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自动化网织红细胞分析技术及其相关指标的临床应用

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自动化网织红细胞分析技术及其相关指标的临床应用自动化网织红细胞分析技术及其相关指标的临床应用 自动化网织红细胞分析技术及其相关指标 的临床应用 国外医学输血及血液学分册2002年第25卷第4期 自动化网织红细胞分析技术及其相关指标 的临床应用 陈晓冰林希综述吴斌审校 【摘要】自动化网织红细胞分析比手工计数法具有更高的精确性,准确性和可重复性,且快 速简便, 可买对反映骨髓造血活动.自动化网织红细胞分析结果,特别是网织红细胞血红蛋白含量对 铁缺乏症/缺 铁贫血的早敷诊断及其它原因所致的贫血的诊断,鉴别诊断和治疗评价具有较高的临床应 用伊值. 【关键词】网织...
自动化网织红细胞分析技术及其相关指标的临床应用
自动化网织红细胞分析技术及其相关指标的临床应用 自动化网织红细胞分析技术及其相关指标 的临床应用 国外医学输血及血液学分册2002年第25卷第4期 自动化网织红细胞分析技术及其相关指标 的临床应用 陈晓冰林希综述吴斌审校 【摘要】自动化网织红细胞分析比手工计数法具有更高的精确性,准确性和可重复性,且快 速简便, 可买对反映骨髓造血活动.自动化网织红细胞分析结果,特别是网织红细胞血红蛋白含量对 铁缺乏症/缺 铁贫血的早敷诊断及其它原因所致的贫血的诊断,鉴别诊断和治疗评价具有较高的临床应 用伊值. 【关键词】网织红细胞检测临床应用 网织红细胞计数是常用的检测项目,近年来,人工 镜检观察法逐渐被自动化网织红细胞分析技术所取 代’..本文就自动化网织红细胞分析技术的原理及 相关指标的临床应用研究进展作一综述. l自动化网织红细胞分析技术的原理 自动化网织红细胞分析技术的基本原理是利用网 织红细胞胞浆中残存的RNA能特异性结合某些染料, 如ThiazoleOrange(TO),AuramineO,Oxazine750, 作者单位:350005福卅1,福建医科大学附属第一医院儿科 Newmethyleneblue等.用这些染料对EDTA处理过的 全血进行染色,通过测定网织红细胞的染色强度来检测 网织红细胞数量及其各项参数.测定网织红细胞染色 强度的方法分为两种:荧光度法(如使用TO或Au— ramineO的系统)和吸光度法(如使用Oxazine750或 Newmethyleneblue的系统).二者分别通过测量与网 织红细胞RNA相互作用的染料的荧光素强度或吸光 度进行网织红细胞计数与分析.采用TO的荧光度法 容易过多估计网织红细胞的数量,尤其是在白细胞,血 小板或HowellJolly小体异常增多时I2J,吸光度法敏 适合于人类基因治疗.过去几年中,新的病毒制备技术 提高了从V病毒载体的效价,并清除了腺病毒的污 染,促进了r从V在体内基因转移中的应用,对杂合型 载体和各种从V血清型载体基因转移的实验研究拓 展了从V在不同细胞类型中的应用,研究人员也正致 力于可调节性载体和针对于不同细胞类型载体的研究, 使r从V在人类疾病基因治疗中展现出广阔的前景. 5 l 2 3 4 参考文献 RichterM,1wataA,NyhuisJ,eta1.PhysiolGeno,2000,2:ll7 HandaA,MuramatsubS,QiucJ,eta1.JGenVirol,2000,8l:2077 ZabnerJ,SellerM,WaltersR,etalJVirol,2000,74(8):3852 WaltersRW,YiSMP,KeshavjeeS.eta1.JBiolChem,2001,276(23): 206l0 RizzmoG,GorgoniB,CappellettiM,etalJVirol,1999,73(3):2517 SamuelM,YoungJ,DouglasM.etalJVi?l,2000,74(9):3953 ChatterjeeS,LiW,WongCA,eta1.Blood,1999,93(6):l882 XiaoX,LiJ,SamulskiRJ.etalJVirol,1998,79(3):2224 SalveuiA.OreveS,ChadeufG,etalHumGeneTher,l998,9:695 MonahanPE,SamulskiRJ,TazelaarJ.etd,GeneTher,l998,5:40 KNudo~N.BrownKE,WaltersRW,eta1.Jviml,2001,75(15):6884 l2 l3 14 l5 16 XiaoWD,ChimmleN,BertaSC,etalJVirol,1999,73(5):3994 DavidsonBL,SteinCS,HethJA,eta1.ProcNatlAcadSci,2000,97 (7):3428 HalbertCL,RutledgeEA,AllenJM,etalJVirol,2000,74(3):1524 DuanDS,YanzY,YueYP,etalJVirol,200l,75(16):7662 BurtonM,NakaiH,ColosiI,etalProcNatlAcadSci,1999,96(22): l2725 ArrudaVR,HagstromJN,1)eitchJ,etd,Blood,2001,97(1):130 KoeberDD,exanderIE,ttalbertCL,a1.ProcNatlAcadSci,1997, 94:l426 HerzogRW,HagstromJN,KungSH,etalProcNatlAcadSci,1997, 94:5804 NakaiH,HerzogRW,Hags:romJN,etalBlood,1998,9l:4600 WangLL,TakabeK,BidlingmaierSM,etalProcNatlAcadSci,1999, 96(7);3906 KayMA,MannoCS,RagniMV,etalNatGenet,2000,24:257 NathwaniAC,DavidoffA,HanawaH,etalBlood,2001,97(5):1258 GeY,PowellS,RoeyMV,eta1.Blood,2001,97(12):3733 KesslerPD,PodsakoffGM,ChenXJ,etalProcNatlAcadSci,1996, 93:l4082 BOblD,SalvettiA,MounierP,etalBlood,1998,92(5):1512 BohlD.BoschA,CardonaA,eta1.Blood,2000,95(9):2793 341 “加 )678q? 感性强,上述因素不会干扰网织红细胞的分析,因 此,网织红细胞分析技术的发展趋势倾向于采用吸光度 法.目前,临床上常用的几种自动化网织红细胞分析系 统虽然采用的染料不同,测定方法及检测的参数也有所 不同,但大多基于上述原理. 2自动化网织红细胞分析技术的优点 与全血细胞计数相比,网织红细胞参数可随骨髓红 细胞造血变化而及时发生变化,为骨髓红细胞造血活动 提供”实时”监测.除网织红细胞计数外,自动化网织红 细胞分析还能进行以下指标的测定:(1)网织红细胞相 关指标测量,包括网织红细胞血红蛋白含量(CH),平 均网织红细胞容积(MCV),平均网织红细胞血红蛋白 浓度(CHCM),网织红细胞体积分布宽度(RDW),网 织红细胞血红蛋白含量分布宽度(HDW)和网织红细 胞细胞血红蛋白浓度分布宽度(CHDW).(2)网织红 细胞成熟度分级,如高荧光素网织红细胞(HFR),中荧 光素网织红细胞(MFR)和低荧光素网织红细胞 (LFR).越不成熟的网织红细胞RNA含量越高,染色 强度也越高.代表网织红细胞成熟度的三种指数分别 是:网织红细胞成熟指数(RMI),高荧光素网织红细胞 数(HFR),不成熟网织红细胞比例(IRF,=HFR+ MFR). 研究证实:人工镜检计数法主观性大,精确性,准确 性和可重复性差.与此相比,自动化网织红细胞分析检 测是一种更客观,更准确的测量网织红细胞百分数和绝 对值的方法,其既可定性又可定量,同时,测定的变异系 数小,精确度高,具有良好的可重复性.研究证实-4J: CH,MCV,CHCM的变异系数为0.8%,1.6%,尤其 是CH.血样的贮存可能会引起MCV的升高和 CHCM的降低,但CH却保持相对稳定. 3自动化网织红细胞计数及其相关指标的临床应用 3.1网织红细胞计数及其相关指标在贫血诊断和治疗 中的应用 3.1.1缺铁性贫血(IDA)和铁缺乏症(ID)的诊断和治 疗Brugnara等_5J采用盲法随机试验评价CH和传统 诊断ID/IDA指标临床价值.Logistic多元回归分析显 示:只有CH与血红蛋白(Hb)对ID诊断,CH对IDA 诊断有统计学意义;受试者工作特征曲线分析显示: CH诊断准确度明显高于铁蛋白;以CH<26pg界值, 诊断ID的敏感度和特异度分别为70%和78%,诊断 IDA的敏感度和特异度分别为83%和75%;当CH< 20pg时,患ID的可能性>90%,而CH>29pg时,患 342 圈:塑垦兰坌盟堡笙鲞笙塑 ID的可能性接近于0.CH在口服铁剂治疗后1,2周 就能可靠地鉴别患者对口服铁剂治疗有无反应;严重 IDA患者采用静脉注射铁剂治疗后CH,MCV和 CHCM迅速提高.因此,自动化网织红细胞分析+全 血细胞计数可完全胜任ID和IDA的诊断;CH为代表 的网织红细胞参数是监测铁剂治疗早期反应的良好指 标.其优点在于:?自动化检测,操作简便,诊断的敏感 度,特异度高;?其成本一效益比极佳,且需血量明显减 少,非常适合儿童的血液学检查. 3.1.2VitB,治疗巨幼红细胞性贫血的疗效监测 VitB,治疗巨幼红细胞性贫血的早期反应为网织红细 胞体积变小,以至小于外周血循环中的成熟红细胞体 积,即MCV/MCV比值倒置.随后,MCV/MCV比值 才逐渐恢复正常.因此,MCV/MCV比值可作为 VitB,治疗巨幼红细胞性贫血的疗效监测指标_6j. 3.1.3镰刀状红细胞性贫血的诊断和治疗镰刀状红 细胞血红蛋白病(HbSC病)的鉴别特征之一是产生脱 水的高密度网织红细胞(CHCM>38g/d1).羟基脲 (Hydroxyurea)治疗HbSC病的早期反应是网织红细胞 体积增加和镰刀状红细胞脱水状况改善.在羟基脲治 疗2周后网织红细胞绝对数减少,CHCM下降,MCV 和MCV上升,高密度红细胞(CHCM>38g/d1)数减 少_7j.近来研究证实,Mg可抑制K—Cl协同转运, 改善细胞脱水状况,故口服镁制剂可用于治疗HbSC 病.经镁制剂治疗后高密度红细胞数减少,RDW, HDW和HDW下降,但Hb和网织红细胞绝对数保持 不变. 3.1.4再生障碍性贫血的诊断和治疗再生障碍性贫 血的网织红细胞计数极低(<0.03×10/L),不成熟细 胞比例<l0%.在抗胸腺细胞球蛋白,环孢素A和粒 细胞集落刺激因子联合治疗重度再生障碍性贫血的治 疗反应监测中,HFR可作为可靠的早期预测指标. HFR上升至>5%预示在7,l4天内多形核细胞将上 升并>0.5×10/L. 3.2网织红细胞计数及其相关指标在重组人促红细胞 生成素(rHuEPO)的疗效评价与监测中的应用 rHuEPO广泛应用于肾性贫血,肿瘤或艾滋病引起 的贫血及围手术期的治疗,但可引起功能性ID_1,内 源性EPO生成增加(如免疫溶血性贫血时)也可导致功 能性ID_6J.口服铁剂治疗不能满足rHuEPO引起的需 铁量增长,静脉注射铁剂能提高rHuEPO疗效,却容易 过量导致急慢性毒性反应.研究显示I1:使用皮下注 射rHuEPO+静脉注射铁剂治疗血液透析患者,其CH 国外医学输血及血液学分册2002年第25卷第4期 可保持正常;透析患者CH<26pg时,均有运铁蛋白饱 和度(Tfsat)下降,红细胞比容(Hct)下降和近期rHuE— PO剂量增加的治疗史.研究证实[12J:铁代谢指标对慢 性肾功能衰竭患者的铁营养状态监测无临床价值,但以 静脉注射铁剂治疗后网织红细胞数增加作为诊断功能 性ID的金,CH<26pg诊断功能性ID的敏感度为 100%,特异度为80%.提示,与血清铁蛋白,Tfsat或 低色素红细胞%相比,CH对长期血液透析患者ID的 预测更准确,为监测长期血液透析患者铁营养状态的可 靠指标. 33网织红细胞计数及其相关指标在骨髓移植后造血 功能重建早期诊断中的应用 研究发现6j,在骨髓移植前的化疗过程中,MCV, 进行性下降,发生暂时性的MCV/MCV比值倒置;在 移植后造血功能重建的早期,MCV迅速上升至超过参 考值.但网织红细胞计数和成熟度指标在骨髓移植或 外周血干细胞移植后造血功能重建的早期诊断中的应 用一直存在争议.一些研究认为RMI,HFR,IRF和平 均荧光素指数(MFI)能提供比血小板或白细胞更早的 造血功能重建的信息[13J.最新研究指出,当HFR达到 3%,IRF10%,MFI10,MCV110fl时可以判定红细胞 系已重建.IRF和MFI的上升均明显早于白细胞数的 上升,且二者相互关联.在异体移植中,MFI与随后的 白细胞数上升相互关联;在自体移植中,MCV与随后 的白细胞数上升相互关联.MFI与MCV的临界值对 确定随后的髓细胞系重建有重要意义l14J.但另一种观 点认为这些指标与白细胞计数相比,是否具有优越性还 不肯定.考虑到网织红细胞成熟度分析技术本身的局 限性,需作更多的研究才能证实RMI,HFR和IRF的 临床意义,尤其是这些指标提供的信息是否准确及这些 信息是否有助于更加有效的治疗l15J. 4自动化网织红细胞分析技术局限性和未来应用前景 自动化网织红细胞分析技术本身还存在一些局限性: (1)标准化问题,包括样品采集,染色技术,检测仪器及 数据分析等的标准化[.由于采用的自动化网织红细 胞分析系统及染色方法不同,定义网织红细胞参数和参 考值范围的标准不同,参考值范围不统一.此外,尚未 建立校准体系,没有特定的用于质控的校准参数…; (2)网织红细胞成熟指数检测的可靠性常受到质 疑l.16j,这是由于可用于计数的HFR过少,低于网织 红细胞总数1%.同时,HFR检测易受其他细胞成分的 干扰,例如:白细胞可能被荧光素染色而落入HFR区 域,导致高估HFR.有核细胞,有疟原虫寄生的红细胞 或带有Howell—Jolly小体的红细胞也将导致高估 IRF.因此,将来需要比较不同的自动化网织红细胞分 析系统并进行操作规程和数据分析等的标准化,筛选稳 定和可被广泛接受的校准参数,以及确定参考值范 围【’J.同时,对网织红细胞相关指标的临床应用价 值需作进一步研究. 5参考文献 lTurowskiD,WysockaJ,ButkiewiczAMFoliaHistochemCytobiol, 2000,38(1):3l 2DavisBH,BigelowNCHematolOncolClinNorthAm,1994,8(4):617 3BrugnaraC,HippMJ,IrvingPJ,eta1.AmJClinPathol,1994,102(5): 623 4SandbergS,RustadP,JohannesenB,eta1.EurJHaematol,1998,61 (1):42 5BrugnaraC,ZurakowskiD,DiCanzioJ,eta1.JAMA,1999,28l(23): 2225 6d’OnofrioG,ChirilloR,ZiniG,etalBlood,1995,85(3):818 7SteinbergMH,NagelRL,BrugnaraC.BrJHaematol,1997,98(4):838 8DeFranceschiL,BachirD,GalacterosF,etalBrJHaematol,2000,108 (2):284 9SicaS,SoraF,LaurentiL,eta1.CllnLabHaematol,1999,21(6):387 10MittmanN,SreedharaR,MushnickR,eta1.AmJKidneyDis,1997,30 (6):912 llBesarabA,AminN,AhsanM,eta1.JAmSocNephrol,2000,ll(3): 530. 12FishbaneS,GalganoC,LangleyRC,eta1.KidneyInt,1997,52(1):217 13d’0nofrioG,TichelliA,FouresC,etalClinLabHaematol,1996,l8 (supp1):145 14TorresA,SanchezJ,LakomskyD,etalHaematologica,2001,86 (1):24 15BrugnaraC.IntJClinLabRes,1998,28(1):l l6VillamorN,KirschA,HuhnD,etalClinLabHaematol,1996.18 (2):89 17CharuruksN,LimpanasithikulW,VoravudN,eta1.JMedAssocThai, 1998,8l(5):357 343
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