转化生长因子-β在妊娠期肝内胆汁淤积症患者胎盘上的表达及意义

转化生长因子-β在妊娠期肝内胆汁淤积症患者胎盘上的表达及意义 转化生长因子-β在妊娠期肝内胆汁淤积症患者胎盘上 的表达及意义 四川大学 博士学位论文 转化生长因子-β在妊娠期肝内胆汁淤积症患者胎盘上的表达及 意义 姓名:艾瑛 申请学位级别:博士 专业:妇产科学 指导教师:曹泽毅;刘淑芸 20030501 博士学位论文 转化生长因子(13及其受体在妊娠期肝内胆汁淤积症患者 胎盘上的表达及意义 导师:曹泽毅教授 刘淑芸教授 研究生:艾瑛 摘 要 cholestasis l目的】妊娠期肝内胆汁淤积症 Intrahepatic ofpregnancy， ICP 是妊娠期特有的疾病，对胎儿危害极大，其病因和发病机理尚不明 确。近年来有研究发现该病的发生与妊娠期母儿间的免疫耐受(免疫排斥 factor―日，TGF 一 growth 平衡紊乱有关。转化生长因子(0 transforming 13 在妊娠期起着重要的免疫调节作用。本文探讨了胎盘TGF―B的表达 在ICP发病中的意义。[方法]采用免疫组织化学染色技术 SP法 检测 ICP患者和正常妊娠胎盘组织中TGF-Bl、2、3三种亚型和两种功能型 RI和TGF―B 受体 TGF一8 RII 的表达水平;通过体外培养胎盘组织， 了解TGF一目2对胎盘产生IFN-?和TNF一0L的影响;胎盘培养上清液中 TGF―B 2表达的平均面积、染色强度和IOD值均明显小于正常妊娠组 r一0(824，p O(01 ;TGF―B RII的表达面积和IOD值高于『F常妊娠组 P O(01，P O(05 ;而TGF―Bl、3和TGF一0 2 培养 RI与正常相似。 博士学位论文 明显高于『F常妊娠组 P 0(001 ;TGF―B2可抑制ICP胎盘组织分泌 TNF―d和IFN―Y，且抑制作用随作用时间的延长、剂量的增加而加强。[结 2, 论]ICP患者存在妊娠免疫耐受一免疫排斥不平衡的原因可能与TGF(B TGF―BRII表达异常有关。ICP患者胎盘TGF―B2产生减少，免疫保护作 用减弱，使得不利于妊娠的THl型细胞因子TNF一0【、IFN―y过度分泌， 免疫排斥反应增强，是ICP发病的机制之,。 关键词:妊娠肝内胆汁淤积 转化生长因子胎盘细胞因子 博士学位论文 The and of Significancetransforminggrowth Expression factor-13andits onPlacentaof Receptor Intrahepatic Cholestasisof Pregnancy of doctorate:Cao Supervisor Zeyi Liu Shuyun Doctorate:Ai Ying Abstract cholestasisof [Objectives]Intrahepatic adiseasethatOccurs half thesecondof does during and pregnancy harmtothefetus(1ts and arenot great etiologypathogenesis cIear(Recentstudieshave thatthe disturbanceimmune suggested of tolerance―immune contributetothe of rejectionmay pathogenesis factor―B TGF―B iSan immune ICP(Transforminggrowth important factor was to regulatoryduringpregnancy(This study designed the ofTGF―Bin investigate significance ICP([Methods]The ofthree ofTGF―B TGF―B their expressionsubgroups 1，2，3 and R LOtS TGF一0IandTGF―BR human recep II on inICPand placenta normal was pregnancyinvestigatedby of effect TGF―B2onthe of SP―assay :the TNF―aand production IFN―YfromICP wasstudied placenta byculturedvillous concentrationof explants:the TNF―aandIFN―Yinthe mediumof thecultureswere determined byELISA([Results] i TheTGF―目2 andIOD onthe villi stain[ng in area，density plancenta ICPwere lowerthan in significantly those normal pregnancy IOD has P O(Ol，P O(0l，P O(01 ，the correlationwith negtive theTBAinthe ofthe serum TGF一13 RII areaandIOD staining onthe vi儿i in plancenta ICPwere than significantlyhigher thoseinnormal pregnancy P 0(01， P O(05 :while the of TGF―B and expressionI，3 TGF一13RIhaveno 3 博士学位论文 innormal those differencefrom placenta， 2 The Significant ofTNF,?and ICP were explants Felease IFN一丫by placenta nomal thoseinthe than l，24，48h ficantlYhigher through signi the of 2can release incubation inhibite periods P O(001 ;TGF一13 above in time―― and Cytokines dose――dependent R OR of 2,TGF―BII TGF一0 manner([Conclusions]Abnormal expression onthedi of havea role sturbanceimmune may placenta inICP(Thedecreaseof 2 lead tolerance―immune TGF―B rejection may ofTHI and toexcessive TNF―a IFN―v production cytokines type detrimental whichare to pregnancy( Keywords:Intrahepatic transforminggrowthfactor一母:cytokine 4 博士 往论支 转化生长因子(t3及其受体在妊娠期肝内胆汁淤积症患者 胎盘上的表达及意义 导师:曹泽毅教授 刘淑芸教授 研究生:艾瑛 前 言 cholestasisof 妊娠期肝内胆汁淤积症 Intrahepatic pregnancy,简称 ICP 是妊娠特有的疾病，以皮肤瘙痒、黄疸为主要症状，并有胆酸、肝 酶升高等生化异常。该病可使产后出血的发生率增高，但其更大的危害 是导致早产、胎儿宫内窘迫、死胎、死产，使围产儿病率和死亡率大大 增高，围产儿死亡率可高达1lO?。【1'2】了解其病因和发病机制，彳‘能 更 好防治该病，改善妊娠结局。遗憾的是虽然经过多年研究，该病的病因、 发病机制仍不清楚，因而也没有确切的防治。 妊娠期，由含有父体抗原的受精卵发育来的胚胎组织对母体而言是 一同种半异体移植物;同时，母体具有胎儿所没有的半数染色体，其产 生的抗原与胎儿不同，理论上讲母胎间可能发生相互免疫排斥，但实际 『F常妊娠却表现出免疫相容状态。随着生殖免疫学的兴起和发展，人们 发现母体是通过复杂的激素一免疫一细胞因子网络对妊娠的各个生理过程 博士学位论文 包括着床，胚胎生长发育以及分娩过程进行免疫调节，若这个网络的某个 环节发生异常，则导致病理妊娠。‘”因此。有学者提出了ICP发病的免 疫学说。越来越多的研究表明，ICP与母体免疫功能的紊乱有关，表现 为免疫排斥反应增强，免疫保护反应减弱，如: TS细胞减少[4]:CD8+T 细胞明显减少，CD4+,CD8+比值增高，IgG水平下降‘”，血清中抗心磷脂 向偏移【9】。 factor―B，TGF-B 是一 转化生长因子一B transforminggrowth 1,TGF一0 组二聚体肽类生长因子，包括TGF,B 5五个成员，人类主要是 TGF一8 1、TGF一璺2和TGF一旦3。TGF一8通过与其受体结合发挥生物学作 作用的功能型受体。I型受体主要功能是介导TGF―B促进细胞外基质合 成的信号通道，它没有结合TG卜8的能力，其生物活性需要II型受体的 共同参与。II型受体主要与细胞的增殖、分化密切相关。目前尚未发现 111型受体介导的TGF,B的作用，此型受体可能为储存型的TGF一13受体， 也可能有调节受体与配体间亲和力及If型受体在细胞膜上表达的功能。 „】j1 r TGF―f3在人体内大部分组织和器官中均有广泛表达，并有多种生物 学效应(近年来更注意到它是一种谣效免疫抑制因子，可抑制免疫活性细 胞的增靖，抑制淋巴细胞分化，抑制B细胞产生抗体，抑制巨噬细胞激活和 NK细胞活性，抑制外周血单个核细胞产生IFN叫和TNF一旺，并自,拮抗 炎性 细胞因子的作用;在器官移植中有对抗免疫排斥反应的作用，使移植物 存活时间延长。„’”1” 妊娠时，母体THl,TH2免疫平衡向有利于维持妊娠的TH2方向偏 博女 隹论文 移。TGF,B被认为是TH2类因子，也有人把其归为TH3因子，叮181研 究表明，作为一种多功能的细胞因子，TGF―B在妊娠中起着多方面的彳乍 用，是维持正常妊娠所必需的，可能与调节母体局部免疫反应、防止对 胎儿的免疫排斥以及胎儿的生长发育有关。近年还有学者研究了TGF一13 在妊娠高血压综合征患者、反复自然流产者、胎儿宫内发育迟缓者中的 表达，但结论尚有争议。“”“1对于TGF―B与ICP的关系，目前国内外尚 无报道。 胎盘在妊娠期起着重要盎g免疫屏障作用，它可以分泌各种蛋白、类 固醇激素、细胞因子等参与全身的免疫调节‘3“oI。胎盘滋养细胞能产生 TGF―B，对于着床、胎盘生长、发育、绒毛侵入宫内膜以及防止胎儿被 母体排斥均有重要作用”„。胎盘滋养细胞还能产生IFN-7和豫F一。c，这 两种细胞因子异常增高往往与病理妊娠有关‘3’”1。已有实验发现ICP患 水平明显高于正常妊娠组，且浓度与患者TBA水平呈正相关5引。 本研究着眼于胎盘，分以下两个部分探讨TGF―B与ICP发病的关系: l、检测TGF―B 1、2、3三种亚型及两种功能型受体 TOF一日RI和 TGF一毋RI! 在tCP患者骀盘上的表达。 2、通过体外培养胎盘组织，了解TGF一0对胎盘产生IFN―Y和TNF(o【 的影响，探讨ICP的发病机制。 参考文献: l H Reyes cholestasis:a Intrahepatic disorderof puzzling Gastroenterol pFegnancy(5 1―216( hepatol，1997，12:21 博士学位论文 in cholestasis 2 L,eta1(Intrahepatic N，Triod，Roffi Roncaylia cause Obstet clinicalcomplications abstract (Ann pregnancy:incidence Med Perinat，1991，112:146( Gynecol 3 罗丽兰主编(生殖免疫学(武汉:湖北科学技术出版社，1998(4， 57(73 4 Germanov VT，FrolovVM，Peresadin of in Ginekol characteristicscholestatic hepatosispregnancy(Akush Mosk ，1991;7:40―42( 5时青云，刘淑芸，熊庆(妊娠期肝内胆汁淤积症患者雌孕激素水平及 免疫功能的变化(中华妇产科杂志，1998:33:724-726( 6董岳，王正平，贺磊。抗心磷脂抗体与妊娠期肝内妲汁淤积症的关系。 中华妇产科杂志，1999，34 8 :491( 7时青云，刘淑芸，彭芝兰等(选择素一P及可溶性粘附分子SVCAM一1 在妊娠肝内胆汁淤积症患者中的变化及意义，中国实用妇科与产科 杂志，2001;17:347(349( 8时青云，刘淑芸，彭芝兰等(干扰素、地塞米松对妊娠肝内胆汁淤积 症患者脐带内皮细胞粘附分子一1表达的影响(中华妇产科杂志， 2001;36:630―631( 9彭冰，刘淑芸(辅助性T淋巴细胞亚型与妊娠期肝内胆汁淤积症发病 的关系(中华妇产科杂志，2002，(37 9 :516( 10孙剐主编(胎盘内分泌的基础与临床(上海:第二军医大学出版社， 2001(28，179一18l， I 1 古庆利(转化生长因子B的表达与调控(国外医学??临床生物化学与 检验学分册，2000，21:268―269( 12 唐桂林，苏先狮(转化生长因子13受体的研究进展(生物化学与生物 博士学位论文 物理进展，1999，26 5 :443―445( 13刘纯杰，张兆山(转化生长因子B的生物学特性、功能及其临床应 用自口景(生物技术通讯，200I，12:297―299， 14付清玲(转化生长因子B与移植免疫(国外医学晚疫学分册，2001， 24: 174―177( for transfer Y，et a1(Gene 15 KD，Ding QinLH，Chavin with of survival allograft transplantation(Prolongation 1(Ann TGF―B Surg，1994:220:508( 16GillRC(TGF―B islet allograft prevents Proc，199l:23:747， withinthe 17 andfailure R(Pregnancy:SUCCESS Raghupathy Immunel2001 Tht,Th2,Th3 Aug:13 4 :219― 27 paradigm(Semin to 18Clark toru imbalancedue DA，CroiK(THl,TH2，3 Tand Tcells NK―gammadelta cytokine―producingNK，gammadelta inmurine deciduainsuccessorfailureof pregnancy Immunol2001 JReprod May:45 5 :257―65 pregnancy(Am 19 JN，et H，Bulmer a1(Transforming LyallF，Simpson growth factor―beta inhuman and bedin placenta expression placental trimesternormal third fetal restriction(Am growth JPathol，2001，159 5 :1827―38( 20 CaniggiaI，Grisaru―GravnoskyS，KuliszewskyM，et a1(InhibitiOFtof 3 restorestheinvasive of TGFB capability EVTs in in preeclampsia C1 pregnancies(J Invest，1999，103:164卜 1650( 。 21 Savion S，2eldichE，OrensteinH，et a1(Cytokine expression 9 博士学位论文 intheuterusofmicewith loss:effectof maternal pregnancy withGM―CSF( inmunopotentiatiOnReproduction，2002， 123 3 :399―409( 22 a1(Plasma DjuroviCS，SchjetleinR，WiSloffF，et eoncentrations of and 1 arealteredin TGF―B Lp A lipoprotein preeclampsia(ClinGenet，1997，52:371―376( 23ShaarawyM，E1 K(Maternalserum MeleigYM，Rasheed factorbeta一2in and transforminggrowth preeclampsia biomarkerfortheassessment of eclampsia，a disease potential severiandfetal Soc ty outcome(JGynecol Investig，2001，8 i :27―3I( 24Lea RC，Underwood a1(Asubsetof J，FlandersKC，et with patients recurrent abortionisdeficientin spontaneous transforming factor―beta growth celis”in producing“suppressoruterine tissuenearthe attachment placental site(Am J Reprod Immunol，1995，34:52―64( 25OgasawaraMS，Aoki a1(Elevationof T，et K，Aoyama factor―betaliS transforminggrowth associatedwith recurrent mi C1in scarriage(J Immunol，2000，20 6 :453-7( 26Hernandez―Valencia M，Zarate A，Ochoaa1(Insul R，et in一1ike factor growth factorand I，epidermal growth transforming factorbeta growth and their expression association with intrauterinefetal growth as retardation，such development human during Obes pregnancy(DiabetesMetab2001 Dec:3 6 :457―62 0 博士学位论文 第一部分 TGF一13及其受体在妊娠期肝内胆汁淤积症患者 胎盘上的表达 Cholestasisof 妊娠期肝内胆汁淤积症 Intrahepatic Pregnancy,ICP 是一种重要的妊娠期并发症，以皮肤瘙痒、黄疸及肝功能异常为临床特 征，其早产、胎儿宫内窘迫、死胎、死产的发生率极高‘“2’3】，已在临床 上引起广泛的重视。近20多年来很多学者致力于ICP的研究，但至今其 病因和发病机制仍未十分明确【4】。 由于胎儿一胎盘是天然的同种半异体移植物，从理论上讲母胎间有可 能发生相互免疫排斥，妊娠要得以维持下去，有赖于母儿间免疫耐受一 免疫排斥平衡的建立和维持，一旦此平衡被打破，临床就表现为病理妊 娠如流产、妊高征等【5】。ICP与妊高征类似，即使病情很严重者，一旦胎 儿娩出，其病情迅速好转。故近年有学者提出了ICP发病的免疫学说， 并有研究表明ICP患者免疫功能紊乱，表现为免疫排斥反应增强，免疫 保护反应减弱„21。 growth 转化生长因子一0 transformingfactor-B，TGF―B 是在 人体内大部分组织和器官中均有广泛表达，并有多种生物学效应的因子。 近年来更注意到它是一种强效免疫抑制因子，在器官移植中有对抗免疫 排斥反应的作用，使移植物存活时间延长„““。在妊娠期间，TGF―B具 有重要的免疫调节作用，可使胚胎免受母体NK细胞和细胞毒性T淋巴细 胞的攻击，还使母体免疫反应倾向于产生有利妊娠的Th2型细胞因子， 博士学位论文 从而利于妊娠的维持“’„1。TGF―B表达异常，可能导致某些病理妊娠如 妊 高征、自然流产等“”„。但TGF-B与ICP的关系目前国内外尚未见报道。 本研究采用免疫组织化学染色技术 SP法 检测ICP患者和正常妊 R 娠妇女胎盘组织中TGF-0l、2、3三种亚型及两种功能型受体 TGF―B I和TGF―BRII 的表达水平，(并观察其与ICP患者病情程度的关系， 迸一步从胎盘病理学和分子免疫学的角度探讨ICP的发病机制。 材料和方法 一( 研究对象: 2002年2月在四川大学华西第二医院妇产科经剖宫 2001年10月- 产分娩的胎盘 1(分组及纳入 1(1 ICP组: 1 妊娠中晚期出现皮肤瘙痒，或伴有不同程度的黄疸: mol, L ， 2 实验室检查:血清总胆汁酸 TBA 增高 20u 或伴转氨酶 谷丙转氨酶ALT及谷草转氨酶AST 轻 到中度升高，可伴胆红素升高: 3 妊娠是引起皮肤瘙痒和生化异常的唯一原因; 4 患者,般情况良好，无明显呕吐、食欲不佳、虚弱及 其他疾病症状; 5 分娩后上述症状、体征、生化指标迅速恢复正常。 上述患者胎盘共28例。 1(2正常妊娠组:无妊娠并发症及合并症。共计28例。 2(排除标准 1 孕周 40周: 2 妊娠前有急慢性全身病史，肝胆疾病史或自身免疫病史: l 2 博士学位论主 3 有其他妊娠并发症及合并症或有不能用ICP解释的血、尿或 生化异常。 二(实验方法 1(主要仪器及试剂 1 包埋机:EGll40H德国LEICA 2 组织脱水机:Lxl20美国OxIS AO 3 石蜡切片机:820型 4 微波炉:格兰仕WD750ASL23型 5 一抗:均为兔抗人多克隆抗体，除TGF-132抗体购自北京中山 生物技术有限公司外，其余均购自武汉博士德生物工程有限公 司。 6 SP试剂盒:购自北京中山生物技术有限公司。试剂盒: 试剂1 蓝色液体 为封闭用正常血清工作液3ml，试剂2 黄 3ml，试剂3 橙色液体 为 色液体 为生物素标记羊抗兔IgG 辣根过氧化物酶标记链霉卵白素工作液 S―A,HRP 3ml。 2(主要缓冲液、试剂的配制 1 中性甲醛的配制 PH 7(O 40,甲醛 分析纯 200ml Na2HP04 139 KH2P04 89 蒸馏水加至2000ml 2 枸橼酸钠缓冲液 10mM，PH 6(0 枸橼酸钠 Na3C6Hs07(2[-120，分析纯 2(19 蒸馏水 1000ml 用HCI调PH至6(0 博士辛位论文 3 PBS缓冲液 PH--7(2 磷酸氢二钠 Na2HP04 】4，89 磷酸二氢钾 KH2P04 4(39 氯化钠 NaCI 10000ml 用NaOH调PH至7’2 4 DAB显色液 20 ul DAB储备液 25m‖ml，PBS配制 1x lml PBS l 3,H202 3(0u I , 4，检测原理;1(将未标记的特异性抗体即第一抗体 兔抗人TGF―B R TGF-B 3,TGF一13 2,TGF―B I,TGF―p RII 与组织中的抗原分子 TGF― 日1,TGF一02,TGF―B RI,TGF,B 3,TGF―p RII 反应。2(洗去未与抗原 结合的第一抗体后，以生物素标汜的第二抗体 革抗兔虺G 与第一抗 体结合。3(洗去未与第一抗体结合的、生物素标记的第二抗体后，以辣根 过氧化物酶标记的链霉卵白素 S一丸HRP 与标记第二抗体的生物素结 3、，3(二氨基联苯胺 ，DAB在辣根过氧化物酶 HRP 的催化下，脱氢 聚合成吲达氨聚合体，再氧化成DAB棕，形成不溶于水及有机溶剂的棕 色颗粒。5，因为酶 HRP 已经与抗体结合，所以酶促反应的产物的定位 间接地显示抗原一抗体反应的定位。抗原分子的量越多，发生反应所形成 的棕色颗粒就越多，通过图象分析测其面积和灰度就可以对抗原分子的 表达作半定量的分析。 5(实验材料分组 空白对照 阴性对照 :以PBS代替第一抗体。 待测组织:人胎盘组织 ICP组和正常妊娠组 博士学位论文 6(标本的处理 c111×0(5cm，用 10, 胎盘娩出后尽快留取新鲜母面胎盘组织约l?×1 中性福尔马林固定，入脱水机和包埋机脱水、透明、浸蜡、包埋，制成 蜡块。 7实验步骤 1 5 um石蜡切片，裱片于APES打底的洁净载玻片上。56口c烤 片2小时，37"C烤片近72小时。 2 石蜡切片脱蜡到水:切片以二甲苯脱蜡三次，每次三分钟。通 过梯度酒精:100,酒精5分钟2次，95,酒精5分钟，80,酒 精2分钟，70,酒精2分钟。蒸馏水洗，5分钟，3次。 3 用10,过氧化氢水溶液室温处理20rain，以消除内源性过氧化 物酶活性。蒸馏水冲洗3次。 (01mol,L 4 高温微波抗原修复:切片置于微波炉用具中，加入0 枸橼酸缓冲液 PH 6(0 ，液面淹没切片，然后用较松的盖子 盖上 液体沸腾时蒸汽可溢出 。置于格兰仕微波炉中，调节 功能键功率100,，时间8min，启动微波炉至缓冲液沸腾，煮 沸温度范围在98。C,100。C;调节功能键功率60,再继续维持 煮沸3rain。 5 经微波修复后冷却的切片用蒸馏水洗3次，PBS液浸洗3次， 每次3分钟。 6 1:10正常羊血清封闭蛋白，室温10分钟，倾去血清后不沈直 接滴加一抗 工作浓度均为l:100 ，4 4C过夜。 7 PBS浸洗3次，每次3min。 8 滴加生物素标记二抗 稀释度为l:100 ，37。C孵育50min。 9 PBS浸洗3次，每次3min。 10 滴加稀释的辣根过氧化物酶标记链霉卵白素 PBS1:100稀 释 ，37?孵育50rain。 悼士学位论文 11 PBS浸洗3次，每次3rain。 12 DAB显色，镜下观察进行，待显色合适时立即用自来水冲洗 细水流，冲洗5min ，终止显色。 13 Harri’s苏木素复染细胞核，室温，约3rain，自来水洗返蓝 20rain。 2rain， 精2min，无水酒精I4rain，无水酒精1l5rain，二甲苯I 二甲苯114min。用中性树胶封片。 三。染色结果的图象分析和统计学处理 1 Plus4(5软件对两组切片进行分析， 图象分析:采用Image(Pro 每张切片随机选取10x40高倍视野6个，分别测定每个视野的阳性 染色面积 meanarea 、平均密度 mean density以OD值即 std Optical intensity 。平均密度反映了局部抗原抗体反应的强弱，而IOD值则 将面积和强度综合起来，全面反映了某分子的表达量。 2( 统计学处理:所有数据输入计算机利用SPSSIO(0软件进行统 计分析。计数资料用卡方分析，计量资料主要用t检验 两组资料 比较 、方差分析 三组资料比较 。检验水准a O(05。 结果 1(一般情况:正常妊娠组和ICP组孕妇的年龄、孕产次、胎盘重量均无 统计学差异 P o(05 :ICP组新生儿出生体重较正常妊娠组小，差异 有统计学意义 P O(05 。由于ICP组中有未足月病例，孕周较正常 妊娠组小，如果去除不足月者，两组出生体重差异则无统计学意义。 见表1。 博士学位备文 表1(正常妊娠组和ICP组一般情况比较 注:计量资料以“均数?标准羔”表示;计数资料以“人数 , ”表示 为去除不足月病例后的新生儿体重 表示有统计学意义。 2(HE染色观察ICP胎盘形态学 光镜下观察ICP胎盘有明显的绒毛间隙狭窄和绒毛血管合体膜增 厚，未见明显的绒毛间质水肿，细胞滋养细胞增生和合体结节增多。见 图1―4。 3(胎盘绒毛TGF―B1的表达 正常妊娠组和ICP组胎盘绒毛表面合体滋养细胞胞浆均可见棕黄色 01表达的 阳性染色，细胞核呈蓝色。两组胎盘绒毛合体滋养细胞TGF- 平均面积、染色强度和IOD值差异无统计学意义 P O(05 。见表2，图7 一扣。 表2(正常妊娠组和ICP组绒毛表面合体滋养细胞TGF―B l的表达 mean4-sd 组别 平均面积 um1 平均强度 IOD值 145 正常妊娠组 254-17(82 O(33-+009 46(60?8(99 ICP组 148(25?25(32 0(34+0(12 47(73?1002 博士学位论文 陌组TGF―Bl的表达水平 正常妊娠组 ICP纽 4，胎盘绒毛TGF―B 2的表达 正常妊娠组和ICP组绒毛表面合体滋养细胞胞浆均可见棕黄色阳性 染色，绒毛间质也有少量着色。ICP组胎盘绒毛TGF―B 2表达的 平均面 积、染色强度和IOD值均明显小于正常妊娠组，差异有统计学意义 P o(01 。见表3，图章一陴 、 表3??止常妊娠组和ICP组绒毛表面合体滋养细胞TGF―B 2的表达 mean?sd 掣娄蕊忑毒坚生坐L―』:丝!:!!:塑!圭业: ’’，正常妊娠组比较P 00I 一 5(胎盘绒毛TGF-B 3的表达 与TGF―B 2相似，正常妊娠组和ICP组绒毛表面合体滋养细胞胞浆 均可见棕黄色阳性染色，绒毛间质也有少量着色。两组胎盘绒毛合体滋 养细胞TGF―B 3表达的平均面积、染色强度和IOD值差异无统计学意义 P 0 05 。见表4，图1鼻18。 博士擎位碴文 3的表达 mean_+sd 表4(正常妊娠组和ICP组绒毛表面合体滋养细胞TGF―B 两组TGF―B2的表达水。r lOO 90 80 70 8 ’1 60 50 40 30 正常妊娠组 IcP组 两组TGF―B3的表达水平 50O 呈45(0 40。O 正常妊娠组 ICPN 9 博士母隹心文 R 6(胎盘绒毛TGF-B1的表达 与TGF―B2相似，正常妊娠组和ICP组绒毛表面合体滋养细胞胞浆 R 均可见棕黄色阳性染色，绒毛问质也有少量着色。两组胎盘绒毛TGF―B I表达的平均面积，染色强度和IOD值差异无统计学意义 P 0(05 。见 表5，图19(211。 I的表达 mean___sd 表5(正常妊娠组和ICP组绒毛表面合体滋养细胞TGF一口R 两组TGF,BRI的表达水平 70(0 鸯60(0 50(0 正常妊娠组 ICP组 7(胎盘绒毛TGF―BRII的表达 『F常妊娠组和ICP组绒毛表面合体滋养细胞胞膜和胞浆均可见棕黄 色阳性染色，部分合体滋养细胞尤其是表达强度高的细胞可见细胞核的 阳性染色 即核阳性现象 ，绒毛间质也有着色。ICP组胎盘绒毛TGF一8R 20 博士学位论文 度无显著差异 P O(05 。见表6，图2l一2‘。 RII的表达 mean_+sd 表6(正常妊娠组和ICP组绒毛表面合体滋养细胞TGF―B 组别 平均面积 um’ 平均强度 IOD值 正常妊娠组 142(69?11(72O(45?O(04 63(20?2(96 68(12?9(878 ICP纽 152(02?13(34++045?0(08 01 ??与丁F常妊娠组比较P 005，?与正常妊娠组比较P 0 两组TGF-口RlI的表达水平 70 量65 正常妊娠组 ICP组 8(ICP组TOF―B2,TGF一8 R?表达的IOD值与母血TBA的相关性 本实验中ICP患者胎盘绒毛组织TGF―B2的表达 10D值 与母血 TBA呈负相关，而TGF一0RII的表达 IOD值 与母血TBA值无相关性。 见表1。 表7 2,TGF―S ICP患者胎盘绒毛组织TGF―B RH的表达 tOD值 与母血TBA相关性 项目 例数 相关系数r P F一132 28 (O 824 001 TG TGF―BRII 28 0234 O(05 博士晕往论文 9(TGF一0三种亚型表达水平的比较 1 正常妊娠胎盘TGF一132表达的面积、强度、IOD值均明显大于TGF― B 和TGF一03 P O(01 ，ICP胎盘虽然TGF―B2表达面积小于TGF―Bl和 TGF一03，但综合表示其表达水平的IOD值三者间差异无统计学意义。 表8 胎盘绒毛组织TGF―B三种亚型的表达 ,:和TGF―p2比较P O(0 TGF―B三种弧型的表达水平 正常妊娠组 IffP绀 第一部分结粜 ??___-________―______-_-___-________?_―_____________--__________――――――――――――――――――― 图1正常妊娠胎盘绒毛 图2 ICP患者胎盘 HE染色 ×100倍 绒毛间隙狭窄HEXl00倍 图3正常妊娠胎盘绒毛 图4 ICP胎盘绒毛 HE染色 ×400倍 血管合体膜增厚HE×400倍 图5 ICP胎盘 图6 ICP胎盘 空舀i 照 ×foo倍 空白对照z咖D传 第‘部分结果 Iit7 TGF―B 1在正常胎盘绒毛 图8 TGF―B 1在ICP胎盘绒毛 上的表达×100倍 卜 的表达×100倍 图9’F6F―B 1在正常胎盘绒毛 圈10rGJF―B 1在ICP胎盘绒毛 上的表达×400倍 上的表达 x400倍 第一都静结果 网1】TGF―B 2在正常胎盘绒毛 图127GF一口2在ICP胎盘绒毛 上的表达X100倍 上的表达×100倍 圈13TGF―B 2在正常胎盘绒毛 图14TGF―B 2在ICP胎盘绒毛 _|二的表达X400倍 上的表达X400倍 黎一瓿分锆聚 图15TGF―B 3在正常胎盘绒毛 图16TGF―B 3在1CP胎盘绒毛 上的表达X100倍 上的表达×100倍 图17TGF,B 3在正常胎盘绒毛 图18TGF―B 3在ICP胎盘城毛 ( 的表达×400倍 上舯表运 400倍 第一部分站果 图19TGF―RI在正常胎盘绒毛 圈20TGF―R l在ICP胎盘绒毛 上的表达×100倍 上的表达×100倍 图21TGF―RI在正常胎盘绒毛 图22TGF―RI在ICP胎盘绒毛 上的表达×400倍 上的表达x400倍 27 镶一部分结果 图23TGF―RII在正常胎盘绒毛 图24TGF―R?在IcP胎盘绒毛 J:的表达×100倍 上的表达×100倍 陶25TGF―RII在正常胎盘绒毛 图26TGF―RII在ICP胎盘绒毛 E的表达X400倍 』二的表达X400倍 博士学位论文 论 讨 factor―B，TGF―B 是一 转化生长因子一B transforminggrowth 种