RP—HPLC法同时测定北五味子中五味子甲素与五味子乙素含量

RP—HPLC法同时测定北五味子中五味子甲素与五味子乙素含量 RP—HPLC法同时测定北五味子中五味子 甲素与五味子乙素含量 第23卷第10期 2006年10月 沈阳药科大学 JournalofShenyangPharmaceuticalUniversity Vo1.23No.10 Oct.2006P.660 文章编号:1006-2858(2006)10-0660—03 RP—HPLC法同时测定北五味子中五味子甲素与 五味子乙素含量 杨春娟,熊志立,杨晶,赵霓,李发美 (1.沈阳药科大学药学院,辽宁沈阳110016;2.辽宁省药品检验所,辽宁沈阳110023) 摘要:目的建立同时测定北五味子中五味子甲素与五味子乙素含量的方法.方法RP-HPLC法. 色谱柱为ThermoHypersilBDSca8柱(4.6mm×250mm,5加1),流动相为甲醇一乙腈一水(体积比为 45:30:25),流速1.0mL?rain_.,检测波长254nm.结果以峰面积为纵坐标,以对照品溶液质量 浓度(mg?L-1)为横坐标,进行线性回归:五味子甲素的回归方程为A:2.701×10'P一1.396× 10,r=0.9999,表明五味子甲素在10.1--202nag?LI1线性关系良好;五味子乙素的回归方程为A: 2.797×10'|D+1.570×104,r=0.9998,表明五味子乙素在12.2~244nag?LI1线性关系良好.平均 回收率分别为102.0%,100.5%,RSD均小于3.1%.结论该方法可用于北五味子药材质量控制. 关键词:北五味子;五味子甲素;五味子乙素;反相高效液相色谱法 中图分类号:R94文献标识码:A 北五味子系木兰科植物五味子(Schisandra chinensisTurcz.)Bail1.)的干燥成熟果实.具有 益气生津,补肾养心,收敛固涩的作用.用于久咳 虚喘,梦遗滑精,遗尿尿频,久泻不止,自汗盗汗, 津伤口渴,短气脉虚,内热消渴,心悸失眠等症 H3 H3 H3 H3 状r.现代药理研究表明,其中主要成分以五味 子甲素和五味子乙素为代表(结构式见图1),有 明显的促进肝糖元生成,降低肝炎患者血清谷丙 转氨酶水平,保护肝细胞的作用[2l. AB Fig.IStructuresofdeoxyschiz扣ld岍n(A)and-schiz扣Idn(B) 目前北五味子含量测定的文献报道主要有薄产地北五味子药材中五味子甲素和 五味子乙素的 层扫描法,该法是一种离线技术,测定过程复 杂,准确性差【3].另有HPLC法用于测定药材中 单一成分的含量r,而药材中同时测定五味子甲 素和五味子乙素含量的方法目前尚无报道.因 此,作者建立了对北五味子药材或制剂的质量标 准研究具有重要意义的同时测定北五味子药材中 两种成分的RP—HPLC法,并在此基础上对不同 含量进行了分析测定. l仪器与材料 PU-980输液泵(日本Jasco公司),Uv一975 紫外检测器(日本Jasco公司),Anastar色谱工作 站(天津兰博公司). ThermoHypersilBDSC18色谱柱(4.6mm× 收稿日期:2005--09-05 基金项目:辽宁省博士启动基金资助项目(20041035) 作者简介:杨春娟(1976一),女(汉族),黑龙江哈尔滨人,硕士研究生,E— mailchunjuanyang@126.corn;熊志立 (1973一),女(汉族),福建福州人,副教授,博士,主要从事中药药效物质基础和质量 控制研究,Te1.024—23986289. 第l0期杨春娟等:RP—HPLC法同时测定北五味子中五味子甲素与五味子乙素含 量661 250mm,5m,美国ThermoHypersil公司). 试验用甲醇,乙腈(色谱纯,山东禹王实业总公 司),二次重蒸水(自制),五味子甲素对照品(批号 0764—200107),五味子乙素对照品(批号110765— 200205)(中国药品生物制品检定所). 不同产地的五味子药材均由沈阳药科大学中 药学院陈发奎教授鉴定为北五味子(Schisandra chinensisTurcz.)Bail1.)的干燥果实. 2方法与结果 2.1对照品溶液制备 分别取五味子甲素对照品10mg,五味子乙 素对照品30mg,精密称定,同置50mL量瓶中, 加甲醇溶解并定容至刻度,摇匀;精密量取1mL, 置5mL量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,摇 > 05 匀,作为对照品溶液. 2.2供试品溶液制备 精密称取10号北五味子药材粗粉1g,置 25mL量瓶中,加入甲醇20H,超声提取40min, 放至室温,用甲醇定容至刻度,摇匀,经0.45m 微孔滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液. 2.3色谱条件选择及色谱系统适用性试验 色谱柱:ThermoHypersilBDSCl8柱(4.6mmX 250mm,5m);流动相:甲醇一乙腈一水(体积比为 45:30:25);流速:1.0mL?min-1;检测波长: 254nm;进样量:20L;柱温:室温.在此条件 下,两色谱峰理论板数均不小于9500,分离度均 大于1.5,两色谱峰的拖尾因子均为1.05.代表 性色谱图见图2. > 叭l0l52005 t/min l0l520 t/min 1mDeoxyschizanddn;2my-Schizandrin Fig.2Chromatogramsofstandard(AJandtenthsample(BJ 2.4曲线绘制2.6重复性试验 精密称取五味子甲素对照品10mg,五味子精密称取同一批药材粉末5份,每份1g,按 乙素对照品12mg,同置50mL量瓶中,加甲醇溶"2.2"条方法制备供试品溶液,在上述色谱条件下 解并定容至刻度,摇匀,配成含五味子甲素进行RP—HPLC分析,五味子甲素和五味子乙素 201nag?L,,五味子乙素244nag?L-1的对照品储含量RSD分别1.4%,2.3%. 备液.精密量取对照品储备液0.5,1.0,2.0,4.0,2.7稳定性试验 6.0,8.0mL,分别置10mL量瓶中,用甲醇稀释至精密称取北五味子药材粗粉1g,按"2.2"条 刻度,摇匀,得到一系列质量浓度溶液.分别取上方法制备供试品溶液,室温放置24h,分别在0, 述各溶液20止进样,峰面积,以峰面积为纵2,4,8,12,24h测定,记录色谱峰面积,五味子甲 坐标,对照品溶液质量浓度(nag?L-1)为横坐标,进素与五味子乙素含量RSD分别为1.8%,2.3%, 行线性回归.五味子甲素的回归方程为A=表明供试品溶液24h稳定. 2.701×10ID一1.396×10,r=0.9999,表明五2.8回收率试验 味子甲素在10.1--202mg?L-1内线性关系良好;精密称取已知含量的10号北五味子药材粗 五味子乙素的回归方程为A=2.797×10ID+粉6份,每份0.5g,分别精密加入一定量的对照 1.570×10,r=0.9998,表明五味子乙素在品溶液,按"2.2"条操作,在上述色谱条件下进行 12.2--244mg?L-1内线性关系良好.RP—HPLC分析,由测得量与加入量计算回收率, 2.5精密度试验结果见表1,2. 吸取同一对照品溶液,在上述色谱条件下重2.9样品测定 复进样5次,记录色谱峰面积,五味子甲素和五味精密称取不同产地北五味子药材粗粉各1g 子乙素峰面积RSD值均为0.19%.(=3),精密称定.按"2.2"条操作,在上述色谱 662沈阳药科大学第23卷 条件下进行RP—HPLC分析,外标法分别计算五 味子甲素与五味子乙素含量的质量分数,测定结 果见表3. Table3Contentsofdeoxyschizandrinand-schizandrin inSchisandrachinensis(Turcz.)Bail1.sample 3讨论 a.流动相的确定.只采用不同比例甲醇作 为流动相,五味子乙素不能很好分离.考察了甲 醇与酸和缓冲盐为流动相,分离度没有明显改善. 采用不同比例的乙腈为流动相,五味子甲素和五 味子乙素保留时间较短,有杂质干扰.所以试验 中选择甲醇,乙腈和水为流动相.该流动相分析 时间合适,分离度好. b.提取工艺的确定.实验中考察了甲醇,环 己烷和氯仿为提取溶剂的提取率[5--7],结果表 明,甲醇对五味子甲素和五味子乙素的提取率最 高.考察了足够量的甲醇超声提取20,30,40, 50min时的含量差异,结果表明,超声提取40min 和50min时含量高,且无明显差别,所以提取时间 选为40min. C.检测波长的选取.五味子甲素和五味子 乙素最大吸收波长分别为249,256nm,为了提高 两种成分同时测定的检测灵敏度,选取254nm 为检测波长. d.10个不同产地的北五味子药材中五味子 甲素和五味子乙素的含量差异较大,其原因可能 是由于产地,采收时间,贮存时间长短等因素不同 所致.因此,需建立统一的药材质量标准. 参考文献: [1]国家中医药管理局<中华本草)编委会.中华本草 [M].上海:上海科学技术出版社,1999.902—911. [2]刘耕陶.五味子及其成分对动物肝脏的生化药理作 用[J].生理科学进展,1988,19(3):197—203. [3]王胜春,贺雪梅,樊亚萱,等.薄层扫描法测定五灵胶 囊中五味子乙素的含量[J].第四军医大学, 1998,19(4):478—479. [4]莫志江,陈英,莫可元.高效液相色谱法测定五味子 药材中五味子甲素的含量[J].中国现代应用药学杂 志,2001,10(18):355—356. [5]国家药典委员会.中华人民共和国药典[Z].北京:化 学工业出版社.2005.44—45. [6]高建平,王彦涵,郁韵秋,等.南五味子木脂素成分的 HPLC含量测定及其变异规律[J].中国天然药物, 2003,1(2):89—93. [7]姚新生,孔令义,吴立军,等.天然药物化学[M].第3版. 北京:人民卫生出版社,2002.132. 【下转至第671页) 第1O期丁晓飞等:注射用苦碟子对心肌缺血的影响671 Effectsoflxerissonchifolia(Bge.)Hanceforinjec. tiononmyocardialische DINGXiao—fei,CHENGuang,LIUYu—lan.WUYing—liang2 (1.LiaoningInstituteforDrugControl,Shenyang110023,China;2.SchoolofPharmacy, ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang110016,China) Abstract:ObjectiveTostudytheprotectiveeffectsandpossiblemechanismofIxerissonchifolia(Bge.) Hanceforinjectionagainsttheexperimentalacutemyocardialischemia.MethodsTheexperimentalacute myocardialischemicmodelwasestablishedbyligatingtheanteriordescendingcornonaryindogs.Theeffect ofIxerissonchifolia(Bge.)HanceforinjectiononmyocardislischemiawasinvestigatedbymeasuringEST andN— STofepicardialECG,theactivityofLDH,CPK,GOT,SODandthecontentsofMDAinblood serum.ResultsInthedo?gstreatedwithIxerissonchifolia(Bge.)Hanceforiniection,theESTandN_STof epicardialECGweredecreasedsignificantly,thedifferencesweresignificant(P<0.05— 0.001)ascorn— paredwiththecontrolgroup.TheESTandN_STofepicardialECGwereobviouslydecreasedafteradminis— teringIxerissonchifolia(Bge.)Hanceforinjection2.4g?kg, 30minutes.comparedwithbeforeadminis— teringIxerissonchifolia(Bge.)Hanceforiniection,theESTwasdecreased29%andtheN— STwasde— creased41%.Themyocardialinfarctsizewasalsoreducedobservably.Inaddition,theactivityofLDH. CPK,GOTandthecontentsofMDAinbloodserumweredecreasedsignificantly,howevertheactivityof SODwasincreased.ConclusionsTheresultsindicatethatIxerissonchifolia(Bge.)Hanceforinjectionhas theprotectiveeffectsonmyocardialischemia. Keywords:Ixerissonchifolia(Bge.)Hance;myocardialischemia;epicardiumelectrocardiogram(E—ECG) 《上接第662页) Determinationofcontentsofde0xyschizandrinand 1},-schizandrininSchisandrachinensis(Turcz.) Bail1.byRP?HPLC YANGChun—juan,XIONGZhi...1i,YANGJing,ZHAONi.LIFa—mei1 (1.SchoolofPharmacy,ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang110016,Chi口;2.Lia0- ningProvinceInstituteforDrugControl,Shenyang110023,China) Abstract:ObjectiveTodevelopaRP_LCmethodforthedeterminationofdeoxyschizandrinand~-schizandrinin Schisandrachinensis(Turcz.)BaiU.indifferent 獬.MethodsAThermoHype~ilBI)SG8column(4.6rainx 250mln,5p.m)withthemobilephaseeonsistedofmethonal— aeetonitrile-water(V:V:V=45:30:25)wasused. 1]heflowratewas1.0mL?minandUvdetectionwavelength吣 setat254nln.ResultsThecalibration curveofdeoxyschizandrinandy—schizandrinwaslinearintherangesof10.1— 202mg?L-1(r=0.9999)and 12.2—244mg.L一 (r=0.9998)respectively.Theaveragerecoveriesofdeoxyschizandrinand7-schizan— drinwere102.0%and100.5%respectivelywithRSDlassthan3. 1%.ConclusionsThemethodissensi— tive,accurate,rapidandissuitableforthequalitycontrolofSchisandrachinensisTurcz. )Bail1. Keywords:SchisandrachinensisTurcz.)Bail1.;deoxyschizandrin;y— schizandrin;RP_HPLC a ?l l t?T?