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世界华人消化杂志 一 一
年版权归世界胃肠病学杂志社
病毒性肝炎
’
高脂饮食性脂肪性肝炎大鼠肝脏线粒体损伤和 尸储备改变
丁晓东 , 范建高 , 徐正婕 , 郑晓英 , 田丽艳 , 王国良
丁晓东 , 上海第二 医科大学附属新华医院消化内科 上海市 咒
范建高 徐正婕 , 郑晓英 田丽艳 王国良 上海市第一人民医院消化内科
上海市
丁晓东 , 男 , 年生 山东烟台市人 汉族 年白求恩医科大学毕业
年复旦大学上海医学院内科学硕士毕业 主要少人事慢性肝病的研究
通讯作者 范建高 。。。
,
上海市第一人民医院消化内科
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月
电话 一 传真 一
收稿日期 一 一 接受日期 一 一
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几川
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摘要
目的 探讨高脂饮食大鼠脂肪性肝炎模型肝脏线粒体损
伤和三磷酸腺普 储备的改变
一
方法 大鼠随机分为模型组 和对照组 ,
分别给予高脂饲料和标准饲料喂养 , 分批于实验 、
、 和 处死 常规检测血清生化和肝匀浆
含量 , 光镜和 电镜观察肝脏组织学改变
一
一 ,
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日 伪
以
一
结果 与对照组相比 , 模型组肝脏 时肝脂肪变明
显 , 表现为单纯性脂肪肝 , 一 进展为脂肪性
肝炎 模型组肝脏 含量呈减低趋势 , 一 时
较对照组减低约 乃 电镜下 模型组大鼠肝
细胞线粒体肿胀 、 增大 , 部分 内膜峰粒脱落 ,
和 大鼠线粒体内有类圆形结晶样物质沉积
结论 高脂饮食大鼠脂肪性肝炎模型的肝细胞存在线粒
体损伤和 储备的减低
,
,
, 【 土 一 林
士 一 林 , , 』
山 【 幻 一脚。均 扣 沪卿。吻
,
关键词 非酒精性脂肪性肝炎 线粒体 三磷酸腺普
丁晓东 范建高 徐正婕 关脱英 田丽艳 王国良 高脂饮食性脂肪惭干炎大鼠
肝脏绷立体损伤和奸尸储备改变 世界华六 肖化杂志 一
一 门 门
引言
随着非酒精性脂肪性肝炎
, 发病率的增高 ‘
一 魂 , 针对 的
研究越来越多 能量供应超过机体需要时 , 大量转化
丁晓东 , 等 高脂饮食性脂肪性肝炎大副干脏线粒体损伤和 户储备改变
为脂肪蓄积在机体 内 , 当超过外周脂肪组织的蓄积
能力后 , 易脂解为游离脂肪酸 。 ,
进入血液 , 运输到肝脏 , 经过 氧化转化为三
磷酸腺普 , 储备在
肝细胞 内 线粒体在 氧化中发挥核心作用 , 如果线
粒体损伤导致脂肪酸代谢障碍 , 便酷化为三酞
甘油 , 蓄积在肝脏 , 导致肝细胞
内脂滴增多 , 发生肝细胞脂肪变 为此 , 我们动态观
察 形成过程中肝脏线粒体超微形态改变和 储
备情况 , 以明确他们在 发病 中的作用
材料和方法
材料 雄性 大鼠 只 , 购 自中科院上海实验动
物中心斯莱克公司 , 体质量 一 胆固
醇 , 上海生化试剂商店 猪油 , 自备 血清生化指标通
过 全 自动生化
仪检测 荧光素酶 一 荧
光素 、 标准 粉剂和荧光素酶系缓冲液 中科院上海
植物生理研究所 低温离心机 公司 , 一 透
射电子显微镜 飞利浦透射电镜 一 型发光
光度计 中科院上海植物生理研究所 大鼠正常喂养
后 , 随机分为 组 对照组 只用普通饲料喂
养 , 模型组 只以 胆固醇 猪油
标准大鼠用饲料构成的高脂饲料喂养 实
验开始后 、 、 和 分别处死 只对照组
和 只模型组大鼠 所有大鼠处死前夜禁食 , 以氯胺
酮麻醉 , 腹主动脉采血后取肝 , 称量肝脏湿质量 , 之
后迅速从肝脏切取 块肝组织 , 中性甲醛固定后制备
石蜡切片 , 同时一小块肝脏标本标记后液氮罐中冷
冻保存 , 并取 “ 的肝脏组织一块戊二醛固定后行
电镜检查
方法 血清 、 、 和总胆固醇 , 采
用全 自动生化分析仪检测 肝组织石蜡切片 染色观
察肝病理学变化 , 根据肝小叶内含脂滴细胞数 总细胞
数之比值 , 对肝细胞脂肪变进行分级 一 肝脏炎症活动
度计分 。
, 标准分为汇管区炎症 、 小
叶内炎症 、 碎屑样坏死 、 桥接坏死
项 , 计分
为 十 十 十 肝脏经戊二醛固定
后 , 由 型超薄切片机切片 , 构椽酸铅色片染
色 , 透射电镜观察肝细胞超微结构的改变 , 尤其是线
粒体的变化 测定所有试剂均用重蒸蒸馏水配制 ,
溶液为 腺昔酸提取液 · ,
荧光素酶系缓冲液 每只粉剂用
重蒸水溶解 , 内含 甘氨酞甘氨酸
、 、 缓冲液
的标准曲线 将 配成 一‘ 一 一
的 管应用液进行测定 , 以相对发光强度的 值与
浓度绘制标准曲线 荧光素酶 一 荧光素法测定
取肝组织 一 , 加入 腺昔酸提取液中 ,
匀浆后沸水中加热 , 然后 以
离心 , 取上清液 检测时将肝匀浆液
加入重蒸馏水 稀释 , 置入 的比
色杯中 , 放入 一 型发光光度计的暗室中 , 从暗室
盖的小孔中快速注入荧光素酶系缓冲液 , 所记
录之发光曲线的初始峰值即为检测样品光强 , 测定温
度为 ℃ , 测定电压为 根据所得光强 测定曲
线上所 占的小格数 后 , 在标准 曲线上查出 值
统计学处理 计量资料用 士 表示 , 组间比
较采用 检验 , 为差别有统计学意
义 , , 为差别有显著性统计学意义 , 所有统
计采用 , 软件完成
结果
实验过程中 组大鼠体质量 、 肝质量和腹腔内脂肪含
量均呈进行性增加 从 开始模型组大 鼠体质量 、
肝指数 肝脏湿重 体质量 和腹腔内脂肪指数 腹腔
内脂肪含量 体质量 均显著高于对照组 只 ,
升高最明显 , 表 与对照组相 比 ,
表 各组大鼠体质工 、 肝菌 、 腹腔内脂肪含 , 改变
分组
正常组
高脂组
正常组
高脂组
正常组
高脂组
正常组
高脂组
体质量
士
士
土
士
士
士
士
士
肝重 肝指数 脂肪指数
土
士
土
‘
士
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启 士
土
土
土
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刀 土
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习 土
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刀 士 刀
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士 刀
士
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, “ 对照组
一 一 世界华人消化杂志 。。 年 月 日 第 卷 第 期
表 各组大鼠生化指标改变
,了,矛士土士
分组
正常组
高脂组
正常组
高脂组
正常组
高脂组
正常组
高脂组
灯
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土
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士
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, “ 对照组
表 各组大限肝脂肪变程度和 计分
脂肪变程度
分 组
—
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对照组 士
‘
高脂组 石 士 土
高脂组 土 士
高脂组 士 上 “
高脂组 习 士
‘
土 ,
, ”尸 对照组
在第 一 部分模型组大鼠血清 水平明显升高 ,
时模型组大鼠血清 均值显著增高 只 ,
时增高更为明显 只 血清 水平在造模
开始显著升高 对照组只 , 至造模
达高峰 两组大鼠血清 水平在造模 一 时差异
不明显 , 但在 时 , 模型组与对照组相 比明显
升高 血清 水平 自造模 始呈增高趋
势 , 时差别有统计学意义 只 , 一
时升高更为明显 , 表
肝脏病理学改变 光镜下 , 肝组织 染色显示造
模 大鼠肝脏即有弥漫性肝细胞脂肪变性 , 以肝腺
泡 工 区最为明显 , 达脂肪肝诊断标
准 , 肝脏小叶内出现轻度炎症细胞浸润和
散在的点状坏死 造模 大鼠呈中一重度脂肪肝 , 且
积分显著高于造模 大鼠 只 ,
所有大鼠均可见到小叶内炎症 , 炎症细胞 以单个核
细胞为主 , 伴点状和 或小灶性坏死 , 部分标本见数
个炎症坏死灶融合成片 , 汇管区亦可见到以单个核细
胞为主的炎症细胞浸润 时 , 大鼠肝脏内往往
数个坏死灶融合成片 , 例出现碎屑样坏死 , 例出
现桥接坏死 , 汇管区炎症也较重 造模 大鼠仍
呈中 一 重度脂肪肝 , 肝脏炎症仍然较重 、 模
型组 , , 表 , 与 高脂
组相比 , 其小叶内炎症略有减轻 , 其中 例
汇管区炎症加剧 透射 电镜下 , 与正常肝细胞相 比
图 模型组大鼠肝细胞内充满大量脂滴 , 肝细胞核
被胞质内积聚的大脂滴推挤 , 从肝细胞中央区被推到
细胞的周边 图 肝细胞线粒体结构异常 , 表现为
线粒体增大 、 肿胀 、 线粒体内靖粒脱落 、 减少 , 且随
着造模时间延长 , 线粒体损害加重 , 部分线粒体内可
以看到类圆形高密度结晶样物质沉积 图 模型组
标本电镜下肝脏内发现胶原纤维沉积 图
大鼠肝脏 含量改变 对照组大鼠肝脏 含量
为 士 一 ”卿 , 模型组肝脏 含量
随着造模时间延长呈逐渐下降趋势 , 模型组与对
照组相比具有统计学意义 尸 , ,
模型组 含量进一步下降 , 与对照组 比较
含量降低约 , 且差异具有明显 的统计学意义
护 , 相关分析显示 , 对照组
肝脏 含量与体质量之间呈负相关 厂 一 ,
只 , 模型组肝脏 含量与体质量的相关性不
明显 , 只 无论模型组还是对
照组大鼠肝指数与肝脏 含量之间均没有明显的
相关性
丁晓东
,
等 高脂饮食性脂肪性肝炎大副干脏线粒体损伤和 尸储备改变
圈 肝细饱透射电镜扫描结果 正常肝细胞 , 细胞核位于细胞中央 , 线粒体形态正常 , 崎粒位于内晴上 。。 高脂组 肝细
胞 , 线粒体结构异常 , 可见线粒体增大 、 肿胀 、 线粒体内峭枷兑落
、
减少 , 部分线粒体内可以看到类圆形高密度结晶样物质沉积 灭 高
脂组 肝脏内发现胶原纤维沉积 高脂组大鼠肝细胞内充满大量脂滴 , 细胞核被胞质内积聚的月旨滴推挤到细胞的周边
讨论
通过高脂饲料喂养雄性 大鼠 , 对肝脏病理变化进
行 了动态观察 , 结果与我们 以前造模情况基本吻
合 , 实验动物出现超质量 、 高胆固醇血症 、 中 一 重
度脂肪肝伴以小叶内为主的炎症坏死 , 从而通过高脂
饲料成功建立了普通 大鼠的 模型 〔一‘ 肝脏是
机体能量代谢和转换的中枢器官 线粒体是体内中 、
长链脂肪酸 氧化的核心细胞器 , 其在代谢脂肪酸的
过程中产生大量 , 为 合成的主要细胞器
含量决定了细胞对应激的反应能力 , 如果其含量降
低 , 会导致细胞对应激的反应不足 , 引起肝脏的严重
损伤 , 因此组织中 水平是反映组织细胞功能状态
及其生命力的重要参数之一 〔’‘一 ” 〕 为此我们动态观察
了 大鼠模型肝细胞超微结构的改变 , 尤其是线
粒体形态的改变 , 并测定了肝脏 的含量 , 探讨二
者在 发病中的可能作用 电镜检查显示 ,
模型组肝细胞中充满大量脂滴 , 导致胞核移向细胞边
缘 , 伴肝细胞线粒体肿胀 、 变圆 、 体积增大 , 细胞内
膜靖粒部分脱落 随着造模时间的延长 , 肝细胞线粒
体损伤逐渐加重 , 造模 起部分线粒体内见类
圆形高密度沉积物 这与国外报道的 肝脏线粒体
损伤的程度相近 , 此时往往同时伴有线粒体 合成
酶亚单位减少 、 线粒体产生 增多等 一川
对肝脏 含量的测定结果表明 , 模型组
肝脏 储备降低 左右 进一步的相关分析显示 ,
实验大鼠体质量与肝脏 含量具有一定的相关性 ,
这主要见于正常对照组肝脏 , 而模型组则没有发现二
者之间具有相关性 这一结果与 一 〕
在 患者所得出的结果相似 , 作者发现正常人群
肝脏 储备与体质量指数 ,
关系密切 , 工越大 , 其肝脏 含量越低 而发生
后的患者 , 尽管肥胖 , 但其肝脏中 储备与
的负相关性不明显 , 这可能与 肝脏 储
备本身就减少有关 肝脏能量储备不足容易导致肝脏
对再次打击的耐受力降低 一 。 。 幻对
肝活检证实的 例 患者用果糖静脉注射诱发短暂
的中等度肝脏 耗竭 , 注射后 二者 含
量均降到最低值 , 时对照组 含量恢复到注
射前水平 而此时 组 含量没有恢复到注射前
水平 , 直到实验结束其与对照组恢复后的 含量相
比仍有显著的统计学差异 , 说明 患者肝脏遭受
中等度果糖注射应激后 , 其 储备恢复能力降低
作者同时发现对照组 储备恢复程度与 呈负相
关 , 提 示 肥 胖 者 肝 细 胞 对 应 激 反 应 能力 不 足
了 〕进行的实验发现脂肪肝大鼠肝
细胞线粒体上 一 , 合成酶的 一 , 催化亚单位较
对照组减少 , 其线粒体内 含量亦明显降低
对两组禁食 后 , 实验组的 一 , 亚单位较禁食前
一 一 世界华人消化杂志 年 月 日 第 卷 第 期
明显减少 , 而对照组无明显变化 , 说明 合成的
一 亚单位减少与肝脏 储备降低具有一定的相关
性
·
〔‘ 〕用 大鼠诱导的脂肪肝模
型进行缺血再灌注试验发现门静脉结扎 后 ,
对照组肝细胞 含量降低 , 而 大 鼠则高
达 , 恢复灌注 后对照组 含量恢复到
缺血前水平 , 而 。 。 大 鼠则有 只死亡 , 存活的
只其 含量明显低于基线时的水平 这些实验和我
们 的实验说明 , 脂肪变的肝脏的确存在 储备降
低 , 使肝脏耐受二次打击 如手术 、 缺血灌注损伤 、
禁食和果糖应激等 的能力降低 总之 , 我们的研究
结果
, 高脂饮食 大鼠存在肝脏肝细胞线粒
体结构的损伤和 储备的减低 , 并可能参与
的发生和发展
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范建高
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曾民德 非酒精性脂肪性肝病的分类及其诊断策略 中
华肝脏病杂志 一
中华医学会肝脏病学分会脂肪肝和酒精性肝病学组 非酒精性脂
肪性肝病诊断标准 中华肝脏病杂志 一
中华肝胜病学会肝纤维化学组 肝纤维化诊断及疗效评估共识
中华肝脏病杂志 加 一
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徐正婕
, 范建高
, 王国良, 丁晓东 , 田丽艳
, 郑晓英 高脂饮食致大
鼠非酒精性脂肪性肝炎肝纤维化漠型 世界华川肖化杂志
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