Inhibitioneffectofdifferenttreatmentsonmousegranulationhyperbl
astosiscausedbyagar
2.2小鼠琼脂肉芽组织增生试验
琼脂注射到小鼠皮下后,因其体积较大,无法被
巨噬细胞吞噬,从而使巨噬细胞形成多核巨细胞,附
着于异物颗粒上形成肉芽肿.从表2看出,金樱根
对琼脂引起的小鼠肉芽组织增生有很强的抑制作
用,肿胀抑制率可达22.39,明显优于2水杨酸
钠组.
2.3对巨噬细胞分泌NO的影响
巨噬细胞经IPS刺激后,会释放出大量的炎性
因子NO.从表3看出,对照组释放的NO浓度为
0.142mmol/L,金樱根组释放的No浓度为
0.056mmol/I,与对照组相比差异显着(Pd0.05).
培养巨噬细胞时分别在2h,6h,12h测定培养
基中的N()含量.从图示可知,正常组在2h时NO
含量为0.016mmol/I,6h时含量为0.017mmol/
L,12h时含量为0.020retool/I;对照组在2h时
NO含量为0.039mmol/L,6h时含量为0.059mmol/
L,12h时含量达0.065mmol/L,NO含量上升趋势
比较明显.而金樱根组的NO含量介于两者之间,
说明,金樱根对巨噬细胞分泌炎性细胞因子NO有
较好的抑制作用.
霎Z
07
O6
05
04
03
O2
O1
—
._-空白对照组十金樱根组
时问,h
Time
图示不同处理对巨噬细胞分泌NO的影响
Fig.EffectofdifferenttreatmentsonNOrelease
ofmacrophage
贵州农业科学
3小结与讨论
炎症是机体对组织损伤或致病因子侵入的一种
防御反应,其作用在于杀灭病原微生物,清除凋亡细
胞和异物,以防止损伤扩大并促进损伤组织修复.
炎症过程涉及许多炎症介质,如丙二醛,白介素,一
氧化氮,缓激肽等..
N0是一种具有广泛生物学效应的小分子化合
物,可直接参与和炎症有关的细胞因子的调节,在免
疫调控方面具有重要作用口.研究证实,NO与炎
症存在密切关系,它在机体内的生物化学过程主要
包括3个基本反应:1)与可溶性鸟苷酸环化酶
(sGC)的亚铁血红素基团结合,激活sGC产生和释
放cGMP;2)被氧合血红蛋白灭活,生成正铁血红
蛋白和亚硝酸盐;3)与超氧离子反应生成有毒的强
氧化物(ONOO).在炎症反应过程中,因损伤因子
的作用,部分组织遭到破坏,出现血管扩张,局部血
量增多,而且血浆和白细胞从血管渗出增多.接着
发生修复,受损伤的组织得以愈合.由此可见,炎症
反应与修复过程有着紧密联系,炎症反应具有潜在
的危害性,过度的炎症反应会造成机体严重损伤.
血管反应是炎症反应的中心环节但不是唯一环节,
免疫系统,血液凝固系统和纤维蛋白溶解系统以及
细胞因子都是炎症反应的必要因素,而N0不仅在
血管反应中起主要作用,而且还参与免疫系统反应
和血小板的调节反应,并且作为细胞因子在炎症反
应中扮演了重要角色u.
研究结果表明,金樱根对急慢性炎症均有较好
的抑制作用,能够有效抑制炎症反应过程中的组织
增生及炎症因子No的形成,表明,金樱根对由炎症
引起的相关疾病具有一定的防治作用.因此,鉴于
许多化学合成抗炎药物具有较强毒副作用的情况
下,应加强推广该药物在临床上的应用.
[参考文献]
[1]吴寿金.现代中草药成分化学EM].北京:中国医药科
技出版社,2002:135—137.
[2]黄贤华,谭晓彬,曾靖,等.金樱根醇提取液耐缺氧
作用的研究[J].赣南医学院,2003,23(5):488一
(责任编辑:冯卫)
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