芦丁的鉴定

芦丁的鉴定 实验 芦丁的鉴定 实验目的 实验内容 思考题 实验目的 掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮苷、苷 元和糖部分的鉴定方法 实验内容一、化学检识 取芦丁3 4mg，用无水乙醇5 6ml溶解，分成3份做以下试验。 (1)取上述溶液1 2ml，加2滴浓盐酸，摇匀，再酌加少许镁粉， 注意观察颜色变化情况 (2)取上述溶液1 2ml，加 2ZrOCl2 的甲醇溶液，注意观察颜色变 化情况，再继续向试管中加入2柠檬的甲醇溶液，并详细记录 颜色变化情况 (3)α-茶酚反应(Molishs Reacfion) 取上述溶液1 2ml，然后加10α-茶酚乙醇溶液，摇匀，沿 管壁滴加浓硫酸，注意观察两液面产生的颜色变化二(纸色谱及薄层色谱鉴别 1. 纸色谱: 新化一号层析滤纸 样 品: 自制芦丁、槲皮素 对照品: 芦丁、槲皮素 展开剂: 1 正丁醇-醋酸-水(4:1:5上层或4:1:1) 2 25醋酸水溶液 3 85醋酸水溶液 显 色: 1 可见光下观察，再在紫外光下观察 2 经氨气后再观察 3 喷三氧化铝试剂后再观察2 .芦丁和槲皮素的聚酰胺薄层色谱鉴定: 新化一号层析滤纸 样 品: 自制芦丁、槲皮素 对照品: 芦丁、槲皮素 展开剂: 乙醇-水(7:3) 显 色: (1)可见光下观察，再在紫外光下观察 (2)经氨气后再观察 (3)喷三氧化铝试剂后再观察3 .糖的检出一纸色谱析法: 取上述滤除槲皮素时保留的水解滤液20ml加BaOH2 的细粉(约2.6克)中和至PH7。滤除生成的BaSO4沉淀 (可用滑石粉助滤)。滤液浓缩至约1ml。供纸层析点样 用。 展开剂 正丁醇-醋酸-水(4:1:5上层或4:1:1) 对照品 葡萄糖、水解液鼠李糖水溶液 显色剂 苯胺邻苯二甲酸盐试剂喷后，105?烘十分 钟。显棕色或红色斑点。三、槲皮素五甲醚的制备 取槲皮素结晶4000mg，置于150ml的三颈瓶中，加50ml无水丙酮， 装上电动搅拌器，冷凝管及温度计，加热回流搅拌，每间隔一适当时 间加入无水碳酸钾0.2克和硫酸二甲酯0.2ml，大约在1.5小时左右加完 4克无水碳酸二甲酯，继续加热回流搅拌直至溶液黄色完全消退为止， 约需45小时，停止加热，取下烧瓶，反应液经过滤，沉淀用热丙酮洗 涤数次，合并洗、滤液、蒸馏回收部分丙酮，留存10 15ml，放置， 渐渐析出无色结晶，母液浓缩，复得一批结晶，如母液浓缩后呈糖浆 状不能析出结晶，应加5NaOH数滴，振摇使硫酸二甲酯水解，此时又 可析出一小部份结晶，合并，以乙醇重结晶 得皮槲素五甲醚mp152 153?四、槲皮素的降解 取槲皮素50mg，置于圆底烧瓶中，加水5ml，乙醇6ml， KOH2g，置水浴上加热回流10小时，蒸去乙醇，加水50ml溶 解，用浓盐酸酸化至pH 2 3，用乙醚萃取三次，合并乙 醚液，回收乙醚，供薄层层析点伴用。五、槲皮素降解产物的薄层色谱 硅胶-CMC-Na薄层 对照品:原儿茶酸(Protocatechuic acid) 间苯三酚(Phloroglucinol)。 展开剂:氯仿-丙酮-醋酸(8:2:0.5) 显色剂:三氧化铁试剂六、紫外吸收光谱测定槲皮素(一)原理 利用紫外吸收光谱，测定黄酮化合物在加入各种电解 质或络合剂后吸收峰的位移，根据位移的情况，以判断该 化合物羟基的位置(二)试剂 无水甲醇 甲醇钠溶液 氢氧化钠溶液 三氯化铝溶液 醋酸钠 硼酸饱和液(三)测定方法 1(黄酮羟基位置的测定: 精密称取黄酮样品(槲皮素)约1.2mg，用无水甲醇溶解，再稀释至 100ml (1)黄酮光谱:取样品溶液约3ml，在200500nm波段内进行扫描。 (2)氢氧化钠光谱:取样品溶液约3ml，加入氢氧化钠溶液23滴立即测 定。放置5分钟后，再测定。 (3)甲醇钠光谱:取样品溶液约3ml，加入甲醇钠溶液57滴后，立即进 行测定，放置5分钟后，测定。 (4)三氯化铝光谱:在盛有约3ml样品溶液的石英杯中，加入三氯化铝 溶液6滴，放置一分钟后进行测定，测定后，加入3 滴盐酸溶液(浓盐酸:水1:1)，测定。 (5)醋酸钠光谱:取样品溶液约3ml， 加入过量的无水醋酸钠固体，摇 匀:杯底剩有约2mm的醋酸钠后，三分钟内进行测定(四)测定结果槲皮素加位移试剂结果(λnm) 加入试剂 编号 II峰 I峰 位移值 羟基位置 无水甲醇 1 256 371 NaOH 2 430 I峰?59 4’-OH NaOH5’ 2’ 分解 分解 3，4’-OH MeONa 3 416 I峰?45 3-OH MeONa5 3’ 分解 分解 3，4’-OH AlCI3 4 270 450 I峰?79 3，5及3’4’-OH AICI3/HCI 4’ 265 425 I峰?54 3’，4’-OH NaOAC 5 277 387 II峰?21 7-OHNaOAC/H3BO3 3 259 385 I峰?14 3’，4-OH 克分子吸收系数的测定:根据已测定的黄酮光谱，测量吸收峰的波 长和吸收峰前后20nm的波长范围。然后取样品溶液约3ml，置于1cm长的 石英杯中，测UV，仔细测量在上述波长范围内各波长的吸收值，反复测 定三次。 思考题及记录 思考题:(1)芦丁和槲皮素用不同展开剂系统展层将出现什么结果,为什么,(2)芦丁和纹に鼐埘,繁〔闵捉鱿质裁唇峁课裁矗?记录:(1)芦丁和槲皮素的纸色谱、聚酰胺薄层色谱结果。(2)糖的检出纸色谱结果。 记录:(1)位移测定的结果(2)测定克分子吸收系数、在吸收峰前后20nm波长范围内，依次测定波 长和吸收值，用方格纸作图，精确的测出吸收峰的波长和吸收值，记 录测定结果。