酶促反应的影响因素

酶促反应的影响因素 实验八 酶促反应的影响因素 一、目的 (了解温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应速度的影响。 1 2(学习检定温度、pH、激活剂、抑制剂影响酶促反应速度的方法。 二、实验原理 在酶促反应中，酶的催化活性与环境温度、 pH有密切关系，通常各种酶只有在一定的温度、pH范围内才表现它的活性，一种酶表现其活性最高时的温度、 pH值称为该酶的最适温度、最适pH。 在酶促反应中， 酶的激活剂和抑制剂可加速或抑制酶的活性，如氯化钠在低浓度时为唾液淀粉酶的激活剂，而硫酸铜则是它的抑制剂。 本实验利用淀粉水解过程中不同阶段的产物与碘有不同的颜色反应，定性观察唾液淀粉酶在酶促反应中各种因素对其活性的影响。 淀粉(遇碘呈蓝色)?紫色糊精(遇碘呈紫色)?红色糊精(遇碘呈红色)?无色糊精 遇碘不呈色)?麦芽糖(遇碘不呈色)?葡萄糖(遇碘不呈色)。 ( 所以淀粉被唾液淀粉酶水解的程度，可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断，以此反映淀粉酶的活性，由此检定温度、pH、激活剂、抑制剂对酶促反应的影响。 三、实验器材 试管和试管架、恒温水浴、冰浴、吸量管(1 mL6支、2 mL4支、5 mL4支)、滴管、量筒、玻棒、白瓷板、秒表、烧杯、棕色瓶。 四、实验试剂 1(新鲜唾液稀释液(唾液淀粉酶液):每位同学进实验室自己制备，先用蒸馏水漱口，以清除食物残渣，再含一口蒸馏水，0.5 min后使其流入量筒并稀释至200倍(稀释倍数可因人而异)混匀备用。 2(1%淀粉溶液A(含0.3%NaCl):将1 g可溶性淀粉及0.3 g氯化钠混悬于5 mL蒸馏水中，搅动后，缓慢倒入沸腾的60 mL蒸馏水中，搅动煮沸1 min，冷却至室温，加水至100 mL,置冰箱中保存。 3(1%淀粉溶液B(不含NaCl) 4(碘液:称取2 g碘化钾溶于5 mL蒸馏水中，再加入1 g碘，待碘完全溶解后，加蒸馏水295 mL，混匀贮于棕色瓶中。 5(1%NaCl溶液 6(1%CuSO溶液 4 7(缓冲溶液系统按下表混合配制。 0.2 mol/L磷酸氢二钠溶液 0.1 mol/L柠檬酸溶液 pH 体积/ mL 体积/ mL 5.0 5.15 4.85 5.8 6.05 3.95 6.8 7.72 2.28 8.0 9.72 0.28 五、操作步骤 1(温度对酶促反应的影响 取3支试管编号，按下表进行操作: 反应温淀粉酶酶液处理温1%淀粉溶试管pH6.8缓冲溶度/ 液体积度/ 液A体积/ 观察结果 号 液体积/ mL ?，10 / mL ?，5 min mL min 1 1 0 2 1 0 2 1 37,40 2 1 37,40 3 1 70左右 2 1 70左右 上述各管在不同的温度下保温反应10 min后，立即取出，流水冷却3 min， 向各管分别加入碘液1滴。仔细观察各试管溶液的颜色并，说明温度对酶活性的影响，确定最适温度。 2(pH对酶促反应的影响 取1支试管,加入1%淀粉溶液(A)2 mL、pH6.8缓冲溶液3 mL、淀粉酶液2 mL，摇匀后，向试管内插入一支玻棒,置37 ?水浴保温。每隔1 min用玻棒从试管中取出1滴混合液于白瓷板上，随即加入碘液1滴，检查淀粉水解程度。待混合液遇碘不变色时，从水浴中取出试管，立即加入碘液1滴，摇匀后，观察溶液的颜色，再次确认水解程度。记录从加入酶液到加入碘液的时间，此时间称为保温时间。若保温时间太短(2,3 min)，说明酶液活力太高，应酌情稀释酶液;若保温时间太长(15 min以上)，说明酶液活力太低，应酌情减少稀释倍数，保温时间最好在8,15 min。然后进行如下操作: 取4支试管编号，按下表操作: 缓冲溶液体积/ mL 1%淀粉溶淀粉酶液体积/ 试管号 观察 液A体积/ mL(每隔1 minpH pH pH pH 结果 mL 逐管加入) 5.0 5.8 6.8 8.0 1 3 0 0 0 2 2 2 0 3 0 0 2 2 3 0 0 3 0 2 2 4 0 0 0 3 2 2 将上述各管溶液混匀后，再以1 min间隔依次将4支试管置于37 ?水浴中保温。达保温时间后，依次将各管迅速取出，并立即加入碘液1滴。观察各试管 。 溶液的颜色并记录。pH对酶促反应的影响，确定最适pH 3(激活剂、抑制剂对酶促反应的影响 取3支试管编号，按下表加入各试剂(体积单位:mL): 1%CuSO溶蒸馏淀粉观察结4试管1%淀粉溶液B 1%NaCl溶液 液 水 酶液 果 号 1 2 1 0 0 1 2 2 0 1 0 1 3 2 0 0 1 1 ?将上述各管溶液混匀后，向1号试管内插入一支玻棒，3支试管同置于37 水浴保温1 min左右，用玻棒从1号试管中取出1滴混合液，检查淀粉水解程度(方法同步骤2)。待混合液遇碘液不变色时，从水浴中迅速取出3支试管，各加碘液1滴。摇匀观察各试管溶液的颜色并记录，分析酶的激活和抑制情况。 六、注意事项 1(加入酶液后，要充分摇匀，保证酶液与全部淀粉液接触反应，得到理想的颜色梯度变化。 2(用玻棒取液前，应将试管内溶液充分混匀，取出试液后， 立即放回试管中一起保温。 七、问与思考 1(什么是酶的最适温度、最适pH, 它们是酶的特征物理常数吗, 2(激活剂分几类? 氯化钠属哪种类型, 硫酸钠对淀粉酶的活性有无影响,