HPLC法测定清咽宁喷雾剂中咖啡酸的含量 .doc

HPLC法测定清咽宁喷雾剂中咖啡酸的含量 .doc HPLC法测定清咽宁喷雾剂中咖啡酸的含量 【摘要】 目的 建立测定清咽宁喷雾剂中咖啡酸含量的方法。方法 采用高效液相色谱法，用依利特BDS C18色谱柱(200 mm×5.0 mm，5 μm)，以甲醇 0.013 mol/L磷酸盐缓冲液(体积比23?77)为流动相;流速为1.0 mL/min，检测波长为320 nm。结果 在0.042 5, 0.425 μg范围内，峰面积与进样量线性关系良好(r,0.999 9)，加样平均回收率为99.05%，RSD为2.9%。结论 该法简便、可靠、准确，结果满意。 【关键词】 HPLC;清咽宁喷雾剂;咖啡酸;含量测定 Determination of caffeic acid in Qingyanning spray by HPLC Abstract:Objective To establish an HPLC method for determination of caffeic acid in Qingyanning spray. Methods The sample n (200 mm×5.0 mm,5μm) using methanol 0.013 mol/L phosphate salt solution (23?77) as the mobile phase. The floL/min and the detection .Results The method exhibited good linearity from 0.042 5 to 0.425 μg (r=0.999 9). The average recovery ethod is convenient, reliable and accurate for the quality control of the spray. Key m×200 mm，5 μm);流动相:甲醇 磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钠1.56 g，加水使溶解成1 000 mL，再加1%磷酸溶液调节pH值至3.8,4.0)(体积比23?77)，流速:1.0 mL/min;理论板数以咖啡酸峰计算，不得低于3 000。 2.2溶液的制备 2.2.1对照品溶液的制备 精密称取在110 ?干燥至恒重的咖啡酸对照品适量，加甲醇制成每1 mL含咖啡酸30 μg的溶液，即得。 2.2.2供试品溶液的制备 精密量取本品2 mL，加醋酸乙酯振摇提取3次，每次10 mL，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇适量，使溶解，移入50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，滤过，取续滤液，即得。 2.3测定波长的确定 取对照品(0.030 mg/mL)溶液，在500,200 nm波长范围内进行扫描，结果在320 nm波长处有最大吸收，见图,，故确定检测波长为320 nm。 ,.,色谱条件的确定 在上述色谱条件下，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5 μL，注入液相色谱仪测定。结果咖啡酸在15 min内出峰，而且与前后的峰均有较好的分离，理论板数在3 000以上。见图2，图3。 图1紫外光谱图 略 按本品制剂中工艺方法制得去蒲公英和忍冬藤的空白制剂，与供试品溶液色谱和咖啡酸对照品溶液色谱比较，结果阴性样品中未见咖啡酸色谱峰，见图4。 图2,图4 略 2.,线性关系考察 精密称取在110 ?干燥至恒重的咖啡酸对照品17.0 mg,置100 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取上述对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0和5.0 mL分别置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件分别注入液相色谱仪5 μL，测定峰面积。以进样量(m)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，绘制曲线并进行回归分析，得回归方程,=,, ,,,m-,, ,,,，r=0.9999。结果表明:咖啡酸在0.0425,0.425 μg范围内峰面积与进样量呈良好的线性关系。 2.,精密度试验 精密吸取上述线性关系考察中第3号对照品溶液，按上述液相色谱条件，进样测定,次，结果峰面积的,,,值为1.2?，表明方法精密度良好。 2.,重复性试验 取本品(批号040628)5份，按“2.2.2”项方法制备，进样测定，结果咖啡酸平均质量比为0.500 mg/g，其,,,值为1.97%，表明方法重复性好。 2.,加样回收率试验 取本品(批号040628)6份，精密加入咖啡酸对照品溶液(0.3 mg/mL)，按“2.2.2”项方法制备，进样测定，结果见表,。 表1咖啡酸回收率试验结果(略) 2.,稳定性试验 取本品(批号040628),按“2.2.2”项方法制备，分别于0、1、2、4、8、24 h进行测定峰面积，结果,,,值为1.3,，表明本品供试品溶液在0,24 h内基本稳定。 2.10样品测定 取本品3批，照“供试品溶液”和“对照品溶液”方法制备，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液5 μL，按上述色谱条件进行测定，按外标法计算。结果见表,。 表2咖啡酸含量测定结果 略 3讨 论 3.1咖啡酸作为蒲公英、忍冬藤两药的抗菌抗病毒的有效成分之一，因咖啡酸微溶于水，易溶于热水和冷乙醇〔,〕，常用5,(质量分数)甲酸的甲醇溶液、乙醚或醋酸乙酯等提取，本文采用醋酸乙酯为溶剂提取,次，能有效地提取本品的咖啡酸。实验表明该法专属性，重现性较好，结果可靠。 3.2通过实验研究，本文建立了清咽宁喷雾剂中咖啡酸含量的HPLC测定法。本法提取较为完全，方法简便可行, 咖啡酸与其他杂质峰分离效果良好，从而为该制剂质量标准的制订提供了依据。 【