香椿叶提取物抗氧化活性研究

香椿叶提取物抗氧化活性研究 安徽农业科学,Journa l of Anhui Agri .Sci .2007 ,3522 :6807 - 6808 ,6810责任编辑 陈娟 责任校对 俞洁 香椿叶提取物抗氧化活性研究 李世俊,胡永金 云南农业大学, 云南昆明650201 摘要 [ 目的] 为了研究香椿叶提取物的抗氧化活性。[ 方法] 用热水、 95 % 乙醇及75 % 丙酮分别提取香椿叶中的抗氧化物质, 比较了3 -? -? 种溶剂的提取物对 O 、 OH 、亚油酸、 DPPH 自由基的清除作用。[ 结果] 香椿叶提取物对 O 、 OH 、 DPPH 自由基具有直接清除作用, 对 2 2 亚油酸脂质过氧化反应也有抑制作用。随着提取物浓度的增加,其清除、 抑制作用也增强, 并呈现明显的量效关系。95 % 乙醇的香椿叶 -? 提取物对 O 、 OH 、 亚油酸、 DPPH4 种体系的抗氧化活性显著高于热水及75 % 丙酮的提取物 P 0 .05 。[ 结论] 香椿叶提取物有一定 2 的抗氧化活性, 其添加浓度与抗氧化活性呈正相关。95 %乙醇提取香椿叶中的抗氧化物质效果较好。 关键词 香椿叶;清除自由基; 抗氧化作用 中图分类号 S644 .4 文献标识码 A 文章编号 0517 - 66112007 22 - 06807 - 02 Study onthe Antioxidant Activity of Extractions from Toona si nensis AJuss . Roem LI Shi-Jun et al Yunnan Agricultural University ,Kunm ing ,Yunnan 650201 Abstract [ Objective] The research ai m ed to study the antioxidant activity of extractions from Toona sinensis A. Juss . Roem. leaves[ M ethod] The antioxidation m atters were extracted from Tsinensis leaves w ith hot water , 95 % ethanol and 75 % acetone , respand the scavenging effects of extrac- -? tions w ith 3 solvents onthe radicals O , OH , linoleic acid and DPPHfree radicals were com pared[ Result] The extractions of T. si nensis leaves had 2 -? direct scavenging effect on O , OH and DPPHfree radicals , had inhibiti ng effect onthe peroxidation of linoleic acid lipidW iththe extractions con- 2 centrationincreasi ng , the effects of scavengi ng and inhibiting were strengthened , which show ed an obvious dose - effect relationshipThe antioxidant ac- -? tivity of extractions w ith95 % ethanol onfour system s of O ,OH , linoleic acid and DPPHwas significantly higher thanthat of extractions w ith hot w ater 2 and 75 % acetone P 0 .05[ Conclusion] The extractions from T. sinensis leaves had a certain antioxidant activity , which had a positive correlation w ithits additive concentration. The effect of antioxidation m atters extracted w ith 95 % ethanol was betterKey words Toona si nensis A.Juss . Roem;Scavenging free radica ls ;Antioxidation effect香椿[ Toona si nensis A. Juss Roe m] ,别名椿甜树、椿阳树, 无水 Na SO 干燥, 回收溶剂, 得粗提物,55 ?真空干燥。称 2 4 为楝科香椿属乔木,药食两用。香椿原产我国, 分布于我国华 重, 计算产 率。 北至华南和西南各省,其中山东、河南、河北等省栽培较多。宋 1 .3 .3 75 % 丙酮提取法。称取香椿叶10 g , 用75 % 丙酮液浸 代《图经本草》记载“椿木实,而叶香,可 ”,明代徐光启将其作 泡过夜 ,55 ?加热6 h, 搅拌过滤 ,重提1 次, 叶渣用提取溶剂 为救饥植物载入《农政全书》。香椿顶端嫩芽、嫩叶脆嫩多汁, 洗涤, 压滤,合并滤液, 减压回收溶剂, 水相用石油醚脱脂, 浓 香气浓郁,风味独特, 可以鲜食、炒食、?拌、油炸、腌制等许多 缩成浸膏,55 ?真空干燥,称重,计算产率。 方式食用,富含蛋白质、氨基酸、挥发油、多种维生素以及黄酮、 1 .4 提取物抗氧化性试验 -[ 3] 生物碱等活性成分,具有丰富的营养和保健作用, 是蔬菜中的 1 .4 .1 产生 O 的化学发光体系 。用化学发光法测定样 2 [1] 上品。近年来研究发现,香椿叶含有黄酮类化合物 。生物黄 -品对碱性连苯 三酚体系 非酶体系 产生的 O 的清除作用。 2 酮具心血管系统活性、抗菌及抗病毒活性、抗肿瘤活性、抗炎等 在测定管中加入5 mm ol/ L 鲁米诺溶液800 μ l 用pH 值 10 .16 , [ 2] 多种生物活性 。笔者了3 种不同提取方法获得的香椿 0 .1 mm ol/ L N a CO - NaHCO 缓冲溶液配制 ,加入香椿叶提取 2 3 3 -? 叶提取物对 O 、 OH 、亚油酸脂质、 DPPH 的清除作用,为进一 2 物,使用去离子水做空白对照,混匀后,加入6 mm ol/ L 连苯三酚 步开发利用香椿叶提供科学依据。 溶液100 μ l 用 10 mm ol/ L HC l 配制 ,迅速置于发光仪测定室 1 材料与方法 中,启动反应,测定5 s 内发光强度的平均值,每个样品平行做 1 .1 植物材料 香椿叶, 于2006 年4 月采自昆明市松花坝 3 次,取平均值,按下式计算样品液的清除率。 库区, 阴干、粉碎后备用。 清 除率 [ 空白对照值 - 样品值 / 空白对照值] × 1 .2 仪器与试剂 鲁米诺 , 德国 M erck- Schuchrdt 公司产品 ; 100 % 。 硫代巴比妥酸、亚油酸、连苯三酚、抗坏血酸、硫酸铜、过氧化[ 4] 1 .4.2 产生 OH 的化学发光体系 。采用抗坏血酸 - CuSO 4 氢、乙醇、丙酮等试剂均为分析纯。 - 酵母- H O 产生的发光体系。具体方法为取0 .2 m l 1 .8 2 2 供试仪器为 OX-7 型化学发光分析仪,日本 ;UV-754 型分 mm ol/ L 抗坏血酸溶液、 0 .4 m l 0 .8 mm ol/ L CuSO 溶液、 2 m l 75 4 光光度计。 m g/ m l 酵母溶液 以上溶液均用 0 .5 mm ol/ L、 pH 值为6 .2 的 1 .3 抗氧化活性成分提取 磷酸钠缓冲液配制 、 0 .6 m l 磷酸钠缓冲液, 分别加入香椿叶 1 .3 .1 热水浸提法。称取香椿叶 10 g , 在 80 ?蒸馏水中加 提取物, 注入0 .6 m l 60 mm ol/ L H O 溶液, 快速混匀, 启动发 2 2 热4 h,叶渣重提1 次。合并提取液并浓缩至稠状,55 ?真空 光反应 ,延迟10 s 后, 测出15 s 的积分发光强度。 干燥, 得粗提物 ,称重, 计算产率。 [ 5] 1 .4.3 亚油酸脂质过氧化体系 。以过氧化脂质代谢产物 1 .3.2 95 % 乙醇提取法。称取香椿叶10 g , 先用石油醚脱脂 丙二醛 MDA 作为检测脂质过氧化物 LPO 含量的指标, 用 50 m in, 过滤。然后用 95 % 乙醇加热提取 2 次, 过滤, 合并滤 硫代巴比妥酸法 TBA 法 测定。分别在0 .5 % 的亚油酸溶液 液。减压浓缩后趁热过滤, 用乙酸乙酯萃取2 次, 提取液用 中添加不同浓度的香椿叶提取物, 混匀后于 40 ?1 ?下恒 作者简介 李世俊 1972 - ,男, 云南丽江人, 讲师, 从事天然产物的开 温放置48 h,用 TBA 法测定丙二醛的生成量。其生成量的多 发及功能性食品的研究。 收稿日期 2007- 04-17 少以吸光度 A 值示。A 值越小 ,表明对脂质过氧 化反应的6808 安徽农业科学2007 年抑制作用越强。另取 0 .5 % 的亚油酸溶 液 5 份, 其中 1 份不 清除作用见图2。图2 表明, 随着提取物浓度增加, 对 OH 的 加任何抗氧化剂作为空白对照, 另4 份中分别加入占底物质 清除率逐渐上升, 并呈现明显的量效关系。95 % 乙醇提取物量0 .03 % 的4 种溶剂香椿叶提取物 , 混匀。 40 ?1 ?下恒 对 OH 的清除效果最为明显,75 % 丙酮提取物效果次之, 热水 温放置 ,于不同时间段取样, 测定丙二醛的生成量。 提取物的清除效果最差。 [ 6] 1 .4.4 样品对 DPPH 自由基的清除率 。将各提取物配成5 2 .3 对脂质过氧化反应的抑制作用 图3 表明, 不同溶剂 - 4 种浓度:1、 2、 3、 4、 5 m g/ m l 。DPPH 用 95 % 乙醇配成 1 ×10 的香椿叶提取物均能抑制脂质过氧化反应, 随着提取物浓度 m ol/ L 的溶液。向2 m l DPPH 溶液中加入2 m l 不同浓度的香 增加, 其抑制能力逐渐上升, 并呈现一定的量效关系。相比 椿叶提取物 ,使总体积为 4 m l , 摇匀 , 于25 ?水浴中放置 30 较而言,95 % 乙醇提取物抑制能力最强,75 % 丙酮提取物效 m in 后倒入光径 1 c m 比色皿, 记录 517 nm 吸光值 用 2 m l 果次之 ,热水提取物的清除效果最差。 95 %乙醇与2 m l 样品液调零点, 以排除试样本身颜色的影 响 。向2 m l DPPH 液中加2 m l 相应样品溶剂, 记录吸光值为 A , 即空白对照。抑制率计算公式为: 空白 η % A - A / A ×100 % 空白 样品 空白 式中,η为抑制率 , A 与 A 分别为空白对照及样品的吸 空白 样品 光度值。 2 结果与分析 [ 7] 清除自由基是抗氧化剂发挥作用的主要机制 , 故可依 -? 据清除率高低评价各物质对 O 、 OH 、亚油酸脂质的氧化 2 及对 DPPH 自由基的清除作用。 图3 不同浓度香椿叶提取物对脂质过氧化反应的抑制作用 添加不同香椿叶提取物的亚油酸溶液随着放置时间的延 长,TBA 值逐渐增加, 其中增加较快的是空白组。由图4 可看 出,所有的香椿叶提取物都有一定的抗氧化活性,但95 % 乙醇 提取物的抗氧化活性显著高于热水和75 %丙酮提取物。 -图1 香椿叶提取物对 O 的清除作用 2 --2 .1 对 O 的清除作用 由产生 O 的化学发光体系试 2 2 -验可知 ,不同溶剂的香椿叶提取物均对 O 有清除作用, 随 2 -着提取物浓度增加 ,对 O 清除率逐渐上升, 并呈现明显的 2 量效关系 图1 。当3 种不同溶剂提取物的含量大于0 .03 % 图4 不同提取时间下香椿叶提取物对脂质过氧化反应的抑制作用 -时,对 O 的清除率均有较大幅度升高。相比较而言,95 % 2 2 .4 对 DPPH 自由基的清除率 DPPH 是一种稳定的自由 -乙醇的提取物对 O 的清除效果显著高于 75 % 丙酮和热水 2 基, 通过检测生物试剂对 DPPH 的清除能力可以表示其抗氧 提取物 p 0 .05 。 化性的强弱。由图5 可看出, 香椿叶提取物具有较强的清除图2 香椿叶提 取物对 OH 的清除作用 图5 香椿叶提取物对 DPPH 自由基的清除作用? 2 .2 对 OH 的清除作用 不同溶剂香椿叶提取物对 OH 的 下转第6810 页