头孢西丁纸片法替代苯唑西林纸片法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的评价

头孢西丁纸片法替代苯唑西林纸片法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的评价 头孢西丁纸片法替代苯唑西林纸片法检测 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的评价 第31卷 9022(X/7年第12期 黑龙江医学 HEIONGJLGMEDICALJOURNAL V01.31,No.12 Dec.20(y7 头孢西丁纸片法替代苯唑西林纸片法检测耐 甲氧西林金黄色葡萄球菌的评价 刘小朵 (江苏省通州市人民医院检验科,江苏通州226300) 摘要:目的评价头孢西丁纸片法替代苯唑西林纸片法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(艘SA)的方 法.方法采用头孢西丁纸片法(30片)和苯唑西林纸片法(1.0片)检测MRSA,以胶乳凝集试验检 测PBP2a为参考方法.结果用胶乳凝集实验检测的106株金黄色葡萄球菌,其中PBP2a阳性为87株,阴 性为19株,用头孢西丁纸片法筛查MRSA敏感性为98.9%,特异性为100%.苯唑西林纸片检测MRSA敏 感性为95.4%,特异性为94.7%.结论头孢西丁纸片法筛查MRSA与PBP2a的检测具有较好的一致性, 该法可在常规工作中推广使用. 关键词:耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA);头孢西丁纸片法;胶乳凝集;苯唑西林纸片法 学科分类代码:320.1160中图分类号:R445.6文献标识码:A 文章编号:1004—5775(2007)12—0902—02 ToEstablishandEvaluatetheMethodofCefoxitinReplacesOxacm forDetectionofMethicillin—ResistantStaphylococcus(MRSA) UUXiao—duo (DepartmentofLaboratory,ThePeople'sHospitalofTongzhouCity,Tongzhou226300,China) Abstract:ObjectiveToestablishandevaluatethemethodfordetectionofMethiciUin— ResistantStaphylococcus(Mr,SA). MethodsThediskswith30cma】彻?eofcefo~dnand1micrq陷埘 neofoxaeillinWe./~usedforthedetectionofM田:S withlatexfixationtestsasthereference.ResultsOfthe106testisolatesofStaphyloecus.87isolatesshowedPI;P2apositive bylatexfixationtests,19isolateswerePBP2anegative.Incefoxitindiskdiffusiontests,thesensitivitywas98.9%andthe specificityWas100%.Inoxacillindiffusiontests.thesensitivitywas95.4%andthespecificitywas94.7%.ColldllsionFor thedetectionofMRSA.thecefoxitindiskdiffusiontestWasconsistentwiththeresultsoflatexfixationtestforPBP2a.1ece. foxitindiskdiffusiontestiSeasytobepeffom~andc锄beusedinroutinediagnosticworks. KeyWords:MRsA:Cefoxitindiskdiffusiontests;latexfixation;Oxacillindiskdiffusiontests 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌是医院感染的重 要病原菌,其引起的感染和病死率呈逐年增加的趋 势.目前临床上常规用于筛查的主要方法是苯唑 西林纸片法.然而苯唑西林纸片法对一些异质性 的MRSA,低水平MRSA和临界耐药的金葡菌检测 的敏感性不够好【卜21.2004年,美国临床实验室标 准化委员会(NCCLS)推荐用头孢西丁纸片法检测 MRSA[3I.由于MRSA上存在MecA基因,其编码的 青霉素结合蛋白(PBP2a)在MRSA耐药性的产生中 已得到确认【4J.因此,应用胶乳凝集试验检测MR— sA是一种较为准确的方法.本实验用两种纸片扩 散法筛查临床分离的106株葡萄球菌,并以胶乳凝 集试验为参考方法,对这两种纸片法进行比较. 1材料与方法 1.1菌株来源 收集2006—09—01—2O07—08—31本院微生 物实验室自临床住院及门诊各种感染样本中分离 保存的金黄色葡萄球菌106株,标准菌株为金黄色 葡萄球菌ATCC25923. 参考文献: [1]王云钊,曹来宾.骨放射诊断学(M].北京: 北京医科大学和中国协和医科大学联合出版社, 1995:240—244. [2]上海第一医学院"x线诊断学"编写组.x 线诊断学(第二册)[M].上海:上海科学技术出版 社,19r78:538—540. [3]DaffnerRH,NathanG,ButerbaughGA.Case report850Giantcelltumor[JJ.SkeletalRadiol,1994, 23:393—395. [41孙保国,康文成,陈风苞.92例骨巨细胞瘤 初步[JJ.中华骨科杂志,1995,15:5152. [5]杨星,马彪,潘新之.螺旋CT表面遮盖法 及多平面重组对骨病变的诊断价值[J].临床放射 学,1999,18:103. (编辑:薛凡) (收稿日期.'2007—10—19) 第31卷 2OO7年第l2期 黑龙江医学 HEILIGJLGMEDICJOURNAL Vo1.31.No.12 Dee.200r7903 1.2药物纸片与检测试剂盒 头孢西丁纸片(30片),苯唑西林纸片(1.0 片),水解酪蛋白(M—H)琼脂为杭州天和生物 有限公司产品;胶乳凝集试剂盒购自上海季丰科技 有限公司,其中试剂组成为:R1(致敏的胶乳颗粒), R2(阴性对照的胶乳颗粒),R3(提取液1),a4(提取 液2). 1.3细菌鉴定 所有菌株均以常规方法培养分离,革兰氏染 色,血浆凝固酶试验并结合PC复合板鉴定到种. 1.4药敏试验方法 按标准K—B(Kirby—Bauer)法进行.头孢西丁 纸片法,挑取单个菌落,调整菌悬液的浊度为0.5 麦氏单位,均匀涂布于含2%NaCL(厂v)的M—H 琼脂平板上.贴上头孢西丁纸片,在35c【=培养24 h.根据20O4年NCCLS判定标准:MRSA抑菌环直 径?19/nrn,MSS~/抑菌环直径I>20mm(24h观察结 果).苯唑西林纸片法,操作同上.根据2004年 NCCLS判定标准:MRSA抑菌环直径?10mill,MSSA 抑菌环直径?13mm(24h观察结果). 1.5PBP2a检测 根据试剂盒说明书.PBP2a的提取:在无菌的 离心管中滴加4滴R3,用1.5的接种环挑取2环 葡萄球菌,与充分混匀,在沸腾的水中或95% 100c【=的水中加热3rnin左右(不要超过5rni~),冷却 至室温后加2滴混匀,1500r/min离心5rnin,使 用悬浮液为凝集过程的标本.胶乳凝集过程:在测 试卡的2个圆环上分别加1滴R.和R2,加上述悬 液标本5O,混匀3min,观察若发现凝集为阳性, 不凝集为阴性. 2结果 2.1PBP2a检测结果 106株金黄色葡萄球菌中PBP2a阳性87株,阴 性19株. 2.2两种纸片扩散法检测MRSA结果 用头孢西丁和苯唑西林纸片法筛选MRSA的 结果见表1,2.从表1中可见:苯唑西林纸片扩散 法筛选MRSA的敏感性为95.4%,特异性为 94.7%;从表2中可见:用头孢西丁纸片扩散法筛选 MRSA敏感性为98.9%,特异性为100%. 表1苯唑西林纸片法筛选MRSA的结果(株) 表2头孢西丁纸片法筛选MRSA的结果(株) 3讨论 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)是临床院 感的常见致病菌,目前用PCR方法检测MecA基因 为检测MRSA的金标准【3】.但是该方法对于实验 室设备,操作人员的要求十分高,而且费用昂贵,不 易在临床实验室中常规开展.检测mecA基因编码 产物PBP2a的表达将是判断金黄色葡萄球菌对甲 氧西林是否耐药的最直接证据(43.胶乳凝集是一 种简便,快速,准确的方法【5].其基本原理是: PBP2a单克隆抗体致敏的胶乳颗粒与MRS的膜蛋 白提取物作用,产生肉眼可见的凝集颗粒.诱导后 的PBP2a可以提高检出率,因此在MH琼脂中加入 NaC1,挑取苯唑西林周围的菌落.因为NaC1和苯唑 西林可以增强MecA基因的表达促进PBP2a的产 生,从而提高灵敏度,这对PBP2a的检测很重要. 实验中发现,在M—H琼脂平板上,苯唑西林 的抑菌环周界相对模糊,这就为准确测量造成一定 的困难,而头孢西丁相对较清晰. 实验表明:两种纸片扩散法中,用头孢西丁纸 片法检测MRSA与胶乳凝集试验有很好的一致性, 其敏感性为98.9%,特异性达100%,与之相比,目 前临床上广泛使用的苯唑西林纸片法敏感性和特 异陛都不如头孢西丁.因此,头孢西丁纸片检测 MRSA优于苯唑西林纸片. 参考文献: 【1JFeltenA,GI彻dryB,I~snangePH,et a1.Evaluationofthreetechniquesfordetetionoflow— levelmethicillin—resistantStaphylococcusaureus(MR- SA):adiskdiffusionmethod'vithcefoxitinandmoxalac. tam,theVitek2system,andtheMRSA—screenlatex agglutinationtest[J].ClinMicmbiol,2002,4o(8):2766 — 2771. [2)SakoulasG,GoldHS.VenkataramanA,eta1. Methicillin—resistantStaphylococcusaureus:comprison ofsusceptibility~stingmethodsandanalysisofmecA positivesusceptiblestrains[J].ClinMicmbiol,2001,39 (11):3946—3951. [3]PredariSc,LigozziMandFontanaR.Genotypic identificationofmethiciHin--resistantcoagulase--nega?- tivestaphylococcibypolymerasechainreaction[J].An. timicrobAgentsChemother,1991,35(12):2568—2 573. [4]HiramatsuK,CuiL,KurodaM.Theemergence andevolutionofmethicillin--resistantStaphylococcusan.- reus[J].TrendsMicrobiol,2001,9(10):486293. [5]LouieL,ChoiE.Evaluationofthreerapidmeth. odsfordetetionofmethicillinresistanceinStaphylococcus aureus[J].ClinMicmbiol,2000,38:27102713. (编辑:谢忠艳) (收稿日期:2007—10—15)