注射用白藜芦醇生物可降解缓释微球研究

注射用白藜芦醇生物可降解缓释微球研究 沈阳药科大学 硕士学位 注射用白藜芦醇生物可降解缓释微球的研究 姓名:王彦君 申请学位级别:硕士 专业:药剂学 指导教师:毛世瑞 20090501沈阳药科大学硕士学位论文 摘要 摘 要 在缓控释制剂中,高分子材料作为药物的载体具有极其重要的作用。尤其是 聚酯类 高分子材料聚乳酸羟基乙酸,???,,因其具有其他材料 无可比拟的优点,如生物可降解性,良好的生物相容性,使用安全以及可通过 改变 和单体比例和聚合条件来调节在体内的降解速度等优点,已成为缓释微球制 剂的优良载体材料。 本文以白藜芦醇为模型药物,以为载体,研究制备了注射用生物可降解缓释 微球,并对微球的体内外释药行为进行了较深入地探讨,研究了微球的粒径 和分 子量对微球体内外释药行为的影响。 本研究采用高效液相色谱法测定微球中药物含量以及药物从微球中的体 内外释放量。采用乳化溶剂挥发法制备了白藜芦醇缓释微球,以微球的包封率、 载药量和突释作为质量指标,通过单因素考察试验筛选微球的最优处方和制备工 艺。单因素考察结果表明,分散相/连续相体积比、浓度、理论载药量、搅拌速度、 浓度等均是影响微球性质的关键因素。 在微球的体外释药研究中,以.%十二烷基硫酸钠作为释放介质,采用直 接释药法对目标粒径为.的微球进行体外释药行为的研究。结果表明浓度、理 论载药量、搅拌速度、浓度是影响微球中药物释放的关键因素,药物从载药微球中 的释放主要以扩散机制为主。 采用小鼠皮下注射方式给药后定时测定药物在体内残留量的,深入研究了微球 粒径和聚合物分子量对白藜芦醇微球体内外释药行为的影响,并进行了体内外相关性 ??评价。结果显示,粒径为和.的低分子量载药微球,当以.%的 十二烷基硫酸钠水溶液作为释放介质进行体外直接释药时,可以建立良好的体内外相关 性:.?,.;:,... .,.。固定微球 的粒径为,研究了的分子量对微球体内降解行为的影响,结果表明,由高 分子量制备的微球的体内释放明显快于低分子量的微球,原因有待于进 一步阐明。 关键词:白藜芦醇;微球;聚乳酸羟基乙酸;乳化溶剂挥发法;体内外相关性沈 阳药科大学硕士学位论文. , .. , , ?/ . . ? . ? ., ./,, ..% ., . . . .. : . , . . . 。哪鼬 面删. .,间. 护... ? 仕圮。 。 。 。:;;?;/、? ;关于学位论文独立完成和内容创新的声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取 得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其 他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得任何教育机构的学位 或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均 已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名: 至’隽影 签字日咖罗年厂月『日学位论文版权使用授权书 论文《药物的脂溶性和粒径对微球在小鼠体内吸收的影响 》系 药堂 学院荭刻堂专业王廛叠作者姓名在沈阳药科 大学攻读博士口/硕士口学位而完成的作品。 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意 学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文 被查阅和借阅。本人授权沈阳药科大学可以将本学位论文的全部或部分内 容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存 和汇编本学位论文。 本学位论文属于 / 年解密后适用本授权书。 、保密匦在口三年/睡/ 、不保密彩弓枣影事 请在以上相应方框内打“ ‖ 日 作者签名: 月 砂隽影 日 导师签名: 月 ?,? 、,,,\ 强世叶沈阳药科大学硕士学位论文 刖茜 .注射微球给药系统 简介 微球是指药物溶解或者分散在高分子材料基质中形成的微小球状 实体,属于基质型骨架微粒】。可作为药物载体用于多种给药途径,如注射静 注、肌 注、口服、滴鼻、皮下埋植等。微球的粒径根据给药目的不同有较大的差异, 对皮下 和肌肉注射用微球,要求具有良好的通针性,一般在之间,理想情况直径应 小于,但动脉栓塞用微球直径可达几百微米,口服微球则更大。 微球是一类极具开发潜力的新型药物载体。与传统剂型相比,微球制剂的优点主要 在于【:.利用载体的包蔽作用,提高药物的稳定性、防止药物在体内失活;.使药物 浓集于靶部位,提高疗效,减少药物的毒副作用;.通过载体材料及制各技术的选择, 可实现药物在体内缓慢持续释放,提高疗效、减轻病人多次给药的痛苦、提高病人的顺 应性、减轻不适感;.掩盖药物的不良气味和口味;.除药物外,可将活细胞、疫苗等 生物活性物质包埋于体内,不易引起活性损失和变性;保护多肽、蛋白类药物避免酶 的破坏。因其制剂具有的独特优势,已经被用于包括蛋白质‘、多肽【】、胰岛素‘、激 素【】等多种药物的传递系统研究,在药剂学中应用日益广泛,有望广泛应用于临床。微 球给药系统的载体材料按来源可分为天然高分子材料明胶、海藻酸盐、壳聚糖、蛋白 类、淀粉等、半合成高分子材料甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素等和合成高分子 材料聚丙烯酸树脂、聚乳酸羟基乙酸等【。在合成高分子材料中,因聚乳酸羟基乙 酸具有生物相容性好、生物降解可控且降解产物毒性低、缓控释等优点,受 到制剂研究者的青睐。 .聚乳酸羟基乙酸 聚乳酸羟基乙酸,???,】是一种重要的生物可降解 性合成高分子材料,具有无毒、易于合成、质量稳定、生物可降解性、降解速度可调节 性及良好的可塑性等优点,因此作为微球缓控释系统的骨架材料受到广泛的关注?们, 特别在埋植用微球领域得到了广泛研究。微球控释系统适用于半衰期短或口 服生物利用度低而又需要长期使用的药物,其优势是可在几周或几个月时间内以一定速 率释放药物,维持有效血药浓度,减少药物的给药次数,因此增加了病人的顺应性,提高 了治疗效果,减少了用药的总剂量。对于需要长时间体内持续给药的药物,微球 沈阳药科大学硕士学位论文 前言 缓控释系统是相当理想的载药系统。 .. 的性质 聚乳酸羟基乙酸是乳酸与羟基乙酸以不同比例嵌段共聚而成。结构式见 .,理化性质如 所示。相对分子质量是通过链转变试剂乳酸的多少来控制的, 不同组成比例的聚合物,其内在粘度从.~. ?不等。通过分子排阻色谱技术可 测 定聚合物的相对分子质量,和可以测定其构成比【】。聚合时使用的单 体比例不同可得到多种产品,比例不同的共聚物结晶度不同,其结晶度总是 低于均聚物。 药剂学中常用的比例~有:/、/、/,/。一般情况下, /的比例不同,自身降解的速度也不同。乳酸比例高的聚合物与乳酸比 例低的聚合物相比,降解相对较慢【。这是由于聚合物中乳酸基团的甲基 支链在空间上阻碍水合作用发生的缘故,此外甲基基团还影响聚合物的疏水 性和润湿性 。 副。不同比例自身降解时间见 的末端基团有酯基和羧基两种形式,其中含羧基基团的降解较快,因为 羧基末端促进了聚合物的自动催化降解。 , 无定型聚合物 分子量 ~万 .,. 粘度/范围 ? 玻璃化转变温度 共聚物的性能变化范围 宽,从硬质玻璃态到柔软、可成型材料 易溶于二氯甲烷、三氯甲烷、二甲基甲酰胺、二甲亚砜等有机溶剂, 溶解性 不溶于醇、酮、醚等有机溶剂,也不溶于水 在体内生物相容性好,降解产物乳酸和羟基乙酸可参与人体的新陈代 生物相容性 谢,最终形成二氧化碳和水被排出体外一 ,, ‖ ~。 ?/ .. 微球的降解动力学 生物可降解性高分子,其降解机制主要有两种:一种为裂解,属于化学反应.足由 高分子化学键断裂造成的,主要表现为分子量的减少;另一种为溶蚀,是一种物理现象, 主要由溶解以及扩散的速率决定的。一般认为生物医用可降解高分子两者都会发生,主 要取决于化学组成与结构的不同【”。其中,聚合物的溶蚀又具有两种不同的机制:表面 和本体或均质的溶蚀 或非均质的溶蚀 ,表面溶蚀是聚合物降解速度比水侵入聚合物本体的速度快,因 此聚合物降解主要发生在聚合物的外层,溶蚀仅在表面发生而不进入骨架内 部。相反, 本体溶蚀降解缓慢,水渗透作用 占主导,因此整个体系快速与水结合, 聚台物链断裂,本体溶蚀不被聚合物的表面所限制。因为具有较少活性官能团的聚合物 发生的是本体溶蚀,所以本体溶蚀通常被认为是以、、为代表的脂肪族 浆酯微球的降解机制?】。 日口‰ 。?沈阳药科大学硕士学位论文 前言 微球的降解过程,被认为经历个连续的阶段:水渗透作用、初期降解、进 一步降解和溶解。在水渗透阶段,水性介质渗透进入聚合物骨架,使聚合物变疏松, 减小;初期降解是通过酯键水解作用,在与水结合的区域发生,水解断裂聚合物链,使 分子量减小,水解和酯键断裂不断在聚合物骨架内发生,由于分子量减小,聚合物的机 械强度变小但聚合物仍保持其完整性;进一步降解阶段中,聚合物链不断的裂解,分子 量下降到一个临界值,直到聚合物不能保持其完整性,从此质量开始缺失;在溶解阶段 聚合物碎片开始进一步裂解为分子,在培养液中分解‘。影响微球降解的因素很 多,如聚合物的相对分子质量、/的比例、载入药物的酸碱性、微球的粒径、微球 微孔的大小等盼。 .. 微球的制备方法 目前乳化溶剂挥发法、相分离法、喷雾干燥法已成为微球制备的主要方法。其中相分离法适合于水溶性药物微球的制备,乳化 溶剂挥发法对水溶性、脂溶性药物均适宜。 ...乳化溶剂挥发法 此法又称液中干燥法,是将不相溶的两相通过机械搅拌或超声乳化先制备成乳剂, 为了形成微球,有机溶剂必须先扩散进入水相,然后在水/气液面挥发除去内相溶剂,当 溶剂蒸发时,逐渐析出成球材料,固化成微球,经过过滤和干燥后,得到具有良好流动性 的微球。根据药物性质的不同,采用乳化溶剂挥发法制备微球的具体方法也不同。主要 包括一步乳化法和复乳法。目前,包埋脂溶性药物微球的制备主要采用厂一步乳化法 ,其工艺流程如下: 含有药物和的挥发性有机相含乳化剂的水相?苎重型塑丝专用型乳状液 ?鱼型鳖篷型型堕丛马微球混悬液?堕坚』垫塑鸟干燥微球 一步乳化法制备微球需要注意解决在制备过程中,药物微球表面析出结晶、突释效 应等问题。此外还有学者【采用/一步乳化法制备载药微球,借此改善包封率、载药 量和突释情况,结果显示此方法制备的微球对亲水类药物有高的包封率和高的载药量, 并且使突释时间明显变短。 包埋水溶性药物微球的制备主要采用//复乳法之?,蛋白、多肽类载药微球多 采用此法制备。其工艺流程如下: 沈阳药科大学硕士学位论文 前言 含药溶液固态药物含的挥发性有机相?重型型马// 型乳状液?塑塑壁尘专含乳化剂的水相??专////型乳状液 ?壹型鳖竖墅彗型型屿微球混悬液?堕垒』塑立塑骂干燥微球 采用乳化溶剂挥发法制备微球的过程影响因素较多,如药物性质、固化时间、搅拌 方式和速度、内外相溶剂的性质和体积比、乳化剂类型和浓度、载体浓度、理论载药量 等等。此法的优缺点有学者进行过详细论述】。 ...相分离法 首先溶解在有机溶剂氯甲烷、乙酸乙酯、甲苯等中形成溶液,药物溶 解或分散在此溶液中形成凝聚核,然后将药物.聚合物.溶剂体系加入到凝聚 剂硅 油、蔬菜油、轻质液体石蜡、低分子量的液态聚丁二烯等中,在搅拌情况下,使 溶解度降低而析出,沉积于凝聚核表面。沉积.溶解.沉积过程在搅拌下不断进行并且形 成了软的载药团聚体液滴,然后将这个体系转移到另一个非溶剂一般为脂肪族碳水化 合物,如己烷、庚烷和石油等中,固化形成微球【抛。 此方法存在的主要问题是需要大量的有机溶剂,且操作繁琐。一般具有生物活性的 多肽、蛋白质类药物选用此法制备。 ...喷雾干燥法 此法又称液滴喷雾干燥法,药物通过溶解或以小颗粒分散的方法载入已溶解了高分 子材料的低沸点的溶剂中,然后将此溶液或混合液经蠕动泵输送到喷嘴,在压缩空气的 作用下形成雾滴,同时干燥室内用向上流动的热空气或氮气使雾滴快速蒸发,即得微球 】。本法喷雾一步成球,简便快捷,且药物几乎全部包裹于微球中,是微球工业化生 产最有前途的方法之一。此法制备的微球多孔,粒径相对较小,但是药物释放快,很难 达到较长时间的控释作用,适用于固态或液态药物微球的制备。 .. 微球的表征 ...微球的载药量和包封率 微球的载药量和包封率采用紫外分光光度法【和高效液相法等进行测定,然后由 计算得出。包封率与制备工艺、聚合物本身性质有关。 微球的载药量%鬈辈名裟×。。% 前言 沈阳药科大学硕士学位论文 药物的包封率%磊×。。% ...微球的形态测定 通常采用光学显微镜或扫描电子显微镜观察微球的形态。其中最常用的是扫描电子 显微镜】,扫描电子显微镜可以直观、清晰地观察微球的表面形貌。 ...微球的粒径测定 微球粒径的测定方法有多种,常用校正过的带目镜测微仪的光学显微镜测定【】,也 可用库尔特粒度仪‘或动态激光散射仪‘冽进行测定。得到粒径分布图并计算跨距。跨距 是反映粒径分布的一种指标,跨距越小表示粒径分布越窄,粒子分布越均匀。 %%/% 式中%、%、%分别指%、%、%的粒子其粒径均小于该值所示的粒径。 .. 微球中药物的释放行为 一般认为,药物从微球的释放经历个阶段:由表面键合和包封不完全的 药物经由聚合物骨架的孔隙和裂痕扩散.引起的初级释放;因聚合物的缓慢降解, 骨架渗透性增大,使微球内部的药物以扩散占主导的缓慢释放;聚合物溶蚀占主导 的“第二次突释”。释药机制主要是通过药物扩散出聚合物骨架或聚合物骨架的溶蚀引起 的,大多数药物的释放过程是扩散和溶蚀相结合,因此药物的释放主要由释放介质的物 理化学特性和聚合物性质两个因素决定,但药物释放还受到多种因素的影响,如制备方 法、释放介质、药物性质、载体性质等。有学者对影响药物释放的因素进行了综述【。 .. 微球的研究现状 目前一些微球商品已获得批准上市,如公司生产的奥曲肽微 球,公司生产的肌肉注射亮丙瑞林微球 等,详见表 。微球制剂技术和理论研究已成为现代药剂的研究热点,应 用前景十分广阔。/沈阳药科大学硕士学位论文 前言 .. 微球存在的问题 目前为止,和缓释微球制剂上市品种较少,主要原因是和 缓释微球制剂在制备工艺上存在很多问题【。如:和的价格昂贵,国内的 品质和国外的有较大差异;微球的制备工艺比较复杂,影响因素较多,且不易灭菌, 存在稳定性和重现性差等问题,所以工业化困难,大多数微球的制备仅停留在实验室范 围内;突释问题,较低的载药量、包封率和产率,以及内在蛋白、多肽类药物的不 稳定性问题;制备过程中均使用有机溶剂,所以选用毒性低、污染少且残留合格的 溶剂是制备微球的关键。随着制剂技术的不断更新,上述问题有望得到解决,将会有更 多的和作为载体的微球制剂上市。 模型药物简介 白藜芦醇,又称芪三酚,是一种含有芪类结构的非黄酮类多酚化合 物。广泛存在于种子植物中,已在种植物隶属个科,个属中被发现,其中在虎 杖根、葡萄、花生中分布较多。这种多羟基芪物质是植物在外来病菌侵入、紫外线照射 等不利因素影响下,产生的一种植物抗毒素,对植物本身起保护作用,同时对人体也具 有抗癌、抗心血管疾病、抗突变、抗菌、抗炎、抗氧化、诱导细胞凋亡及雌激素调节等 多方面有益于人类健康的生物药理活性【。 年,等在杂志上对白藜芦醇 在癌症的始发、促进及发展阶段表现出的抑制作用进行了系列报道,从而使白藜芦醇成 为癌症化学预防和化学治疗领域的一个研究热点。作为一种肿瘤化学预防剂,白藜芦醇 沈阳药科大学硕士学位论文 前言 在癌的起始、促进、进展三个主要阶段均起抑制作用【、。因此,作为一种理想的天然 化疗药物,将有希望用于肿瘤临床治疗。 .白藜芦醇的理化性质 白藜芦醇化学名为,.,一三羟基二苯乙烯.’一, 为无色针状结晶,分子式为,分子量.,结构有顺式和反式两种嘻,其 中,反式异构体的生理活性强于顺式异构体,为稳定结构。白藜芦醇熔点为?, ?升华。白藜芦醇难溶于水,易溶于乙醚、氯仿、丙酮、四氢呋喃,在甲醇、乙醇、 丙醇中微溶,且随着醇溶剂碳数的增加,溶解度减少【】。在 的紫外光照射下能产 生荧光,并能与三氯化铁一铁氰化钾起显色反应【】。 . . . .药物动力学特点 白藜芦醇口服给药后,在体内代谢成水溶性的反式白藜芦醇..葡萄糖醛酸苷 . 一和反式白藜芦醇一.硫酸酯盐 ....,白藜芦醇的半衰期短?而其代 谢产物的半衰期却为.。白藜芦醇体内分布广,单剂量给予雄性小鼠被放射性 标记的反式白藜芦醇.后,通过放射自显影研究发现,白藜芦醇 在胃、肝、肾、肠、胆等组织都有分布,其中在胃、肝和肾中分布的最多九。还有文献 报道白藜芦醇的生物利用度低,研究中以兔血浆的静脉和口服作为生物利用度的评价指 标,计算生物利用度仅为.%,而且数据显示白藜芦醇快速达到血药浓度峰值,且半 衰期短,清除快【。 立题依据 近年来,恶性肿瘤引起的死亡率仅次于心脑血管疾病引起的死亡,成为了严重危害 人类健康第二大常见疾病和多发性疾病,引起了医药领域和社会的广泛关注。在肿瘤治 疗中,药物治疗是当今临床治疗肿瘤的重要手段。但抗癌药物的细胞毒性对正常细胞和 癌细胞缺乏选择性,导致了抗癌药物严重的毒副作用,限制了其在临床的应用。因此提 高药物的靶向性是提高化疗效果、降低药物毒副作用的有效手段之一。缓控释微球可以沈阳药科大学硕士学位论文 前言 在一定程度上提高化疗药物的靶向性,减少药物的毒副作用,并通过选择生物可降解载 体材料,实现药物在体内缓慢持续释放,提高疗效,减轻病人多次给药的痛苦,提高病 人的顺应性,减轻不适感;且降低用药剂量,明显降低药物的毒副作用,提高药物的治 疗指数。 白藜芦醇因其半衰期短.,生物利用度低等缺点阻碍了其充分发挥抗肿瘤 作用,限制了其临床应用。此外,白黎芦醇水不溶性的物理化学性质使其普通制剂难以 通过口服给药途径在体内发挥其良好的生物活性。无毒、生物可降解,并且可在 几周或几个月时间内以一定速率释放药物,维持有效血药浓度,减少药物的给药次数, 提高病人的顺应性。所以本课题选择白藜芦醇作为模型药物,研究了微球的相关 性质,包括制备工艺的筛选和优化,微球的粒径、表面形态、包封率、载药量等,同时 优化制备了两种不同粒径、两种不同分子量的微球,研究了其在小鼠体内的药动学行为, 阐明了微球的粒径、载体分子量对药物体内释药行为的影响,并对其体内外相关性进行 了评价,对白藜芦醇的进一步开发和利用具有十分重要的意义。 研究内容 本文分为以下五个部分进行研究 .第一章白藜芦醇的处方前研究 .第二章白藜芦醇缓释微球的制备及表征 .第三章白藜芦醇微球的体外释药行为研究 .第四章粒径对白藜芦醇微球体内外释药行为的影响 .第五章聚合物分子量对白藜芦醇微球体内外释药行为的影响 沈阳药科大学硕士学位论文 第一章白藜芦醇的处方前研究 第一章白藜芦醇的处方前研究 药物制剂的处方前研究工作在处方设计和产品开发中为选择最佳剂型、工艺条件和 质量控制提供依据,使药物不但能保持其物理化学和生物学的稳定性,而且使制剂获得 较佳的疗效。目前已经报道的白藜芦醇分析方法有液相色谱法【郴】、./、 固相萃取高效液相色谱法【、气相法【。高效液相色谱法以经典液相色谱为基础,具 有选择性好、灵敏度高、用样量少、分析速度快及应用范围广等特点,作为 一种高效、 快速的分离分析技术,目前已在生物医药分析领域得到广泛应用。因此,本文综合文献 报道选择方法对白藜芦醇体内外的药物含量进行测定。并根据药物性质、剂型和 工艺的不同,测定了白藜芦醇在不同条件下的稳定性和溶解性等,为处方设计打下 了良好的基础。 仪器与试药 高效液相色谱仪;检测器:检测器:工作站: 色谱工作站;色谱柱: 幸. ;色谱柱预柱: .率.,;?离心机上海手术器械厂; 漩涡混旋器上海精科实业有限公司;恒温水浴振荡器数显.上海跃进医 疗器械厂。 色谱纯甲醇山东禹王实业有限公司;二氯甲烷,天津市博迪化工有限公 司;十二烷基硫酸钠,;反式白藜芦醇纯度.%批号 西安冠宇生物技术有限公司。 方法 . 法测定白藜芦醇含量 ..色谱条件‘ 木.衄 色谱柱:;保护柱:.. ;流动相:甲醇一水体积比为:;流速:. /;检测波长: ;进样量:止;柱温:?。 ..专属性 将/的液与空白微球经含量测定相同步骤处理后的溶液按前述色谱条件 进样,记录色谱图,确证方法的专属性。沈阳药科大学硕士学位论文 第一章白藜芦醇的处方前研究 ..标准曲线的绘制 精密称取干燥至恒重的白藜芦醇置于容量瓶中,用甲醇使溶解,并稀 释到刻度,摇匀,作为白藜芦醇标准储备液。精密量取储备液用甲醇分别稀释成浓度为 .、.、.、、、、./的系列标准液。分别精密吸取上述溶液.注入 色谱仪,记录峰面积。以峰面积值对浓度进行线性回归,得回归方程,并绘制标 准曲线。 ..精密度考察 在线性范围内取浓度为./、/、/的白藜芦醇标准溶液,分别 在日内重复测定次,并连续测定天,根据外标法计算白藜芦醇的浓度,求算日内、 日问的相对标准偏差。 ..回收率考察 按照载药微球处方量,在容量瓶中分别加入精密称取的高、中、低三组干燥 至恒重的白藜芦醇和空白微球,加入.二氯甲烷使空白微球全部溶解,再 加入甲醇至刻度沉淀载体材料。白藜芦醇的理论浓度分别为.、、./。 离心取上清液,采用法在处测定其吸收峰,外标法求出测定浓度,以测 定浓度与配制浓度之比测定/配制计算回收率。 ..稳定性考察 取./、/、/标准溶液分别在配制后、、、、进样,记 录峰面积,计算。考察在避光条件下样品溶液的稳定性。 ..检测限和定量限 以信噪比为:时相应样品量确定检测限,以信噪比为:时相应样品量确定为定 量限。 .不同介质对白藜芦醇溶解度的影响 .. 对白藜芦醇溶解度的影响 采用平衡溶解度法测定对白藜芦醇溶解度的影响。将过量的白藜芦醇加入到 不 同..的醋酸盐缓冲液及.的氨.氯化铵缓冲液中【】,涡旋后置于 恒温水浴振荡器中 。以为间隔时间多次取样,过滤,取续滤液并稀释至 适宜浓度进行测定,直至测定值不再变化。 沈阳药科大学硕士学位论文 第一章白藜芦醇的处方前研究 .. 对白藜芦醇溶解度的影响 将过量的白藜芦醇分别加入到含有.%、.%、.%、%、%、%的水溶液 中,涡旋后置于的恒温水浴振荡器中 恒温振荡。以为间隔时间多次 取样,过滤,取续滤液并稀释至适宜浓度进行,测定,直至测定值不再变化。 .不同介质对白藜芦醇稳定性的影响 .. 对白藜芦醇稳定性的影响 将不同..的醋酸盐缓冲液及.的氨.氯化铵缓冲液作为溶剂,制备 成一定浓度的白藜芦醇溶液,熔封于安瓶中,在、恒温箱中放置分别 于、、、、各取样一次进行含量测定。 ..在.%溶液中白藜芦醇稳定性的考察 将.%作为溶剂,制备成./的白藜芦醇溶液,熔封于安瓶中,在 恒温箱中放置 ,分别于、、、、、、、、各取样一次测定含量。 .体外释放度测定方法 ..专属性 将 /的标准液与空白微球经含量测定相同步骤处理后的溶液按前述色谱条件 进样,记录色谱图,确证方法的专属性 ..标准曲线的绘制 精密称取白藜芦醇对照品约.置于容量瓶中,用.%水溶液使溶 解,并稀释到刻度,摇匀,作为标准储备液。再配制成浓度为.、.、.、、、 、肛/的系列标准液。分别进样,以峰面积值对浓度进行线性回归,得回 归方程,并绘制标准曲线。 ..精密度考察 在线性范围内取浓度为./、./、/的白藜芦醇标准溶液,分别 在日内重复测定次,并连续测定天,根据外标法计算白藜芦醇的浓度,求算日 内、 日间的相对标准偏差。 ..回收率考察 按照载药微球处方量,在容量瓶中分别加入精密称取的高、中、低三组干燥 至恒重的白藜芦醇和空白微球,用.%溶液定容至刻度,使白藜芦醇的理 论值分别为.、、./,然后离心取上清液,采用法在处测定其吸沈阳药科大学硕 士学位论文 第一章自垂芦醇的处方前研究 收峰,外标法求出测定浓度,以测定浓度与配制浓度之?, 旬计算回收率。 ..稳定性考察 取 /、/、/标准溶液分别在配制后、、、、进样,记 录峰面积.计算。考察在避光条件下样品溶液的稳定性。 ..检测限和定量限 以信噪比为:时相应样品量确定检测限,以信噪比为:时相应样品量确定为定 量限。 结果与讨论 . 法测定白藜芦醇含量 ..专属性 将/的标准液与空白微球经含量测定相同步骤处理后的溶液按前述色谱条件 进样,记录色谱图,确证方法的专属性,结果见。 ?『 结果表明,空白微球对白藜芦醇的色谱峰无干扰,说明该方法的专属性较好。 ..标准曲线的绘制 . 以峰面积值对浓度进行线性回归,得回归方程: ?。 ,并绘制标准曲线。结果见 《/ . 结果表明,白藜芦醇甲醇溶液的浓度在.?/浓度范围内,其峰面积与浓 度线性关系良好。 ..精密度考察 由上表可见,白藜芦醇甲醇溶液的日内、日间精密度的相对标准偏差均小 于%, 说明用此方法测定样品中的白藜芦醇含量具有较高的精密度。 ..回收率考察 由上表可见,回收率实验结果表明,高、中、低三个浓度的回收率均符合微球 含量 沈阳药科大学硕士学位论文 第一章白藜芦醇的处方前研究 测定的方法学要求。 ..稳定性考察 由上表可见,白藜芦醇样品溶液避光条件下内稳定,在此时间内测定含量不 会影 响结果。 ..检测限和定量限 最低检测限为/,最低定量限/。 .不同介质对白藜芦醇溶解度的影响 .. 对白藜芦醇溶解度的影响 值对白藜芦醇溶解度的影响见.?。 由.可以看出,条件下白藜 芦醇的饱和溶解度随着的升高而降低,将与相应的白藜芦醇溶解度 的关系进行拟合,两者符合关系式:.. ...严。同 时,我们还观察到白藜芦醇在和时的溶解度达到平台期,之后随着增加 溶解度显著降低。这可能是由于随着溶液的升高,白藜芦醇逐渐被中和为游 离碱, 使其脂溶性增加。说明白藜芦醇溶解度具有依赖性。 ?钮 一,量品? 蚰 如.一 .. 对白藜芦醇溶解度的影响沈阳药科大学硕士学位论文 第一章白藜芦醇的处 方前研究 文献报道】十二烷基硫酸钠可以增加药物的溶解度,由于白藜芦醇是脂 溶性药物,所以考虑选用十二烷基硫酸钠水溶液作为释放介质。同时我们前 期研究工作 发现,?和?条件下,白藜芦醇在..的醋酸盐缓冲液及.的氨.氯 化铵缓冲液中降解较快,因此考察白藜芦醇在含有不同百分含量的水溶液中 的溶解 度。将白藜芦醇在不同百分含量的水溶液中的溶解度对的百分含量作 图,结果见.。 窒 ?? 呦? .由.可见,下白藜芦醇的饱和溶解度随着百分含量的增加而增加, 将的百分含量与相应的白藜芦醇溶解度的关系进行拟合,两者符合关 系式:.朋.。考虑试验需要满足释放测定的漏槽条件,故选择.% 的溶液作为释放介质。 .不同介质对白藜芦醇稳定性的影响 .. 对白藜芦醇稳定性的影响 研究了在不同温度条件下值对白藜芦醇稳定性的影响。将白藜芦醇在不同 .~.的醋酸盐缓冲液及.的氨.氯化铵缓冲液中的剩余百分含量对时间 作图,结果见..。 沈阳药科大学硕士学位论文 第~章白藜芦醇的处方前研究 ? 。 跗 邑 量 ? 口 营 柏 ? 邕 萝一甚誊盆蜃& 加 .,? 可见,在 由 条件下,白藜芦醇在不同.一.的醋酸盐缓冲液 及.的氨.氯化铵缓冲液中降解均较快。天内,白藜芦醇在.、.、 .的醋酸盐缓冲液及.的氨.氯化铵缓冲液中的剩余百分含量分别为.%、 .%、.%、.%。其中在.中降解相对缓慢,呈级降解,将时间 与相应的剩余百分含量的关系进行拟合,两者符合关系式: ...。 在?条件下,白藜芦醇在不同.~.的醋酸盐缓冲液及.的氨.氯化 铵缓冲液中的降解也较快,天内白藜芦醇在.、.、.的醋酸盐缓冲液 及.的氨.氯化铵缓冲液中的剩余百分含量分别为.%、.%、.%、.%, 说明随着温度的增加,白藜芦醇的降解加速。其中温度升高显著加速了白藜芦醇在 .的降解,?下白藜芦醇天的剩余含量相对于。的剩余含量减少了.%, 而对.、.、.的影响不大。同时研究发现,。条件下,天以后白藜 芦醇在.的降解比。条件下的降解速率加快,第天白藜芦醇基本降解完全。综 上所述,说明白藜芦醇不仅在醋酸盐缓冲液及氨.氯化铵缓冲液中不稳定,而且其降解 还受温度影响。与此同时,我们在前期研究工作中还考察了白藜芦醇在磷酸盐缓冲液【孤、 枸橼酸盐缓冲液,以及稀释倍的上述实验用醋酸盐缓冲液及氨.氯化铵缓冲液中的加 速稳定性。,发现白藜芦醇在后降解均完全数据略。所以,综合考虑不能采 用缓冲液作为微球的释放介质。 ..在.%溶液中自藜芦醇稳定性的考察 白藜芦醇在.%溶液中的稳定性见.?。由..可见,。条件下,在沈目药科大学硕?学位论空 第章自錾芦醇的垃方前研究 第、、白藜芦醇在.%水溶液巾的古量无明显变化,但是在第时白 藜芦醇含量下降到 %.直到第 含量基本没有显著下降,到时白藜芦醇 含量下降至%。由此结果显示,白藜芦醇在 %溶液中两天内稳定,所以释 放试验考虑每天更换新的释放介质进行测定。 一; ??? % 石.体外释放度测定方法 ..专属性 将舍有空白微球的 %水溶液与白藜芦醇在 %水溶液按前述色谱条件 一。 进样,也录色谱图,确证方法的属性,结果见 :‖ % .% 结果表明, %溶液和空白微球对白藜芦醇的测定无干扰,专属性较好。 ..标准曲线的绘制以峰面积值对浓度进行线性回归,得回归方程: ,并绘制标准曲线。结果见.?。,?????,?? 《 湖鲫枷枷咖啪鲫枷抛 咖 .% .? 结果表明,白藜芦醇在.%溶液中的浓度在./浓度范围内,其峰 面积与浓度线性关系良好。 ..精密度 .% 由上表可见,白藜芦醇在.%溶液的日内、日间精密度的相对标准偏差均小于 %,说明用此方法测定样品中白藜芦醇的释放度具有较高的精密度。 ..回收率实验 一.% 沈阳药科大学硕士学位论文 第一章白藜芦醇的处方前研究 由上表可见,回收率实验结果表明,高、中、低三个浓度的回收率均符合微球释放 度测定的方法学要求。 ..稳定性考察 .% 由上表可见,白藜芦醇样品溶液在避光条件下内基本稳定,在此时间内测定含 量不会影响结果。 ..检测限和定量限 最低检测限为/,最低定量限/。 结论 .本实验建立了高效液相色谱分析方法测定微球中的药物含量及药物在释放介质中 的释放量。方法分离效果好,灵敏度高、重现性好,回收率高,在一定浓度范围内具有 良好线性关系。 .本实验考察了白藜芦醇在不同介质中的平衡溶解度。研究发现白藜芦醇溶 解度具有 依赖性。并且在。下白藜芦醇的饱和溶解度随着百分含量的增加成幂增加。 .本试验考察了不同介质对白藜芦醇稳定性的影响。研究发现白藜芦醇的降解受 和温度的影响。白藜芦醇在.%溶液中两天内稳定。 本章小结 .建立了方法用于白藜芦醇微球的含量测定和释放度的测定。 .白藜芦醇溶解度具有依赖性。 . ?下白藜芦醇的饱和溶解度随着百分含量的增加成幂增加。 . 和温度影响白藜芦醇的降解过程。 .选择.%的水溶液作为释放介质。沈阳药科大学硕士学位论文 第二章白藜芦醇长效缓释微球的制备及表征 第二章 白藜芦醇缓释微球的制备及表征 目前以/为载体制备载药微球的方法主要有乳化溶剂挥发法圳】、相分 离法?,喷雾干燥法等。根据白藜芦醇为脂溶性药物这一特性,并综合考虑各制备 方法的利弊,选择/乳化溶剂挥发法制备白藜芦醇载药微球。同时,以微球 的包封率、载药量、突释和粒径作为微球的质量评价指标,研究了分散相/连续相体积 比、浓度、浓度、搅拌速度对微球性质的影响,并优化了白藜芦醇微 球的制各处方和工艺条件。 仪器与试药 高效液相色谱仪; ; 色谱工作站;.超低温冰箱 检测器; .,:.集热式恒温加热磁力搅拌器巩义市予华仪器有限公司; .冷冻干燥机日本东京理化器械株式会社; 扫描电子显微镜 ;激光粒度仪 .,。 聚乳酸羟基乙酸共聚物 :, ?,.,中国科 学院成都有机化学研究所;聚乙烯醇,日本可乐丽株式会社;反式白藜芦醇 纯度.%西安冠宇生物技术有限公司;十二烷基硫酸钠,;二氯 甲烷;甲醇等试剂均为分析纯。 方法 .微球的制备 采用乳化.溶剂挥发法制备载药微球】。按处方量精密称取和白藜芦醇,以 二氯甲烷作为有机相,一定浓度的水溶液为水相,在搅拌速度为 条件下, 将有机相缓慢注入水相中,控制乳化时间 。然后,将样品置于磁力搅拌器上, 匀速 搅拌 ,使二氯甲烷充分挥发后,离心分离载药微球,并用重蒸馏水洗涤三次 后,冷 冻干燥,即得白藜芦醇微球。 .微球的表征 ..微球包封率和载药量的测定 精密称取 涡旋,充分破坏微球结构,再加入甲醇定容 微球,加. 至 ,离心收集上清液,测定上清液中白藜芦醇的含量,应用下述公式计算微 球的沈阳药科大学硕士学位论文 第二章自藜芦醇长效缓释微球的制各及表征 载药量 和包封率 。 微球的载药量%,纂雩墨篙×,。。% 药物的包封率%燃×。。% ..微球粒径的测定 冷冻干燥后的微球用蒸馏水重新分散为混悬液,用激光粒度测定仪测定粒径 分布。 ..微球形态的测定 将冷冻干燥后的微球固定在导电胶上,置于真空条件下,喷上金粉。然后用扫 描电 子显微镜 在电子束强度为的条件下观察微球的表 面形态。 ..药物体外释放的测定 精密称取微球 ,将装有该混悬液的带 ,采用.%水溶液定容至 塞离心管置于?恒温水浴中水平振摇,速度 。在指定的时间点,离心分离微 球,取上清液,用法测定药物的释放度。并将微球重新用 新鲜介质混悬后, 继续进行释放度研究。采用下述校正公式计算微球的累计释放量。本实验采 用释放 量作为突释的评价指标。 肌 微球的累计释放量‘%’硒琢耳芴歪秀蔼厦×% ..差示扫描量热法 精密称取冷冻干燥后的微球.,放入坩埚中,以/从力热升温到 ?,由此分析推测药物在微球内部的存在状态。 ..数据处理 全部数据选用.统计软件包进行检验分析。各组数据用均值?标准偏差 ?表示,采用.评价整体性差异,.为有显著性差异。 结果与讨论 .分散相种类的考察 ..有机溶剂种类对白藜芦醇溶解度的影响沈阳药科大学硕士学位论文 第二 章白藜芦醇长效缓释微球的制备及表征 /乳化溶剂挥发法制备微球时,最理想也最常用的有机溶剂是二氯甲烷 ,但也可根据药物性质的不同而选用乙酸乙酯、丙酮【体,或者采 用混合溶剂【硒。我们首先研究了白藜芦醇在不同有机溶剂,如:二氯甲烷、 丙酮、乙 酸乙酯中的饱和溶解度。 将过量的白藜芦醇分别加入到二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮中,涡旋后置于的恒 温水浴振荡器中 恒温振荡。以为间隔时间多次离心后取上清液,用甲醇 稀释至适宜浓度进行测定,直至测定值不再变化。结果如..所示。 丢 ?, .。由..可见,白藜芦醇在不同溶剂中的平衡溶解度不同,溶解度情况如下:乙 酸乙酯./丙酮./二氯甲烷./。虽然二氯甲烷是 乳化溶剂挥发法制备微球时的最优溶剂,但是研究发现白藜芦醇在二氯甲烷中的平衡溶 解度最小,所以试验考虑采用二氯甲烷与乙酸乙酯作为共混溶剂进行下一步考察。 ..共混溶剂对白藜芦醇溶解度的影响 将过量的白藜芦醇分别加入到乙酸乙酯与二氯甲烷的共混溶剂中 ::、:、:、:、:,涡旋后置于。的恒温水浴振荡器 中 恒温振荡。以为间隔时间多次离心后取上清液,用甲醇稀释至适宜浓 度进行玎测定,直至测定值不再变化。结果如..所示。加他 眨 一?,?口磊 正钟: 枷队螂:?蚰峨 嘲 ., 由..可见,随着共混溶剂中二氯甲烷与乙酸乙酯的比例由:改变到: 时,白藜芦醇在二氯甲烷与乙酸乙酯共混溶剂中的溶解度由. /增加到. /。为了选择更合适的溶剂作为制备微球的内相,进~步考察了二氯甲烷与乙 酸乙 酯的共混溶剂比例对微球性质的影响。 ..共混溶剂对微球性质的影晌 , 固定理论载药量为%,.%的溶液 ,有机相体积为 ?浓度为%,搅拌速度 ,按“.”项下制备微球,研究二 氯甲烷与乙酸乙酯不同比例的共混溶剂作为分散相对制备微球性质的影响。 结果如 .所示。 / ?工沈阳药科大学硕士学位论文 第二章白藜芦醇长效缓释微球的制各及表 征 从上表可以看出,随着共混溶剂中二氯甲烷比例由增加到%,粒径没有显著 变化,但突释降低了.%。同时,研究还发现,共混溶剂中二氯甲烷所占比例从 提升到%时,载药量和包封率没有显著增加;但提升二氯甲烷比例到%时,载药 量和包封率分别增加到.%和.%;当比例提升到%时,载药量和包封率与% 的相比增加不明显,继续提升二氯甲烷比例到%时,载药量增加到.%,包封率 也增加到.%。由此看出,虽然白藜芦醇在二氯甲烷中的溶解度最小,但是制备的 微球包封率和载药量较高,相对于乙酸乙酯制备的微球突释小。所以综合考虑选用二氯 甲烷作为分散相制备微球。 .微球性质的影响因素考察 ..分散相和连续相比例的考察 分散相/连续相比例是制备微球的关键因素之一盼。所以固定理论载药量为%, 浓度.%,有机相体积为 ,?浓度为%,搅拌速 度 ,按“.”项下制备微球,研究连续相和分散相比例对制备微球性质的影 响。 / /工 从表中我们看出,当分散相/连续相体积比由:提升到:时,粒径增加一倍, 载药量和包封率显著降低,继续增加体积比到:,粒径和包封率没有明显变化。然而, 我们注意到,当分散相/连续相体积比为:时,虽然药物的包封率较高,但突释现象明 显,的药物释放量达到%,这可能是因为大量的白藜芦醇分布在微球表面引起的。 当该体积比由:提升到:时,突释降低了约%。之后继续增加相体积比,对突释 的影响不大,但药物的包封率显著降低。这可能是因为随着连续相体积的增加,会有更 多的药物溶解在外水相中。我们的前期研究也表明,当分散相/连续相体积比较小时,形沈阳药科大学硕士学位论文 第二章白藜芦醇长效缓释微球的制各及表征 成的微球孔隙率高,不利于控制药物的释放速度【】。综合考虑,选择分散相/连续相体 积比为:考察浓度和载药量对微球性质的影响。 .. 浓度的考察 固定理论载药量为%,有机相体积 ,.%的溶液 ,搅拌速度 ,按“.项下制备微球,研究.浓度%.% 的改变对微球性质的影响。 工 从表中我们看出,随着浓度由%增加到%时,粒径从. 增加到 .岫,突释降低了%,这可能是因为随着浓度的增加,形成的微球内部 结构更为致密,从而减少了药物从微球中的扩散速度【。研究中还发现浓度由 %提升到%时,载药量和包封率分别增加了%和%,这可能是因为随着有机 相粘度的增加,微球的内部结构更加致密,因此减少了药物在微球固化阶段 向外水相的 流失。但是,之后继续增加的浓度对载药量和包封率影响不大。浓度为 %和%时制备的微球,突释量没有显著性差异。综合考虑微球的载药量、粒径和 突释,选择的浓度为%考察载药量对微球性质的影响。 ..理论载药量的考察 载药量也是微球制备的关键因素之一,因为载药量可以改变药物在微球骨架中的分 , 布状态和释放情况【石】。所以固定有机相体积为 ,.%的溶液 .浓度为%,搅拌速度 ,按“.项下制备微球,研究理 论载药量%、%、%、%对微球性质的影响。沈阳药科大学硕士学位论文 第二章白藜芦醇长效缓释微球的制各及表征 ? 从表中我们看出,理论载药量由%提升%时,粒径在...破间变 化,说明载药量对粒径没有显著影响。. 也报道了相似的研究结果【?。当 载药量由%增力%时,虽突释量没有明显变化,但包封率从.%增加到. %。之后继续增加载药量到%,包封率却减少.%,这可能是因为高载药量形成 高浓度的白藜芦醇乳滴,使乳滴与水相之间产生高浓度梯度,从而在固化过程中使较多 药物释放到外水相中,引起药物损失【朋。但 的突释量却减少到.%,这可能是因为 在高载药量情况下白藜芦醇以结晶态嵌入在微球骨架内部,而在低载药量情况下药物在 微球内以分子状态分布,结晶型的药物比分子型的药物更缓慢地释放到释放介质中。 答 ..,.,.%? . ,.% ,.% , ,.% ,.% .% 研究结果.表明,和物理混合物相比,理论载药量为%的载药微球中沈阳药科大学硕士学位论文 第二章白藜芦醇长效缓释微球的制备及表征 出现了极弱的药物熔点峰,这说明大多数药物在微球中以无定型状态存在,有极少量以 微晶存在。但在理论载药量为%和%的载药微球中均出现了较强的药物熔点峰, 这说明随着载药量的增加,更多的药物在微球中以微晶存在。当载药量为%时,微球 的成球性不好,在显微镜下可观察到大量碎片。所以,综合考虑选择载药量为%考 察搅拌速度和浓度对微球性质的影响。 ..搅拌速度的考察 , 固定载药量为%,有机相体积为,.%的溶液 .浓度为%,按“.’’项下制备微球,研究搅拌速度、、 对微球性质的影响。 从表中我们看出,随着转速的增加,微球的粒径显著减小。当转速由 增 加到 时,微球的载药量和包封率没有明显变化,对突释也没有显著影响,但 是当转速增加到 时,包封率减少了%,突释量却增加了%。这可能是因 为随着搅拌速度增加,机械剪切力变大,使有机相以更小的粒径分散在水相 中被固化, 形成更小粒径的微球,从而增加了比表面积,使药物更容易释放到外水相中。 本文考虑 制备出粒径 的微球进行体内试验,所以选择 进一步考察浓度对微 球性质的影响。 .. 浓度的影响 在整个成球过程中不仅起到降低表面张力、乳化成乳和提高乳剂稳定性的作 用,还能够增加水相的粘度,对于形成之中和形成之后的微球都有助悬稳定 的作用,能 使微球在固化过程中充分混悬,防止发生粘连与沉积。所以固定载药量为%,有机相 体积为,.浓度为%,搅拌速度,外相体积为 。 ,按“.”项下制备微球,研究浓度对微球性质的影响,结果见 沈阳药科大学硕士学位论文 第二章白藜芦醇长效缓释微球的制各及表征从表中我们看出,浓度从.%增加到.%时,粒径没有明显变化,但包封率 从.%减低到.%,突释降低了.%。这可能是因为一方面,外水相中高浓度 的增加了药物的溶解度,在微球固化阶段引起了更多的药物流失,因此包封率降低。 另一方面,高浓度的有利于形成更稳定的乳剂,形成的微球结构更加致密,阻碍了 药物向外相的转移,使突释减少。相似的研究结果也有文献报道【。之后继续增 浓度到%时,包封率和突释量几乎没有变化。考虑到体内试验需要粒径符合要求,载 药量和包封率高的微球,选择浓度为.%的水溶液作为外水相。 .微球处方与工艺的确定及重现性考察 根据上述处方及工艺单因素考察结果,确定粒径为的白藜芦醇微球较优 处方和工艺为:有机相体积为 ,%,%,.%水溶液 , 搅拌速度为 。按最佳工艺处方制备三批微球,考察工艺的重现性,结果见 .。 等 由 可见,三批微球的载药量、包封率和释放度都无显著性差异,表明处 方与工艺重现性良好。 .微球外观形态的考察 采用扫描电镜观察微球的外观形态及表面特征,结果见.。 沈目科太《?学位论文 第章白藜芦醇长散缓释微球的制鲁及表? ?目酷, , 片显示白藜芦醇原料药为结晶型药物斗,而采用溶剂挥发法制备的 ?载药微球表面光滑致密,球形圆整且没有药物微晶体存在,表明药物已被包 ,。 裹在微球内部? .微球粒径的考察 采用激光粒度测定仪测定优化后微球的粒径,得到粒径分布目并计算跨距, 粒径分 ?所示。 靠图如 . 删删 。 , ”沈阳药科大学硕士学位论文 第二章白藜芦醇长效缓释微球的制备及表征 优化后制备的微球粒径为.,为.。 结论 .本章采用乳化溶剂挥发法制备了.缓释微球,确定粒径为白藜芦醇 微球的较优处方和工艺为:理论载药量为%,有机相体积为 , .浓度为%,.%水溶液 ,搅拌速度为 。 .采用单因素考察优化处方工艺条件,研究结果显示分散相/连续相体积比、 浓 度、理论载药量、搅拌速度、浓度等因素均是影响微球性质的关键因素。 .按优化处方制备的粒径为的微球外观圆整,包封率高,工艺重现性好。 .本章小结 .确定了粒径为的白藜芦醇微球的较优处方和工艺。 .分散相/连续相体积比、浓度、理论载药量、搅拌速度、浓度等均是影响 微球性质的关键因素。 沈阳药科大学硕士学位论文 第三章白藜芦醇微球的体外释放行为的研究 第三章白藜芦醇微球的体外