自动化网织红细胞分析技术及其相关指标的临床应用
自动化网织红细胞分析技术及其相关指标
的临床应用
国外医学输血及血液学分册2002年第25卷第4期
自动化网织红细胞分析技术及其相关指标
的临床应用
陈晓冰林希综述吴斌审校
【摘要】自动化网织红细胞分析比手工计数法具有更高的精确性,准确性和可重复性,且快
速简便,
可买对反映骨髓造血活动.自动化网织红细胞分析结果,特别是网织红细胞血红蛋白含量对
铁缺乏症/缺
铁贫血的早敷诊断及其它原因所致的贫血的诊断,鉴别诊断和治疗评价具有较高的临床应
用伊值.
【关键词】网织红细胞检测
临床应用
网织红细胞计数是常用的检测项目,近年来,人工
镜检观察法逐渐被自动化网织红细胞分析技术所取
代’..本文就自动化网织红细胞分析技术的原理及
相关指标的临床应用研究进展作一综述.
l自动化网织红细胞分析技术的原理
自动化网织红细胞分析技术的基本原理是利用网
织红细胞胞浆中残存的RNA能特异性结合某些染料,
如ThiazoleOrange(TO),AuramineO,Oxazine750,
作者单位:350005福卅1,福建医科大学附属第一医院儿科
Newmethyleneblue等.用这些染料对EDTA处理过的
全血进行染色,通过测定网织红细胞的染色强度来检测
网织红细胞数量及其各项参数.测定网织红细胞染色
强度的方法分为两种:荧光度法(如使用TO或Au—
ramineO的系统)和吸光度法(如使用Oxazine750或
Newmethyleneblue的系统).二者分别通过测量与网
织红细胞RNA相互作用的染料的荧光素强度或吸光
度进行网织红细胞计数与分析.采用TO的荧光度法
容易过多估计网织红细胞的数量,尤其是在白细胞,血
小板或HowellJolly小体异常增多时I2J,吸光度法敏
适合于人类基因治疗.过去几年中,新的病毒制备技术
提高了从V病毒载体的效价,并清除了腺病毒的污
染,促进了r从V在体内基因转移中的应用,对杂合型
载体和各种从V血清型载体基因转移的实验研究拓
展了从V在不同细胞类型中的应用,研究人员也正致
力于可调节性载体和针对于不同细胞类型载体的研究,
使r从V在人类疾病基因治疗中展现出广阔的前景.
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感性强,上述因素不会干扰网织红细胞的分析,因
此,网织红细胞分析技术的发展趋势倾向于采用吸光度
法.目前,临床上常用的几种自动化网织红细胞分析系
统虽然采用的染料不同,测定方法及检测的参数也有所
不同,但大多基于上述原理.
2自动化网织红细胞分析技术的优点
与全血细胞计数相比,网织红细胞参数可随骨髓红
细胞造血变化而及时发生变化,为骨髓红细胞造血活动
提供”实时”监测.除网织红细胞计数外,自动化网织红
细胞分析还能进行以下指标的测定:(1)网织红细胞相
关指标测量,包括网织红细胞血红蛋白含量(CH),平
均网织红细胞容积(MCV),平均网织红细胞血红蛋白
浓度(CHCM),网织红细胞体积分布宽度(RDW),网
织红细胞血红蛋白含量分布宽度(HDW)和网织红细
胞细胞血红蛋白浓度分布宽度(CHDW).(2)网织红
细胞成熟度分级,如高荧光素网织红细胞(HFR),中荧
光素网织红细胞(MFR)和低荧光素网织红细胞
(LFR).越不成熟的网织红细胞RNA含量越高,染色
强度也越高.代表网织红细胞成熟度的三种指数分别
是:网织红细胞成熟指数(RMI),高荧光素网织红细胞
数(HFR),不成熟网织红细胞比例(IRF,=HFR+
MFR).
研究证实:人工镜检计数法主观性大,精确性,准确
性和可重复性差.与此相比,自动化网织红细胞分析检
测是一种更客观,更准确的测量网织红细胞百分数和绝
对值的方法,其既可定性又可定量,同时,测定的变异系
数小,精确度高,具有良好的可重复性.研究证实-4J:
CH,MCV,CHCM的变异系数为0.8%,1.6%,尤其
是CH.血样的贮存可能会引起MCV的升高和
CHCM的降低,但CH却保持相对稳定.
3自动化网织红细胞计数及其相关指标的临床应用
3.1网织红细胞计数及其相关指标在贫血诊断和治疗
中的应用
3.1.1缺铁性贫血(IDA)和铁缺乏症(ID)的诊断和治
疗Brugnara等_5J采用盲法随机试验评价CH和传统
诊断ID/IDA指标临床价值.Logistic多元回归分析显
示:只有CH与血红蛋白(Hb)对ID诊断,CH对IDA
诊断有统计学意义;受试者工作特征曲线分析显示:
CH诊断准确度明显高于铁蛋白;以CH<26pg界值,
诊断ID的敏感度和特异度分别为70%和78%,诊断
IDA的敏感度和特异度分别为83%和75%;当CH<
20pg时,患ID的可能性>90%,而CH>29pg时,患
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ID的可能性接近于0.CH在口服铁剂治疗后1,2周
就能可靠地鉴别患者对口服铁剂治疗有无反应;严重
IDA患者采用静脉注射铁剂治疗后CH,MCV和
CHCM迅速提高.因此,自动化网织红细胞分析+全
血细胞计数可完全胜任ID和IDA的诊断;CH为代表
的网织红细胞参数是监测铁剂治疗早期反应的良好指
标.其优点在于:?自动化检测,操作简便,诊断的敏感
度,特异度高;?其成本一效益比极佳,且需血量明显减
少,非常适合儿童的血液学检查.
3.1.2VitB,治疗巨幼红细胞性贫血的疗效监测
VitB,治疗巨幼红细胞性贫血的早期反应为网织红细
胞体积变小,以至小于外周血循环中的成熟红细胞体
积,即MCV/MCV比值倒置.随后,MCV/MCV比值
才逐渐恢复正常.因此,MCV/MCV比值可作为
VitB,治疗巨幼红细胞性贫血的疗效监测指标_6j.
3.1.3镰刀状红细胞性贫血的诊断和治疗镰刀状红
细胞血红蛋白病(HbSC病)的鉴别特征之一是产生脱
水的高密度网织红细胞(CHCM>38g/d1).羟基脲
(Hydroxyurea)治疗HbSC病的早期反应是网织红细胞
体积增加和镰刀状红细胞脱水状况改善.在羟基脲治
疗2周后网织红细胞绝对数减少,CHCM下降,MCV
和MCV上升,高密度红细胞(CHCM>38g/d1)数减
少_7j.近来研究证实,Mg可抑制K—Cl协同转运,
改善细胞脱水状况,故口服镁制剂可用于治疗HbSC
病.经镁制剂治疗后高密度红细胞数减少,RDW,
HDW和HDW下降,但Hb和网织红细胞绝对数保持
不变.
3.1.4再生障碍性贫血的诊断和治疗再生障碍性贫
血的网织红细胞计数极低(<0.03×10/L),不成熟细
胞比例<l0%.在抗胸腺细胞球蛋白,环孢素A和粒
细胞集落刺激因子联合治疗重度再生障碍性贫血的治
疗反应监测中,HFR可作为可靠的早期预测指标.
HFR上升至>5%预示在7,l4天内多形核细胞将上
升并>0.5×10/L.
3.2网织红细胞计数及其相关指标在重组人促红细胞
生成素(rHuEPO)的疗效评价与监测中的应用
rHuEPO广泛应用于肾性贫血,肿瘤或艾滋病引起
的贫血及围手术期的治疗,但可引起功能性ID_1,内
源性EPO生成增加(如免疫溶血性贫血时)也可导致功
能性ID_6J.口服铁剂治疗不能满足rHuEPO引起的需
铁量增长,静脉注射铁剂能提高rHuEPO疗效,却容易
过量导致急慢性毒性反应.研究显示I1:使用皮下注
射rHuEPO+静脉注射铁剂治疗血液透析患者,其CH
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可保持正常;透析患者CH<26pg时,均有运铁蛋白饱
和度(Tfsat)下降,红细胞比容(Hct)下降和近期rHuE—
PO剂量增加的治疗史.研究证实[12J:铁代谢指标对慢
性肾功能衰竭患者的铁营养状态监测无临床价值,但以
静脉注射铁剂治疗后网织红细胞数增加作为诊断功能
性ID的金
,CH<26pg诊断功能性ID的敏感度为
100%,特异度为80%.提示,与血清铁蛋白,Tfsat或
低色素红细胞%相比,CH对长期血液透析患者ID的
预测更准确,为监测长期血液透析患者铁营养状态的可
靠指标.
33网织红细胞计数及其相关指标在骨髓移植后造血
功能重建早期诊断中的应用
研究发现6j,在骨髓移植前的化疗过程中,MCV,
进行性下降,发生暂时性的MCV/MCV比值倒置;在
移植后造血功能重建的早期,MCV迅速上升至超过参
考值.但网织红细胞计数和成熟度指标在骨髓移植或
外周血干细胞移植后造血功能重建的早期诊断中的应
用一直存在争议.一些研究认为RMI,HFR,IRF和平
均荧光素指数(MFI)能提供比血小板或白细胞更早的
造血功能重建的信息[13J.最新研究指出,当HFR达到
3%,IRF10%,MFI10,MCV110fl时可以判定红细胞
系已重建.IRF和MFI的上升均明显早于白细胞数的
上升,且二者相互关联.在异体移植中,MFI与随后的
白细胞数上升相互关联;在自体移植中,MCV与随后
的白细胞数上升相互关联.MFI与MCV的临界值对
确定随后的髓细胞系重建有重要意义l14J.但另一种观
点认为这些指标与白细胞计数相比,是否具有优越性还
不肯定.考虑到网织红细胞成熟度分析技术本身的局
限性,需作更多的研究才能证实RMI,HFR和IRF的
临床意义,尤其是这些指标提供的信息是否准确及这些
信息是否有助于更加有效的治疗l15J.
4自动化网织红细胞分析技术局限性和未来应用前景
自动化网织红细胞分析技术本身还存在一些局限性:
(1)标准化问题,包括样品采集,染色技术,检测仪器及
数据分析等的标准化[.由于采用的自动化网织红细
胞分析系统及染色方法不同,定义网织红细胞参数和参
考值范围的标准不同,参考值范围不统一.此外,尚未
建立校准体系,没有特定的用于质控的校准参数…;
(2)网织红细胞成熟指数检测的可靠性常受到质
疑l.16j,这是由于可用于计数的HFR过少,低于网织
红细胞总数1%.同时,HFR检测易受其他细胞成分的
干扰,例如:白细胞可能被荧光素染色而落入HFR区
域,导致高估HFR.有核细胞,有疟原虫寄生的红细胞
或带有Howell—Jolly小体的红细胞也将导致高估
IRF.因此,将来需要比较不同的自动化网织红细胞分
析系统并进行操作规程和数据分析等的标准化,筛选稳
定和可被广泛接受的校准参数,以及确定参考值范
围【’J.同时,对网织红细胞相关指标的临床应用价
值需作进一步研究.
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