药流安胶囊对人早孕蜕膜组织雌、孕激素受体mRNA水平的影响

药流安胶囊对人早孕蜕膜组织雌、孕激素受体mRNA水平的影响 药流安胶囊对人早孕蜕膜组织雌、孕激素受 体mRNA水平的影响 紫中医学杂志2006年第3O卷第1期?23? 药流安胶囊对人早孕蜕膜组织雌,孕激素受体mRNA水平的影响 (430070武汉)湖北省妇幼保健院检验科王维鹏胡兴文金正江 【摘要】目的探讨药流安胶囊对早孕蜕膜组织中雌激素受体(ER),孕激素受体 (PR)mRNA表达水平的影响.方法 取正常早孕人工流产(对照组),口服药流安胶囊(药物组)流产各10名孕妇的蜕膜 组织,采用荧光定量逆转录聚合酶链反应 (RT-PCR)技术,检测ER和PRmRNA表达的变化.结果对照组蜕膜中ER的表 达量为(4347?1744)拷吸/t,l,PR 为(1.55?1.06)×10拷贝/1,药物组蜕膜中ER的表达量为(23923?14629)拷贝 /1,PR为(432?299)拷/t*l,两组中 ER,PR的表达水平均有极显着性差异(P<O.01).结论药流安胶囊发挥其抗早孕 效应,可能与其能在mRNA水平正凋节 蜕膜组织中ER,下调PR,干扰ER/PR之间的平衡有关. 【关键词】受体,雌激素孕激素蜕膜药流安 EffectofYaoliu-ancapsuleontheexpressionsofestrogenandprogesteronereceptormRNAinhumandeciduaamongearly pregnancy.WangWeipeng,HuXingwen,JinZhengjiang.DepartmenlofClinicallaboratory,MaternalaztdChildren HealthHospitalofHubei,Wuhan430070 [Abstract]ObjectiveToinvestigatetheeffectofYaoliu-ancapsuleonmRNAexpressionofestrogenreceptor(ER)and progesteronereceptor(PR)inhumandeciduaamongearlypregnancy.Methods20earlypregnantwomenweredividedinto twogroupsatrandom:group1:10easesservedascontrol;group2:10casesadministeredYaoli u-ancapsule.Afterthedecid, Hawasgot,thetota1RNAwasextracted.Then,themRNAexpression0fERandPRwasdetectedbyfluorogenicquantitative reversetranscriptionpolymerasechainreaction.ResultsInthegroup1,themRNAofERWas( 4347?1744)copies/t*l,and PRwas(1.55?1.06)×10copies/>1.Inthegroup2,themRNAofER,PRwere(23923? 14629)copies/t,1and(432? 299)copies/>l,repectively.ThemRNAexpressionOfERingroup1waslowerthanthatingroup2,butthePRwashigher thanthatingroup2(P~0.01).ConclusionTheresultsuggeststhattheYaoliuancapsulesuitabl efortheanti-earlypregnancy ismostprobablybecausethatitmaydistortthebalanceOfmRNAexpressionbetweenERandPRinhumandeciduaamongear一 【Ypregnancy. [Keywords]Receptor,estrogenProgesteroneDeciduasYaoliuan 药物流产后阴道出血主要病理 中医观点认为, 机制为瘀血内阻胞宫.药流安胶囊具有显着地缩短 阴道出血时间及促进月经恢复的作用[1],但机制尚 不十分清楚本研究以人蜕膜组织为样本(分为两 组进行,分别为对照组和药物组),采用荧光定量逆 转录聚合酶链反应(RT—PCR)分析技术,从mRNA 水平,直接检测了药流安胶囊对雌激素受体(ER)和 孕激素受体(PR)的影响,为阐明药流安胶囊的作用 机制及进一步的临床应用提供理论依据. 资料与方法 一 ,研究对象随机选择2(J【)4年1,12月在我 院妇产科门诊拟行流产的无药物流产史妇女2()名, 均确诊为早孕,且孕期?49天,无用药禁忌证.年 龄18~29岁,并符合以下情况:正常宫内妊娠,此次 孕前3个月内未用甾体激素药物,无宫内节育器,未 哺乳;无急,慢性器质性疾病,无心血管,血液和内分 泌系统疾病.随机分为对照组和药物组,每组各1(1 名,对照组行人工流产,药物组服药流安流产.服药 方法:从接诊日开始服用药流安胶囊,每天3次,每 次3包,连服7天.两组间的临床一般情况如年龄, 体重,月经周期,行经天数等方面均无显着性差异 (P>【).O5). 二,样本采集对照组未服药物,人工流产所得 蜕膜,药物组最后一次服药后24h内蜕膜脱落,立即 取材.取样时迅速收集蜕膜样品立刻置于液氮或干 冰中速冻,再转入一8()?冰箱保存. i,蜕膜总RNA的提取样品不经解冻直接置于 Tfizol中匀浆.按GIB(~公司的说明进行操作. 四,试剂及仪器所有试剂及引物均F}1巾山大学达 安基因股份有限公司提供.所用引物的具体序列,ER 为:5LTC~ACAGGAA(L;ACGGAAAA-3,5'-GAGAqT3AT(,I- TACK?CACK?AGCAT一3,PR为:5 GAAG..3,5一(AGI3THL'T3.ER,PR的 Taqman探针分别为5一FAMwrA(AGGI GAG~A—TAMRA一3和5f_FAN[IGGA(KL;A(X;A(n,一 ?24? "ICTAGq'ClX32一TAMRA,3.所用检测仪器为LightCyde荧 光实时定量PCR仪. 五,逆转录反应按每个反应分别取RT反应液 7.31,MMLV逆转录酶o.5/,1,inasin0.2,加入一 总的无菌EP管中,混匀,用微量加样器加入8t*l上述 反应液于每个反应管中,加入预变性的RNA2l,总体 积为1(1l,37?60min,然后95?反应3min. 六,阳性模板的标准梯度以及检测样品的体系制备 阳性模板浓度为1拷~l/ul,反应前取3按10倍稀 释(加水27并充分混匀)为1()7,1(,1(】5,1拷01/d. 反应体系为:5×定量P【,RBuffer10,阳性模板上游引 物【).5,下游引物u5,dNTP(5,阳性模板荧光探 宰{1L5,Waq酶(3U/)1,阳性模板DNA5,ddI-I2O ,j2,总体积50.检测样品体系的制备:取5逆转 录产物作为模板,按以下反应体系进行:5×定量P【 Bufferl(),上游引物(5,下游引物0.5,dNTP(5 .荧光探针0_5,Taq酶(3U/)1出,cDNA5, dd032,总体积50.制备好的阳性标本和检测样 本同时上机,反应条件为:93~C2rnin,然后93~C45s,55?2 min,40个循环.反应结柬后,按阳性模板标准梯度点分 析,若>(96,表示线性关系良好,可确定为定量标准 曲线,根据标准曲线得出样本荧光定量反应的绝对定量 值(拷贝数/cDNA). 七,统计学处理采用SPSS11.5软件包,两组 数据采用?S表示,两组间比较采用t检验. 结果 经荧光检测仪对RT—PCR扩增结果的检测,结 果(附表)显示,两组蜕膜样本中ER,PRmRNA表 达水平比较均有极显着性差异(P<().01),对照组 中ER的表达水平低于药物组,而药物组PR的表 达水平低于药物组. 附表两组蜕膜中ER,PRmRNA水平的比较(拷贝/u1) 讨论 米非司酮作为抗孕激素药物在我国广泛用于妇 产科临床抗早孕,其安全性及有效性比较肯定,但流 产后出血时间长或流血过多的副反应,是急需解决 的问题【JL. 药流安为一种自制的中药制剂,在其胶囊中含 有当归,川芎,桃仁,红花,三七,益母草,阿胶,炒蒲 CentralChinaMedicalJournal,2006,V0L30.No.1 黄,花蕊石,炮姜,茜草,黄芪,黄芩,炙草,诸药合用, 活血化瘀,益气养血,通脉止血,清理胞宫.从现代 药理研究来看,当归,川芎,益母草,桃仁,红花能增 强子宫收缩;当归还含维生素B1及叶酸,有补血作 用;茜草能缩短凝血时间;花蕊石增加血钙浓度;黄 芪增强免疫力,抑制多种致病菌生长;黄芩有抑制多 种致病菌生长及降低血管通透性作用.因此,药流 安胶囊能促进子宫收缩,有利残留物排出,加速止 血,纠正贫血,增强免疫力,抑制致病菌生长,从而有 利于子宫复旧,达到防治阴道出血,促进月经恢复的 目的.已有研究表明,药流安胶囊具有显着地缩短 阴道出血时间及促进月经恢复的作用L1]. 雌,孕激素的生物活性有赖于激素和靶组织受 体的相互作用,雌激素在转录水平诱导ER,PR产 生,使ER,PR表达上调,而孕酮可在转录和转录后 水平使两者下调,两者保持动态平衡和精细的比值 以维持妊娠的继续.蜕膜的正常生长和发育,对妊 娠的维持起着相当重要的作用,孕激素是维持早孕 期蜕膜正常形态和功能的必要激素,阻断孕激素效 应将导致妊娠终止.常用抗早孕药物拮抗孕酮抗早 孕的作用正是干扰了ER/PR正常的生理平衡状 态,使ER,PR上调,尤以前者为甚[43.本研究中选 择2()名孕妇随机分为两组进行了分析,两组对象在 临床一般情况方面无显着性差异,具有可比性.用 荧_)匕定量RTPCR检测两组蜕膜组织中ER,PR的 mRNA表达水平,结果显示,ER表达水平对照组低 于药物组,差异有极显着性,说明药流安胶囊有促进 ER表达的作用;而PR表达水平对照组高于药物组 (P<0.01),说明药流安胶囊对PR的表达有下调的 作用,十扰ER/PR之间的平衡,提示药流安胶囊在 受体mRNA水平能对抗孕激素作用,使孕激素作用 下降,致使蜕膜组织细胞变性坏死,但具体的分子机 制有待进一步的研究. 参考文献 1金志春,张敦兰,孙家清.药流安胶囊防治药物流产后阴 道不规则出血及对转经影响的临床观察.中国生育 学杂志,1998,37(5):520 2吴长蜀,胡伦颖,高秉兰等.米非司酮及米索前列醇口服终 I早孕500例临床观察.武汉医学杂志,1994,18(3):149 3蒋晓莉,江莉,徐金霞等.米非司酮对早孕蜕膜影响分 子水平的研究进展.医学文选,2002,21(4):53() 4刘效群,刘芳,于俊荣等.复方米非司酮对早孕绒毛, 蜕膜形态学及雌,孕激素受体的影响.生殖医学杂志, 2004,13(2):75 收稿日期:20()5.9.10.