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【doc】养血清脑颗粒对MCAO模型大鼠神经功能保护机制研究

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【doc】养血清脑颗粒对MCAO模型大鼠神经功能保护机制研究【doc】养血清脑颗粒对MCAO模型大鼠神经功能保护机制研究 养血清脑颗粒对MCAO模型大鼠神经功能 保护机制研究 ? 第29卷第12期 2002年12月 辽宁中医杂志 LIAONINGJOURNALOFTRADITIONALCHINESEMEDICINE VO1.29NO.12 Dec..2002 养血清脑颗粒对MCAO模型大鼠神经功能保护机制研究 王中琳 (山东中医药大学附属医院,山东济南250011) 摘要:目的:探讨养血清脑颗粒对MCAO大鼠脑损伤的保护机制.方法:选用22月龄纯种健康大白鼠.采...
【doc】养血清脑颗粒对MCAO模型大鼠神经功能保护机制研究
【doc】养血清脑颗粒对MCAO模型大鼠神经功能保护机制研究 养血清脑颗粒对MCAO模型大鼠神经功能 保护机制研究 ? 第29卷第12期 2002年12月 辽宁中医杂志 LIAONINGJOURNALOFTRADITIONALCHINESEMEDICINE VO1.29NO.12 Dec..2002 养血清脑颗粒对MCAO模型大鼠神经功能保护机制研究 王中琳 (山东中医药大学附属医院,山东济南250011) 摘要:目的:探讨养血清脑颗粒对MCAO大鼠脑损伤的保护机制.方法:选用22月龄纯种健康大白鼠.采用 线栓法阻塞大脑中动脉诱发脑缺血模型,治疗组给以养血清脑颗粒治疗.对照组和假手术组则给以等量生理盐水 灌胃.结果:治疗组可以显着减轻模型鼠神经缺损症状.改善阻断侧额顶区脑电图波幅降低和频率减慢:脑组织形 态学观察发现,缺血区星形细胞增殖明显,神经元较对照组仅轻度减少.脑血流量也有显着改善,血中GSH,GSH— PX水平升高,MDA水平则受抑制而降低.结论:养血清脑颗粒对脑缺血损伤的保护机制是多方面的,而增强星形 细胞活性,保护神经元缺血性损害,改善脑血流量及抗自由基损伤是其治疗缺血性脑损伤的主要机制之一. 关键词:养血清脑颗粒;MCAO模型;实验研究 中图分类号:R285.6文献标识码:B文章编号:1000—1719{2002)12—0704一O3 笔者运用养血清脑颗粒,在临床治疗缺血性脑 血管病方面取得明显疗效的基础上,为了进一步探 讨其作用机制,提高防治水平,利用老龄大鼠 MCAO脑缺血模型观察了养血清脑颗粒对脑组织 病理形态学,脑血流量,梗塞侧脑电活动及抗自由基 活性的影响等,现将研究结果报道如下. 1及方法 1.1动物及分组选择22月龄纯种健康大白鼠 (由山东省实验动物中心提供)60只,体重250, 300g,雌雄各半,随机分为3组:假手术组20只,病 理模型对照组(对照组)20只,模型加中药组(治疗 组)20只. 1.2动物模型制备参照Koizumi1985年在日本 脑卒中会议上报道的方法,用尼龙线穿线法建立大 脑中动脉阻塞(MCA0)模型.假手术组不插入尼龙 线,余同其他两组. 司富春【】对二仙汤在温肾益精和滋阴泻相火 两种作用分子机制,进行探索研究了二仙汤及其拆 方对下丘脑GnRH基因达水平和下丘脑.垂体.性 腺3个层次生殖激素含量的作用,结果表明二仙汤 及其拆方对下丘脑GnRH基因表达水平和性腺轴 机制具有不同程度的调节作用.全方和拆方作用比 较发现二仙汤及其拆方对老年大鼠下丘脑GnRH 基因表达和性腺轴机制的作用有性别差异.实验发 现温肾药对雌性大鼠GnRH生物合成和下丘脑一垂 体轴功能无改善作用,而能明显改善雄性大鼠下丘 脑GnRH合成和性腺轴的功能.推测老年雄性大鼠 肾脏精气在衰老过程中偏于阳虚.中医认为肾脏精 气衰而致机体衰老.即<内经>指出男子"七八",女子 "七七",由于肾气衰,天癸竭,而致生殖机能减退. 参考文献: [1]李广曦.肾阳虚证动物模型的造模方法及其相关指标回顾 [J].中国中医基础医学杂志.2000.6(4):46. [2]唐铁军.吴伟康.卢汉平.四逆汤调节大鼠缺血心肌B受体信 号转导的机制[J].中国中西医结合杂志,2001.21(3):206. [3]包天桐.应激致"肾虚"动物模型介绍[J].药学,1998, (9):717. [4]贾敏,王明艳,法京,等.温阳药对环磷酰胺诱发MN的抑制 作用[J].南京中医药大学,1995,11(6):36. [5]王明艳,赵凤鸣,张旭.等.滋阴补阳方药的抗突变研究[J].中 医杂志.2000.4(5):303. 袁世宏.王米渠.金沈锐.金匮肾气丸对"恐伤肾"大鼠丘脑,海 马c.fos基因表达的影响[J].北京中医药大学.2001.24 (6):32. 王米渠,马向东.惊恐伤肾雄鼠的应激行为学研究[J].成都医 药.1997.23(2):65. 张弋.马骏.补肾益精方延缓老年雄性大鼠骨与脑衰老的实验 研究[J].中国中西医结合杂志.2000.20(1):43. 狄俊英,崔洪英.肾气丸与六神丸对靶组织cAMP含量影响的 实验研究[J].天津中医.1998,(4):180. 郑振.沈自尹.黄辉.补肾与活血复方调节老年鼠T细胞凋亡 的对比研究[J].中国中西医结合杂志.1999,19(10):610. 许得盛.沈自尹,王文健.等.右归汤,四君子汤,桃红四物汤调 节肾虚,脾虚,血瘀证患者免疫功能的观察[J].中国中西医结 合杂志.1999.19(12):712. 钟历勇.沈自尹.蔡定芳.等.补肾健脾活血三类复方对下丘脑 . 垂体.肾上腺.胸腺轴及CRF基因表达的影响[J].中国中西 医结合杂志.1997.17(1):39. 刘菊妍.温阳益气活血复方治疗阿片类药物依赖的临床研究 [J].南京中医药大学.1997,13(4):204. 沈小衍.二仙汤及其拆方对老年大鼠SOD,CAT酶活性及其 mRAN表达水平影响作用的实验研究[C].中医博士论文集 粹.上海:上海中医药大学出版社.1996.99. 司富春.二仙汤及其拆方对老龄大鼠下丘脑GnRH基因表达 及调节作用[C].中医博士论文集粹.上海:上海中医药大学 出版社.1996.99. 编辑:刘劲 收稿日期:2002—08—06 作者简介:王中琳(1965一),男,山东平邑人.博士研究生.主要从事中医治疗神经系 统疾病的研究. ? 704? 6789儿H:2 ;};[ I 12期王中琳等:养血清脑颗粒对MCAO模型大鼠神经功能保护机制研究 1.3实验药物及给药途径养血清脑颗粒,由天津 天士力制药股份有限公司生产.4.Og/包,主要药物成 分为当归,川I芎,熟地,珍珠母,决明子,细辛等.于造 模成功后给药,药物组4.Og/kg灌胃,每日1次.假 手术组和对照组分别以等量生理盐水代替药物灌胃. 每日1次.均连续进行15天,每5天为1个周期. 1.4主要试剂与仪器试剂:MDA,GSH和GSH— PX测试盒,均由南京建成生物工程研究所提供.仪 器:日本光电16导脑电图机:Leica公司Q一570型显 微镜图像分析仪;蔡可公司ISM501型激光共聚焦 显微镜;冰冻切片机;高速冷冻离心机;国产751一 分光光度计;国产计算机控制LS-HI型组织血流仪. 2观察指标 2.1神经症状观察参照Bederson【11分级标准,神 经功能缺损评定如下.正常(0级):?无活动异常, 大鼠被提尾时,两前肢向下伸直;?将动物置于塑料 板上,在鼠肩后施加侧向推力使鼠滑动约有lOcm. 手感左右推力相等.中度(I级):?大鼠被提尾悬 起时,脑血管闭塞对侧前肢呈屈曲,抬高,肩内收,肘 关节伸直等;?基本同0级.严重(II级):?同I 级;?检查方法同上,脑血管闭塞对侧侧向推动阻力 明显降低.本组入选对照组大鼠和治疗组大鼠均于 给药前及末次给药后评级. 2.2脑电3组动物均在末次灌胃后断头前. 分别在大鼠额,顶,枕部位左右两侧对称地安放头皮 电极各1个.参考电极安放在鼻骨正中.记录闭塞 侧大脑中动脉供血区和非供血区及对侧相应部位脑 电变化. 2.3血清MDAGSH—PXGSH水平的测定于末 次灌胃后ld,3组动物各取8只,经腹主动脉取血静 置,分离血清.用比色法分别测定MDA,GSH—PX, GSH含量,操作均按试剂盒说明书要求进行,计算 公式如下: 血清MDA含量(nmol/L)= 薏薯墨三}×样本测试前标准管吸光度一标准空白管吸光度, 稀释倍数×10nrnoI/L 血清GSH—PX含量(酶活力单位)= OD墨智OD×标准管浓度标准管值一空白管值一" (20~mol/L)×稀释倍数 血清GSH含量(mg/L)= 着圣旨×标准管浓度标准管0D值一标准空白管0D值 (0.5mmol/L)×GSH分子量(307) 2.4脑组织形态学改变于末次灌胃后1天,将3 组动物各取6只断头迅速取脑,观察大体标本变化 后立即置恒冷箱一20?冰冻切片,切片厚6rn,每 隔6张取2张分别放入冰冻固定液和95%乙醇中 固定30min后行HE染色和吖啶橙荧光染色做光镜 和荧光显微镜观察. 2,5局部脑血流量(rCBF)测定本实验以测定前 额皮层局部脑血流量为准,3组动物各取6只,于末 次用药后48h内测量,用10%水合氯醛麻醉后剪去 头部皮肤,暴露颅骨,将大鼠固定在脑立体定位仪 上,以前囱为原点,向右侧旁开2ram,向前3mm.钻 开颅骨,剥去硬脑膜及软脑膜,将测量电极插入皮 层,深2mm,参比电极置于颈后部皮下.同一组内 所有动物脑血流的测量由同一根电极完成,电解时 间为3s,由血流仪所带专用软件计算出结果. 3统计学处理 计量资料采用t检验或口检验,计数资料采用 x检验,组间分级比较采用Ridit分析,所有计量资 料均采用均数?标准差表示. 4结果 4.1养血清脑颗粒对神经症状的影响见表1. 表1养血清脑颗粒对3组大鼠神经系统症状的影响 Ridit分析,治疗前实验大鼠神经系统症状.对 照组与治疗组间无显着差异,P>0.05,但与假手术 组有显着差异,P<0.01;治疗后治疗组与对照组的 神经系统症状具有显着差异.P<0.05,提示养血清 脑颗粒可显着改善模型大鼠神经系统症状. 4.2脑电改变对照组阻断大脑中动脉侧额顶区 (供血区)脑电图波幅重度降低,频率明显减慢;治疗 组阻断侧额顶区脑电图波幅轻度降低,频率仅轻度 减慢,两组间比较差异显着.而假手术组双侧额顶 区脑电图均无明显改变.3组手术侧枕区(非大脑 中动脉供血区)和对侧的脑电图无明显变化. 4.3养血清脑颗粒对实验大鼠血清MDAGSH— PxGSH含量的影响见表2. 表2末次用药后大鼠血清MDAGSH—PXGSH的含量(?S) 注:对照组与假手术组比较,1)P<0.05,2)P<0.01;治疗组与 对照组比较,3)P<0.01,4)P<0.05. 表2提示MCAO大鼠MDA显着高于假手术 组,GSH,Px,GSH显着低于假手术组;治疗组 MDA显着低于对照组,GSH—Px显着高于对照 组,养血清脑颗粒可降低实验大鼠MDA含量,升高 GSH—Px和GSH水平. 4.4脑组织形态学观察?假手术组:大脑半球外 观正常.镜下见手术侧半球组织结构正常,荧光显 微镜见神经元内细胞核呈黄色,细胞质呈橘红色,清 ? 705? 辽宁中医杂志29卷 晰可见.?对照组:大体见额颞顶部颜色苍白,脑表 面静脉充血.镜下见尾状核,感觉运动区皮质,海马 的神经细胞呈不同程度的缺血性改变.核深染固缩, 胞体皱缩,星形细胞有轻度增殖,血管扩张.荧光显 微镜见神经元数量明显减少,缺血中心区组织疏松. ?治疗组:大体见额颞顶部颜色略苍白.镜下见尾 状核,海马,感觉运动区皮质神经细胞仅有轻度缺血 性改变,尤以后者为轻.星形细胞增殖明显,血管扩 张不明显.荧光显微镜见神经元仅轻度减少.缺血 中心区组织疏松较轻. 4.5养血清脑颗粒对实验大鼠前额皮层局部脑血 流量(rCBF)的影响见表3. 表3实验性大鼠前额皮层(BF)的变化(又?S) 注:与假手术组比较1)P<0,05,与对照组比较,2)P<0,05. 说明梗塞后对照组大鼠rCBF降低明显.治疗 组经中药治疗后,其脑血流量(rCBF)虽未增加至假 手术组的水平,但与对照组相比,改善较为显着,说 明养血清脑颗粒能够增加梗塞区以外的脑局部血流 量. 5讨论 祖国医学认为,中风病的发生,病机较为复杂, 主要责之于肝肾阴亏,气血失和.以致阴亏于下,肝 阳鸱张,阳化风动,气血逆乱,痰生血阻,蒙蔽清窍, 临床以缺血性中风最为常见.根据这一病机特点, 在制成MCAO大鼠脑缺血模型基础上.笔者选用天 津天士力公司生产的养血清脑颗粒.观察了该药对 模型大鼠脑损伤的保护作用.疗效满意.本方具有 滋阴补血,平肝潜阳,活血通络之功用.体现了对中 风病机的治疗.现代药理研究证明[2--4】,方中药味 均有不同程度的抑制血小板聚集,抗血栓形成,抑制 自由基连锁反应,降脂,扩张血管,改善微循环,提高 机体耐缺氧能力等作用,推测养血清脑颗粒治疗缺 血性脑血管病可能与上述药理作用有关. 实验表明,治疗组神经缺损症状显着减轻.局部 脑血流量较对照组明显增加,脑电图的抑制性变化 也有较好的改善.脑组织形态学观察,缺血区星形 细胞增殖明显,神经元数量较对照组仅轻度减少.由 于星形细胞在神经元的营养代谢,可塑性变化等方 面发挥作用,故认为养血清脑颗粒具有增强星形细 胞活性,促进脑损伤修复的作用. 自由基损伤也是造成缺血性脑损伤的重要因 素,研究显示,模型大鼠血清丙二醛(MDA)含量增 高.谷胱甘肽(GSH),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH— Px)含量降低,而养血清脑颗粒可降低MDA含量, 提高GSH,GSH—Px水平.由此推论.本药对缺血 性脑血管病的治疗机制之一与其抗自由基损伤密切 相关. 综上所述,养血清脑颗粒对缺血性脑血管病的 治疗机制是多方面的,而增强星形细胞活性,保护神 经元缺血性损害,改善脑血流量及抗自由基损伤是 其主要机制之一. 参考文献: [1]BedeJB,PittsLH,NishmuraMC,eta1.Ratmiddlecerebral arteryocclusion:evaluationofthemodelanddevolopmentofaneu, rologicexamination[J].Stroke,1986,17:472. 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[4]李希新,苏明廉.当代中药临床应用[M].济南:济南出版社, 1994.473. 编辑:刘劲 TheMechanismStudyofYangxueqingnanGranulesinProtecting NerveFunctionOfMCAoModeiRats WANGZhong—lin (TheAffiliatedHospitalofShandongUniversityofTCM,Jinan250011,Shandong,China) Abstract:Objective:TostudythemechanismofYangxueqingnanGranulesinprotectinginjuredcerebrumofMCA0rats.Meth— ods:Purebredhealthywhiteratsof22monthswerechosenandcerebralischemiamodelswereinducedbyblockingthemiddlecerebral arterywiththread.ThetreatinggroupwerefedwithYangxueqingnanGranules.Thestomachsofcontrolgroupandsham—operative groupwerefilledwithequalamountofphysiologicalsaline.Results:Intreatinggroup,thesymptomsofdefectofnervefunctionof modelratswererelivedsignificantly,EEGofthefrontalandparietallobeinblockedsidethathaddescendentamplitudeandlowfre— quencywasimproved.Theobservationofcerebralhistomorphologyindicatedthatastrocytemultiplieatednotablyandtheneuronsonly decreasedlittleinischemiaareacontrastedwiththecontrolgroup.TheCBFWasalsoremarkablyimprovedThecontentofGSHand GSH— PXinthebloodincreasedwhilethatofMDAreducedaSaresultofdepression.Conclusion:Therearemanyrespectsabout YangxueqingnanGranulesinprotectingischemiacerebrumandoneofthemainmechanismsoftreatingischemiacerebraldamageistO enhanceastrocyteactivity,protectneuronsfromischemiadamageandimproveCBFandcounterfreeradicaldamage. Keywords:YangxueqingnanGranules;MCAOmodel;experimentalstudy ? 706?
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