益气复胰汤汤剂与中药配方颗粒化学成分的对比研究

益气复胰汤汤剂与中药配方颗粒化学成分的对比研究 益气复胰汤汤剂与中药配方颗粒化学成分的 对比研究 作者:刘志承陈圻昌陈军索 娟 【摘要】目的对益气复胰汤传统汤剂与中药配方颗粒有效成分(或指标成分)的 含量进行测定探讨益气复胰汤中药配方颗粒在中药复方配伍中应用的可行性。方法 采用高效液相色谱方法对益气复胰汤汤剂与中药配方颗粒中黄芪甲苷、芍药苷和延 胡索乙素等指标成分进行含量测定。结果益气复胰汤 1 号汤剂与中药配方颗粒中的 黄芪甲苷含量分别为 0(031和 0(039;益气复胰汤 2 号汤剂与中药配方颗粒中的 芍药苷含量分别为 0(41和 0(39;益气复胰汤 3 号汤剂与配方颗粒中的延胡索乙 素含量分别为 0(011和 0(016。结论两者主要指标成分的含量差异无统计学意义 为中药配方颗粒在中药复方配伍中的应用提供了实验依据。 【关键词】益气复胰 汤;中药配方颗粒;高效液相色谱法 【 Abstract 】 ObjectiveTodeterminethecontentoftraditionaldecoctionofYiqifuyiandthetraditionalChinesemedicineformulagranulesapproachedthefeasibilityofusetheYiqifuyiprescriptiondruggranulesinChinesemedicinecomplexcompatibility.MethodsTheHPLCmethodwasusedtodetectthecontentofastragalosidepaeoniflrinandtetrahydropalmatinebothinYiqifuyidecoctionandformulagranulas.ResultsThecontentofastragaliinYiqifuyinumberandtheformulagranulesare0(031and0(039thecontentofpeoniflorininYiqifuyinumber2andtheformulagranulesare0(41and0(39andthecontentoftetrahydropalmatineinYiqifuyinumber3andtheformulagranulesare0(011and0(016.ConclusionThecontentofthemainindexingredientsinYiqifuyidecoctionandtheformulagranuleshavenosignificantdiffrence.Ithasmadefoundationfortheuseofformulagranulesonclinic. 【Keywords】DecoctionofYiqifuyi;Formulagranule;HPLC 中药汤剂是我国应用最早、最广泛的一种剂型。但是中药汤剂系饮片临用煎汤，存 在着用药不及时;携带、存储不方便;煎煮方法、程序烦琐，不;饮片配量不 准确等问题。这些问题的存在严重制约了中药汤剂的使用和中药现代化的发展。将 单味中药水煎液制成中药配方颗粒随方配伍冲服，是中药现代化的一种思路。中药 配方颗粒是将符合炮制规范的中药饮片经提取、浓缩、干燥等制药工艺，按一定比 例制成的散剂或颗粒剂2，它保持了传统用药的特点，可随证加减，运用灵活，安全 有效。中药配方颗粒不需煎煮、即冲即服，具有简单、快捷、方便等优点。随着现 在生活节奏的加快，越来越多患者更愿意选择中药配方颗粒代替汤剂。 但这一剂 型能否在临床上真正替代中药汤剂，其疗效如何，目前仍是值得探讨的问题，应该 从质量标准、药效学和临床疗效等多方面进行全面评价。益气复胰汤 1 号、2 号、 3 号是深圳市第二人民医院糖 ，在临床上以汤剂的形式应用，临床尿病专科使用多 年的“协定处方”证明其疗效确切1。本研究对益气复胰汤汤剂与中药配方颗粒中有效 成分(或指标成分)进行研究，以方中黄芪甲苷、芍药苷和延胡索乙素为指标成分 进行含量测定，为中药配方颗粒在中药复方配伍中的应用提供实验依据。 1 益气 复胰汤 1 号汤剂与中药配方颗粒中黄芪甲苷成分的比较 1(1 益气复胰汤 1 号 组成黄芪 30g、柴胡 10g、白芍 15g、荔枝核20g、丹参 20g、熟地黄 20g、山药 20g、 山茱萸 10g、葛根 20g、白术12g、茯苓 20g、鬼箭羽 15g黄芪、柴胡、白芍、荔枝 核、丹参、熟地黄、山药、山茱萸、葛根、白术、茯苓、鬼箭羽等药材经鉴定均符 合《中国药典》2005 年版一部质量要求。 1(2 益气复胰汤 1 号中药配方颗粒 黄芪、柴胡、白芍、荔枝核、丹参、熟地黄、山药、山茱萸、葛根、白术、茯苓、 鬼箭羽等中药配方颗粒由广东一方制药有限公司提供。 3 1( 益气复胰汤 1 号 汤剂的制备按处方量称取黄芪、柴胡、白芍、荔枝核、丹参、熟地黄、山药、山茱 萸、葛根、白术、茯苓、鬼箭羽饮片加 8 倍量水浸泡 10min煎煮 30min第 2 次加 6 倍量水煎煮30min滤过合并二次滤液滤液减压浓缩至 1 ? 1饮片 g/ml放置备用。 1(4 益气复胰汤 1 中药配方颗粒的配制按处方量取黄芪、柴胡、白芍、荔枝核、丹参、熟地黄、山药、山茱萸、葛根、白术、茯苓、鬼箭羽配方颗粒加水制备成 1 ? 1饮片 g/ml放置备用。 1(5 益气复胰汤 1 号黄芪甲苷的含量测定 1(5(1 仪器与试药 Agilent1100 高效液相色谱仪包括:四元泵在线脱气机柱温箱; SartoriusBP211D 蒸发光散射器美国惠泽;十万分之一天平北京塞多利斯天平有限公司乙腈美国 Fisher 公司色谱纯;甲醇、正丁醇、氨试液AR均为广州化学试剂厂;水为超纯水、黄芪甲苷中国药品生物制品检定所批号:110753-200212供定量测定用;益气复胰汤 1 号汤剂自制;益气复胰汤 1 号配方颗粒自制;益气复胰汤 1 号配方颗粒阴性供试品自制。 1(5(2 方法与结果?色谱条件:色谱柱:KromasilC 18 250mm × 4 ( 6mm5 μ m ; 流 动 相 : 乙 腈 - 水 32 ? 68 ; 流 8ml/min;速:0( 0ml/min漂移管温度为 90?; ELSD 参 2(进样量:10μl;理论塔板数以黄芪甲苷计算不低于 4000?对照品数:气体流速为 溶 00mg 置 10ml 量瓶中用甲醇溶液的制备:精密称取黄芪甲苷对照品 5(解并稀释至刻度摇匀即得 0(5mg/ml 的黄芪甲苷对照品溶液?标准曲线与线性关系:精密吸取对照品溶液 4、8、12、16、20μl 进样测定以对照品溶液质量浓度的自然对数为横坐标x峰面积的自然对数 为 纵 坐 标 y 绘 制 标 准 曲 线 计 算 回 归 为 y1 ( 294 ×10-6x0(02748r0(9996黄芪甲苷在 2(024,10(120μg 的方 程 范围内线性关系良好;?供试品溶液的制备:分别精密量取益气复胰汤 1号汤剂与配方颗粒汤剂各 20(0ml用水饱和正丁醇振摇提取 4 次4×60ml合并正丁醇液用氨试液充分洗涤 2 次每次 60ml弃去氨液正丁醇液蒸干残渣加 10ml 水使溶液通过 D101 型大孔吸附树脂柱内径1(5cm长 12cm以水 50ml 洗脱弃去水液再用 40乙醇 30ml 洗脱弃去洗脱液继用 70乙醇 80ml 洗脱收集洗脱液蒸干用甲醇溶解并定容至 5ml 量瓶中摇匀即得;?阴性供试品溶液的制备:准确量取益气复胰汤 1 号配方颗粒汤剂缺黄芪的阴性样品适量照“?”项下方法操作制备阴性供试品溶液?精密度试验:取黄芪甲苷对照品溶液在1d 内连续进样 5 次每次 10μl计算峰面积 RSD 为 1(90n5?稳定性试验:取所制备的益气复胰汤 1 号配方颗粒汤剂分别在 0、3、6、12、18、24、36、48h 测定黄芪甲苷的峰面积计算黄芪甲苷峰面积的RSD 为 1(64。结果表明供试品溶液在 48h 内稳定;?重现性试验:精密称取同一批益气复胰汤 1 号配方颗粒汤剂 5 份各约 20ml按“?”供试品溶液制备进样分析测定相应的峰面积计算黄芪甲苷平均质量分数为 0(036RSD1(26n5表明方法的重现性良好?回收率试验:精密称定已测定的益气复胰汤 1 号配方颗粒汤剂 6 份各约10ml分别精密加入黄芪甲苷 0(5mg按供试品溶液制备项下操作计算回收率平均回收率为 98(6RSD1(92?样品的测定:分别取不同批次的益气复胰汤 1 号按照供试品液制备项下方法操作得供试品溶液分别精密吸取供试品溶液 10μl按照上述色谱条件分析测定以外标两点法计算样品的测定结果见表 1HPLC 分析图谱见图 1。 2 益气复胰汤 2 号汤剂与中药配方颗粒中芍药苷成分的比较 2(1 益气复胰汤 2 号组成生晒参 15g、知母 12g、牡丹皮 10g、天花粉 20g、生地黄 30g、泽泻 15g、白芍 15g、麦冬 15g、五味子 10g、丹参 20g、山茱萸 10g、葛根 20g(生晒参、知母、牡丹皮、天花粉、生地黄、泽泻、白芍、麦冬、五味子、丹参、山茱萸、葛 根等药材经 。 鉴定均符合《中国药典》2005 年版一部质量要求) 2(2 益气复胰汤 2 号中药配方颗粒生晒参、知母、牡丹皮、天花粉、生地黄、泽泻、白芍、麦冬、五味子、丹参、山茱萸、葛根配方颗粒由广东一方制药有限公司提供。 2(3 益气复胰汤 2 号汤剂的制备按处方量称取生晒参、知母、牡丹皮、天花粉、生地黄、泽泻、白芍、麦冬、、五味子、丹参、山茱萸、葛根饮片加 8 倍量水浸泡 10min煎煮 30min第 2 次加 6 倍量水煎煮 30min滤过合并二次滤液滤液减压浓缩至 1 ? 1g 饮片/ml放置备用。 4 2( 益气复胰汤 2 号中药配方颗粒汤剂的制备按处方量取生晒参、知母、牡丹皮、天花粉、生地黄、泽泻、白芍、麦冬、五味子、丹参、山茱萸、葛根配方颗粒加水制备 1 ? 1g 饮片/ml放置备用。 2(5 益气复胰汤 2 号芍药苷的含量测定 2(5(1 仪器与试药 Agilent1100 高效液相色谱仪包括:四元泵在线脱气机柱温箱;SartoriusBP211D十万分之一天平北京塞多利斯天平有限公司。乙腈美国 Fisher 公司色谱纯磷酸、甲醇、乙 芍药苷中国药品生物制品醇AR均为广州化学试剂厂水为超纯水。检定所批号:110736-2130423;益气复胰汤 2 号汤剂自制;益气复胰汤 2 号配方颗粒汤剂自制;益气复胰汤 2 号配方颗粒汤剂阴性供试品自制。 2(5(2 方法与结果?色谱条件:色谱 柱:KromasilC18250mm×4(6mm5μm;流动相:乙腈-0(1磷酸溶液 14 ? 86 ;检测波长为 230nm柱温:30?;进样量 10μl;流速:0(8ml/min理论板数按芍药苷峰计算应不低于 2000;?对照品溶液的制备:精密称取在干燥器中用五氧化二磷减压干燥 36h 的芍药苷对照品适量置于量瓶中用甲醇溶解并稀释至刻度使其浓度为 0(521mg/ml摇匀作为芍药苷对照品溶液?标准曲线与线性关系考:分别精密吸取芍药苷对照品溶液 0(0521、0(1024、0(2084、0(3126、0(4168、0(521mg/ml芍药苷溶液按上述色谱条件各进样 10μl，测定峰面积。以芍药苷的进样量为横坐标芍药苷的峰面积为纵坐标回归得回归方程:y13541(04593X-25(3405r0(9998。结果表明芍药苷的进样量在 0(521,5(2l0μg 范围内与其峰面积有良好的线性关系;?供试品溶液的制备:分别精密量取益气复胰汤 2 号汤剂与配方颗粒汤剂各 20(0ml用石油醚60,90?萃取 2 次每次 30ml弃去石油醚层水层用乙酸乙酯萃取 3 次，每次 30ml弃去乙酸乙酯层水层用浓氨试液调 pH11 左右用水饱和正丁醇萃取 33 次，每次 30ml合并正丁醇萃取液用正丁醇饱和的水 50ml 洗涤 1 次弃去水液正丁醇萃取液水浴蒸干残渣加甲醇溶解并定量转移至 5ml 量瓶中加甲醇至刻度摇匀即得供试品溶液;?阴性供试品溶液的制备:准确量取益气复胰汤 2号配方颗粒汤剂缺白芍牡丹皮的阴性样品适量照“?”项下方法操作制备阴性供试品溶液?精密度试验:取芍药苷对照品溶液在 1d之内连续进样 5 次每次 10μl计算峰面积 RSD 为 0(81n5?稳定性试验:取所制备的益气复胰汤 2 号配方颗粒汤剂分别在 0、2、4、 8、6、 10h 测定黄芪甲苷的峰面积计算芍药苷峰面积的 RSD 为 1(15。结果表明供试品溶液在 10h 内稳定;?重现性试验:精密称取同一批益气复胰汤 2 号配方颗粒汤剂 5 份各约 20ml按“?”供试品溶液制备进样分析测定相应的峰面积计算芍药苷平均质量分数为0(36RSD0(59n5表明方法的重现性良好?回收率试验:精密称定已测定的益气复胰汤 2 号配方颗粒汤剂 6 份各约 10ml分别精密加入芍药苷 0(521mg按供试品溶液制备项下操作计算回收率平均回收率为 97(9RSD1(84?样品的测定:分别取不同批次的益气复胰汤 2 号按照供试品液制备项下方法操作得供试品溶液分别精密吸取供试品溶液 10μl按照上述色谱条件分析测定以外标两点 法计算样品的测定结果见表 2HPLC 分析图谱见图 2。 3 益气复胰汤 3 号中药配方颗粒与汤剂中延胡索乙素含量的比较 3(1 益气复胰汤 3 号组成黄芪 15g、地龙 15g、肉桂 10g、附子20g、熟地黄 20g、金樱子 15g、桑椹子 15g、牛膝 15g、鸡血藤 30g、延胡索 10g、山药 15g、茯苓 20g、(黄芪、地龙、肉桂、附子、熟地黄、金樱子、桑椹子、牛膝、鸡血藤、延胡索、山药、茯苓等药材经 。 鉴定均符合《中国药典》2005 年版一部质量要求) 3(2 益气复胰汤 3 号中药配方颗粒黄芪、地龙、肉桂、附子、熟地黄、金樱子、桑椹子、牛膝、鸡血藤、延胡索、山药、茯苓配方颗粒由广东一方制药有限公司提供。 3 3( 益气复胰汤 3 号汤剂的制备按处方量称取黄芪、地龙、肉桂、附子、熟地黄、金樱子、桑椹子、牛膝、鸡血藤、延胡索、山药、茯苓饮片加 8 倍量水浸泡 10min煎煮 30min第 2 次加 6 倍量水煎煮30min滤过合并二次滤液滤液减压浓缩至 1 ? 1饮片 g/ml放置备用。 3(4 益气复胰汤 3 号中药配方颗粒汤剂的制备按处方量取黄芪、地龙、肉桂、附子、熟地黄、金樱子、桑椹子、牛膝、鸡血藤、延胡索、 茯苓配方颗粒加水 1 ? 1饮片 g/ml放置备用。 山药、 3(5 益气复胰汤 3 号延胡索乙制备 素的含量测定 3(5(1 仪器与试药 Agilent1100 高效液相色谱仪包括:四元泵在线脱气机柱温箱SartoriusBP211D十万分之一天平北京塞多利斯天平有限公司。延胡索乙素对照品中国药品生物制品检定所批号:726-8903;甲醇为色谱纯水为纯净水其他试剂均为分析纯。益气复胰汤 3 号汤剂自制;益气复胰汤 3 号配方颗粒汤剂自制;益气复胰汤 3 号配方颗粒汤剂阴性供试品自制。 3(5(2 方法与结果?色谱条件:色谱柱:KromasilC18250mm×4(6mm5μm;流动相:甲醇-水-三乙醇胺溶液70 ? 30 ? 0(5;检测波长为 280nm;柱温:25?;进样量 15μl;流速:1ml/min，理论板数按延胡索乙素峰计算应不低于 3000;?对照品溶液的制备:准确称取延胡索乙素对照品 4(01mg置于 100ml 容量瓶中加甲醇至刻度摇匀作为对照品溶液;?标准曲线与线性关系考察:分别精密吸取对照品溶液 0(1、0(2、0(4、0(8、1(0ml，分别置于 1ml 容量瓶中，加甲醇定容摇匀，分别吸取不同浓度对照品溶液 20μl，进行分析测定。以平均峰峰面积值y为纵坐标，进样量x为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为 y217889x4340(2r0(9999。结果表明，延胡索乙素进样量在 0(08,0(80μg 范围内呈良好的线性关系?供试品溶液的制备:分别精密量取益气复胰汤 3 号汤剂与配方颗粒汤剂各 10(0ml，水浴蒸干，残渣加甲醇-浓氨水溶液20 ? 1适量使溶解，转入 10ml 容量瓶中，用甲醇-浓氨水溶液定容，摇匀，经0(45μm 微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液?阴性供试品溶液的制备:准确量取益气复胰汤 3 号配方颗粒汤剂缺延胡索的阴性样品适量，照“?”项下方法操作，制备阴性供试品溶液?精密度试验: 在 取延胡索乙素对照品溶液， 1d 之内连续进样 6 次，每次 15μl，计算峰面积 RSD 为 1(29，表明精密度良好?稳定性试验:取所制备的益气复胰汤 3 号配方颗粒汤剂，分别在 0、2、4、6、8、12h 测定延胡索乙素的峰面积，计算延胡索乙素峰面积的 RSD 为 1(62。结果表明，供试品溶液在 12h 内稳定?重现性试验:精密称取同一批益气复胰汤 3 号配方颗粒汤剂 5 份，各约 10ml，按“?”供试品溶液制备进样分析测定相应的峰面积计算延胡索乙素平均质量分数为0(018RSD0(59n5表明方法的重现性良好;?回收率试验:精密称定已测定的益气复胰汤 3 号配方颗粒汤剂 6 份各约 5ml分别精密加入延胡索乙素 0(521mg按供试品溶液制备项下操作计算回收率平均回收率 为 96(8RSD2(18;?样品的测定:分别取不同批次的益气复胰汤 3 号按照供试品 液制备项下方法操作得供试品溶液分别精密吸取供试品溶液 10μl按照上述色谱条 件分析测定以外标两点法计算样品的测定结果见表 3HPLC 分析图谱见图 3。