HPLC法测定硫酸氯吡格雷片的含量

研究论文 HPLC法测定硫酸氯吡格雷片的含量 艾又生1 徐楚鸿1 陈志祥2 陈华庭1 (1．华中科技大学同济医学院附属协和医院临床药学研究室武汉430022； 2．成宁学院药学院2000级实习生) 摘要目的：建立高效液相色谱法测定硫酸氯吡格雷片中氯吡格雷含量的方法。方法：采用HypersilC，8(300mm×4．6 mm，5Ixm)色谱柱，乙腈一O．01tool-L“磷酸二氢钠(65：35，磷酸调pH至3)为流动相，检测波长235am，流速1．0ml·rain～， 进样量20斗l。结果：在15～150Ixg·ml-1范围内线性关系良好(r=0．9996)，平均回收率为100．5％，RSD为1．o％(n=4)。结 论：该法操作简便，灵敏，准确度高，可作为氯吡格雷质量控制的方法。 关键词氯吡格雷；含量测定；HPLC 中图分类号：R 文献标识码：A 文章编号：1008-049X(2006)12·1100-02 DelerminationtheContentofclopidogrelinclopidogrelsulfatetabletsbyHPLC AiYoushen91，XuChuhon91，ChenZhixian92，ChenHuating‘(1．DepartmentofPharmacy，UnionHospital，TongjiMedicalCollege， HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan430022，P．R．China；2．XianningPharmaceuticCollege) ABSTRACTObjectlve：ToestablishaHPLCmethodfordeterminationthecontentofelopidogrelinelopidogrelsulfatetablets． Method：theHypersilC18column(300mmx4．6mm，5IJ,m)wasused，theaeetonitrile-0．01mol·L’1sodiumdihydrogenphosphate solution(65：35)(adjustpHto3．0withphosphoricacid)asmobilephase，theflowratewas1．0ml·min～，thedetectionwavelength was235am．Result：ThelinearrangeofclopidogrelWas15·150I．Lg·ml“(r=0．9996)，theaveragerecoveryWas100．5％withRSD 1．0％(n=4)．Conclusion：Themethodissimple，sensitiveandaccurate，itcallbeusedforqualitycontrolofthetablets． KEYWORDSClopidogrel；Contentdetermination；HPLC 氯吡格雷(clopidogrel)是一种血小板聚集抑制 剂，临床上用于治疗中风，心肌梗死，外周动脉疾病 等⋯，国内未见其制剂含量测定的相关报道。本文 建立测定硫酸氯吡格雷片含量的HPLC法，简便、快 速、准确。 1仪器与试药 岛津LC．10AT高效液相色谱仪，SPD—IOA紫外 检测器；N-2000双通道色谱工作站(浙江大学智能 信息工程研究所)；硫酸氯吡格雷对照品(Sanofi pharma提供，批号：200401231，含量99．6％)；硫酸 氯吡格雷片(75ms／片，批号0401023，0401024， 0401025)；乙腈为色谱纯；磷酸二氢钠、磷酸均为分 析纯；水为纯化水。 2方法与结果皿J 2．1 色谱条件 色谱柱：HypersilC18柱(300mm×4．6mm，5 斗m)；流动相：乙腈一0．01tool·L一磷酸二氢钠(65： 35，磷酸调pH至3)；柱温：35oC；检测波长：235 nm；流速：1．0ml·min～；进样量：20斗1。由图1可 知，在本色谱条件下，氯吡格雷保留时间为lo．7 min，峰形良好，无杂质峰干扰。 2．2线性关系试验 精密称取硫酸氯吡格雷对照品97．875mg(相当 尹7彻 衍—r了]7矿可砷 t(min) A —k—￡ t(mim t(min) B C A．空白对照B．对照品C．样品 图1硫酸氯吡格雷的HPLC色谱图 于氯吡格雷75ms)，置于50IIll量瓶中，用水溶解并 稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取1．0，2．0，3．0， 4．0，5．0，10．0ml置100ml量瓶中，用水稀释至刻 度，摇匀，进样20¨l，按上述色谱条件测定峰面积， 以氯吡格雷浓度对峰面积进行线性回归，得回归方 程为：C=6．8325×10～A一3．2144，r=0．9993，氯 吡格雷浓度在15～150斗g·ml一范围内线性关系良 好。 2．3精密度的测定 取硫酸氯吡格雷对照品溶液15斗g·ml～，按上 述色谱条件连续进样6次，测定峰面积，其RSD为 2．6％。 2．4稳定性试验 取供试品溶液(批号：0401024)，于室温下放置 24h，并分别于0，1，3，5，7，9，12，24h依法测定，测 得峰面积的RSD为0．8％，结果表明供试品溶液在 24h内稳定性良好。 万方数据 中国药师 2006年第9卷第12期ChinaPharmacist2006，V01．9，No．12 2．5重复性实验 取同一批号样品5份(批号：0401024)，按“2． 7”项下方法制备供试品溶液，进样测定峰面积，计 算含量，RSD为0．7％。 2．6回收率试验 精密称取对照品适量，按处方比例加入辅料，置 50ml容量瓶中，加水40ml，超声20min使溶解。加 水稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液1．0ml 转至100ml容量瓶，用水稀释至刻度。摇匀，取20 山进样，回收率见表1。 表1 回收率测定结果(n=5J 2．7样品含量测定 取硫酸氯吡格雷片20片，精密称定，研细，精密 称取适量(约相当于氯吡格雷75ms)，置50ml量 瓶中，加40IIll水【2】，超声20min，用水稀释至刻度， 摇匀，滤过，精密量取滤液1．oml至100ml量瓶中， 用水稀释至刻度，摇匀，精密量取20“l进样测定， 记录色谱图，以外标峰面积法计算含量。结果见表 2。 表2样品含量测定结果(n=5) 样品 标示量(％) 0401023 0401024 0401025 99．6 101．0 100．1 3讨论 对流动相优化选择，考察乙腈与纯化水不同配 比对氯吡格雷出峰时间的影响，发现增加乙腈比例 有利于缩短保留时间，当乙腈．水为65：35时，保留时 间在10min左右，能满足含量测定的快速要求．同 时也考察了流动相pH对拖尾因子的影响，发现减 小pH有利于消除拖尾，可能是因为酸性条件抑制 组分的解离，增加中性分子存在的几率，增加组分在 固定相中的溶解度，从而减少拖尾。当pH3时，拖 尾因子在0．95～I．10之间。 本法测定氯吡格雷含量专属性强，回收率高，结 果准确、灵敏j快速。为氯吡格雷的质量控制提供了 较好的含量测定方法。 参考文献 1袁静．氯吡格雷的药理学、临床疗效和耐受性[J]．中国临床药学 杂志．1999，8(4)：69-70 2 MihakosA．PanderiL．AvalidatedLCmethodforthedeterminationof clopidogrelinpharmaceuticalpreparations[J]．JpharmBiomedAnal， 2002，28(3)：431-438 (2005-05-18收稿2006-05-08修回) 抗肝纤饮对实验性肝纤维化大鼠TGF-既的影响 朱佑民 杨明炜 (华中科技大学同济医学院附属同济医院中西医结合研究所 武汉430030)苏全武 (湖北省随州 市中心医院) 摘要 目的：观察抗肝纤饮对实验性肝纤维化大鼠的防治作用，并探讨其作用机制。方法：48只雄性SD大鼠被随机分为 正常组、模型组、抗肝纤饮及秋水仙碱组，采用ih40％CCI。花生油溶液诱导大鼠肝纤维化模型。造模同时，各组分别灌胃给 予抗肝纤饮、秋水仙碱及o．9％氯化钠溶液治疗。于1l周末检测大鼠血清透明质酸(HA)、Ⅳ型胶原(c1V)、层粘蛋白(LN)、 血清转化生长因子131(TGF-131)的水平，检测肝组织TGF-pl阳性面积及TGF—BImRNA的表达水平。结果：与模型组比较，抗 肝纤饮组血清HA、C1V及TGF-Bl水平显著下降(P<0．叭或P