银杏叶提取物EGB对CCl4肝损伤小鼠的MDA含量以及SOD活力的影响生物本科毕业论文

银杏叶提取物EGB对CCl4肝损伤小鼠的MDA含量以及SOD活力的影响生物本科毕业论文 银杏叶提取物EGB对CCl肝损伤小鼠的MDA含量4 以及SOD活力的影响 摘要 目的:探讨银杏叶提取物EGB( 黄酮类) 对CCl肝损伤小鼠以MDA4 含量及SOD活力的影响，生产出一种有效保护肝脏的药物。方法:清洁级昆明种小鼠??兼用，随机分为空白对照组、吐温对照组、模型对照组、联苯双酯阳性对照组、实验组(银杏叶提取物低浓度、银杏叶提取物中浓度、银杏叶提取物高浓度)，用四氯化碳皮下注射法建立慢性肝损伤模型，分别用生理盐水或药物灌胃治疗。检测肝组织中脂质过氧化物丙二醛(MDA)的含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活力并加以探讨。结果:EGB能显著升高CCl所致急性肝损伤小鼠其SOD活力，4 并可显著降低该模型小鼠肝组织中MDA的含量。结论:银杏叶提取物( 黄酮类)对此模型小鼠的肝损伤具有显著的保护作用，可能与降低、抑制脂质过氧化反应以及抗自由基损伤有关. 关键词 银杏叶提取物; CCl肝损伤小鼠; MDA含量;SOD活力 4 Ginkgo biloba extract EGB CCl liver injury in mice on the MDA 4 content and SOD activity of Abstract Objective: To investigate the Ginkgo biloba extract EGB (flavonoids) on CCl liver injury in mice with MDA content and 4 SOD activity were to protect the liver to produce an effective drug. Methods: Kunming mice of clean grade ? ? altogether randomly divided into control group, Twain control group, model control group, DDB group, experimental group (low concentration of Ginkgo biloba extract, ginkgo biloba extract concentration, high concentrations of Ginkgo biloba extract), established by subcutaneous injection with carbon tetrachloride model of chronic liver injury, respectively, saline or drug the stomach. Detection of liver tissue malondialdehyde (MDA) content and superoxide dismutase (SOD) of the activity and to be explored. Results: The significant increase can only CClinduced acute 4 liver injury induced by the SOD activity, and significantly lower in the mice liver tissue MDA content. Conclusion: Ginkgo biloba extract (flavonoids) mouse model of liver injury have a significant protective effect may be related to decreased inhibition of lipid peroxidation and anti-free radical damage. Key words Ginkgo biloba extract; CCl liver injury in mice; MDA 4 content; SOD activity - 1 - 近几年来由于大量有害物质的产生，人们可能在不经意间，接触大量有害物质，例如CCL, CCL致急性中毒性肝炎、肝中毒四氯化碳进44 入肝细胞后，使线粒体膜的脂质溶解，从而影响线粒体的结构和功能，使酶蛋白质的合成减少，造成酶的破坏，因而影响代谢功能和能量的合成，致死。新观点认为细胞坏死的关键是由于四氯化碳抑制了细胞膜上钙泵活性，大量钙离子内流，堆积于细胞内的结果。此种动物模型可观察到急性肝炎的糖、脂肪、胞色素等方面的代谢障碍、肝解毒功能障碍，磺溴酚纳滞留血清，转氨酶明显升高，迅速出现营养不良、肝脂肪化变性及坏死等形态学变化。肝小叶中央坏死和肝细胞脂肪变性是其主要病变。 有一种阳性药联苯双酯，它是一种治疗肝炎的降酶药物，即可减轻因CCL所致的肝脏损害，对CCL所致的肝脏微粒体脂质过氧化，CCL44 4代谢为CO有抑制作用，对肝脏具有保护作用，虽治疗肝脏的药物很多，但效果不是很好。近几年国内外学者对银杏叶药理进行了大量的研究，银杏(Ginkgo biloba)系银杏科银杏属落叶乔木，为中生代孑遗的稀有物种，被称为被子植物的“活化石”是我国特有植物。20世纪以来，发现其主要药用成分为黄酮类和萜内酯类化合物。药理试验表明银杏黄酮类化合物有使冠状血管及其他血管扩张的作用。银杏黄酮有抗自 一一由基、抑制脂质过氧化作用。可直接清除0、.OH，捕捉脂化自由基、2 - 2 - 脂氧自由基和烷自由基等，通过对这些自由基起一种氢原子供用而终止自由基连锁反应链，从而阻止和抑制氧自由基反应和脂质过氧化的病理性加剧，减轻氧自由基和脂质过氧化损伤。推测EGB对肝损伤也有保护作用。本实验就是通过设计一系列的对比实验，研究EGB是否确实有此作用。 1材料与方法 1.1实验材料 1.1.1药物 1.1.1.1银杏叶提取物(黄铜类) 江苏同源堂生物工程公司 批号:老师帮填一下 临用时用0.1%吐温—80，蒸馏水配制成10mg/kg，40,mg/kg， 160 mg/kg低中高三个浓度。 1.1.1.2联苯双酯(15mg/丸) 浙江医药股份有限公司新昌制药厂 批号:080603 临用时用蒸馏水配制成0.12%混悬液取80丸*15mg/丸=120mg (120mg?100ml水=0.12%) 1.1.1.3 CCl北京化工厂提供 批号:080121 临用前用大豆油制成4 0.1%的四氯化碳油溶液。 1.1.2试剂 - 3 - ALT试剂盒 批号:20100316;AST试剂盒 批号:20100317;SOD试剂盒 批号:20100317;MDA试剂盒 批号:20100317，均为南京建成生物工程研究所生产。 总蛋白测定试剂盒 北京北化康泰临床试剂有限公司 批号:20091028 1.1.3实验动物 小白鼠 清洁级昆明种??兼用，体重24+2g，北京医学科学院实验动物研究所提供，许可证号:SCXK(京)2004-0001 1.1.4 仪器 1.1.4.1 电子称:ACS-A-JJ交直流电子计价秤，中航第一集团太原航空仪表有限公司生产。 1.1.4.2 721分光光度计，上海第三分析仪器厂生产。 1.1.4.3.HH-60数显恒温搅拌水箱，苏州威尔实验用品有限公司生产。 1.1.4.4 FZQ-2型漩涡混合器，竞速泰县医疗器械厂 1.1.4.5 电子天平，BP310P德国赛多利斯生产。 1.1.4.6 离心机(KDC-1044低速离心机)，科大创新股份有限公司中佳分公司生产。 1.2 实验分组与处理 1.2.1分组 1.2.1.1 空白对照组 1.2.1.2 0.1%吐温对照组 - 4 - 1.2.1.3 模型对照组 1.2.1.4 联苯双酯阳性对照300mg/kg 1.2.1.5 银杏叶提取物低浓度10mg/kg 1.2.1.6 银杏叶提取物中浓度40mg/kg 1.2.1.7 银杏叶提取物高浓度160mg/kg 1.2.2处理 3月15日，随即分为七组后，灌胃给药(0.25ml/10g体重)，空白对照组、模型组给予等量蒸馏水，吐温对照组给予等量吐温，连续灌胃七天，灌胃前称一次体重，灌胃后第二天再次称重，然后第四天三次称重，称重后，除空白对照组及吐温对照组外，各组动物均腹腔注射0.1%CCl溶液10ml/kg(取CCl30µl?30ml大豆油)，第七天灌胃给药44 后停食。16小时后解剖取出肝脏、脾。 1.3称肝脏、脾 脱臼处死小鼠，剖取肝脏、脾称重。 1.4肝组织中脂质过氧化指标及抗氧化活性的测定 1.4.1 MDA 含量测定方式 MDA 含量测定方式是在国内外众多测试方法的基础上改进的一种微量、快速、简便、准确、对操作人员健康无损害的测试方法。通过测试可反映出血清(浆)、乳汁等细胞外液、红细胞、白细胞、培养细胞以及各种动植物的细胞水平及亚细胞水平的脂质过氧化物的量。 - 5 - 1.4.1.1丙二醛(MDA)的测定意义: 机体通过酶系统与非酶系统产生氧自由基，后者能攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸(PUFA)，引发脂质过氧化作用，并因此形成脂质过氧化物。如:醛基(丙二醛MDA)、酮基、羟基、羰基、氢过氧基可内过氧基，以及新的氧自由基等。脂质过氧化作用不公把活性氧转化成活性化学剂，即非自由基性的脂类分解产物，而且通过链式或链式支链反应，放大活性氧的作用。因此，初始的一个活性氧能导致很多脂类分解产物的形成，这些分解产物中，一些是无害的，另一些则能引起细胞代谢及功能障碍，甚至死亡。氧自由基不但通过生物膜中多不饱和脂肪酸(PUFA)的过氧化引起细胞损伤，而且还能通过脂氢过氧化物的分解产物引起细胞损伤。因而测试MDA的量常常可反映机体内脂质过氧化的程度，间接地反映出细胞损伤的程度。 MDA的测定常常与SOD的测定相互配合，SOD活力的高低间接反应了机体清除氧自由基的能力，而MDA的高低又间接的反应了机本细胞受自由基攻击的严重程度，通过SOD与MDA的结果分析有助于医学、生物学、药理及工农业生产的发展。 1.4.1.2MDA试剂盒测试原理: 过氧化脂质降狗解产物中的丙二醛(MDA)可与硫代巴比妥酸(TBA)缩合，形成红色产物，在532nm处有最大吸收峰。 因底物为硫代巴比妥(TBA)所以此法称TBA法。 1.4.1.3测试所需仪器设备 - 6 - 可见光分光光度计，可调到95?左右的恒温水浴箱(或者铝锅内放几个去掉盖子的易拉罐，将罐壁及底部穿数十个孔，以便水的进入，用来代替水浴箱。)，离心机。 1.4.1.4 100T试剂盒组成与配制 1.4.1.4.1试剂一:液体20ml×1瓶，室温保存。(天冷时会凝固，每次测试前适当水浴加温以加速溶解，直至透明方可应用)。 1.4.1.4.2试剂二:液体12ml×1瓶，用时每瓶加340ml双蒸水混匀，4?冷藏(注意不要碰到皮肤上)。 1.4.1.4.3试剂三:粉剂×1支，用时将粉剂加入到90?-100?的热双蒸水60ml中，(在溶解过程中可适当加热)，充分溶解后用双蒸水补足至60ml再加冰醋酸60ml，混匀，配好的试剂避光冷藏。(冰醋酸自备注) 1.4.1.4.4品:10nmol/ml四乙氧基丙烷5ml×1瓶，4?冷藏。测试盒冷藏至少可保存一年。 [注]:冰醋酸又名乙酸，一般的医药公司、化剂公司均有售，要购AR级即分析纯级的乙酸较好，乙酸含量为99%以上。 1.4.1.5 50T试剂盒组成与配制: 1.4.1.5.1试剂一:液体10ml×1瓶，室温保存。(天冷时会凝固，每次测试前适当水浴加温以加速溶解，直至透明方可应用)。 1.4.1.5.2试剂二:液体6ml×1瓶，用时每瓶加340ml双蒸水混匀，4?冷藏(注意不要碰到皮肤上)。 - 7 - 1.4.1.5.3试剂三:粉剂×1支，用时将粉剂加入到90?-100?的热双蒸水30ml中，(在溶解过程中可适当加热)，充分溶解后用双蒸水补足至30ml再加冰醋酸30ml，混匀，配好的试剂避光冷藏。(冰醋酸自备注) 1.4.1.5.4标准品:10nmol/ml四乙氧基丙烷5ml×1瓶，4?冷藏。测试盒冷藏至少可保存一年。 [注]:冰醋酸又名乙酸，一般的医药公司、化剂公司均有售，要购AR级即分析纯级的乙酸较好，乙酸含量为99%以上。 1.4.1.6操作方法: 1.4.1.6.1操作表: 标准管 标准空测定管 测定空 白管 白管 10nmol/ml标准品0.1 (ml) 无水乙醇(ml) 0.1 测试样品(ml) 0.1 0.1 试剂一(ml) 0.1 0.1 混匀(摇动几下试管架) 试剂二(ml) 3 3 3 3 试剂三(ml) 1 1 1 50%冰醋酸 1 - 8 - 旋涡混匀器混匀，试管口用保鲜膜扎紧，用针头刺一小孔，95?水浴(或用锅开盖煮沸)40分钟，取出后流水冷却，然后3500-4000转/分，离心10分钟，(3000转/分以下离心时间需延长，目的使沉淀完全)。取上清0.1ml，532nm处，1cm光径，蒸馏水调零，测各管的吸光度值。 1.4.1.6.2参考取样量:血清(浆)取0.1-0.2ml。低密度脂蛋白悬液取0.1-0.2ml。食油取0.03ml,肝组织、心肌、肌肉组织、螺旋藻等，取5%或10%匀浆0.1-0.2ml较好。 1.4.1.6.3规范操作方法标准管吸光度:当标准品取样量为0.1ml时，则标准管吸光度减去标准空白管的吸光度为0.065-0.070。当标准品取样量为0.2ml时，则标准管吸光度减去标准空白管的吸光度为0.130-0.140。 1.4.1.6.4规范操作方法及简便操作方法中，若发现检测样本吸光度太低，可以将水浴时间40分钟延长至80分钟，但您的同一课题中MDA的检测都必须延长至80分钟，以免造成批间差异。 1.4.1.6.5计算公式: ?血清(浆)中MDA含量计算公式: 血清(浆)中MDA含量 测定管吸光度-测定空白管吸光度 (nmol/ml) = -------------------------------×标准品浓度 × 样本测定前 标准管吸光度-标准空白管吸光度 (10nmol/ml) 稀释倍数 - 9 - ?组织中MDA含量计算公式: 测定管吸光度-测定空白管吸光度 组织中MDA含量 = ———————————————×标准品浓度 ? 蛋白含量 (nmol/mgprot) 标准管吸光度-标准空白管吸光度 (10nmol/ml) (mgprot/ml) nmol/mgprot为纳摩尔/毫克蛋白 取上清100µl,测定MDA含量。 1.4.2 SOD活力的测定方法 1.4.2.1 100管试剂盒的组成与配制: 1.4.2.1.1试剂一:贮备液:10ml×1瓶(天冷时或放冰箱会有部分结晶析出，需热水浴溶解后再用); 试剂一应用液的配制:用时每瓶加蒸馏水稀释至100ml，4?保存6个月。 1.4.2.1.2试剂二:液体10ml×1瓶，4?保存6个月。 1.4.2.1.3试剂三:液体10ml×1瓶，4?保存6个月。 - 10 - 1.4.2.1.4试剂四:液体350ul×2支，4?保存不可冷冻;4号稀释液10ml×1瓶，4?保存6个月。 用时两者按1:14稀释，需多少配多少。配好的试剂四4?保存，不可冷冻。 注:所用吸嘴为一次性吸嘴。 1.4.2.1.5试剂五:粉剂×1支，用时加70?-80?热双蒸水75ml溶解后备用，若加热过程中水分 蒸发减少，此时必须用蒸馏水补充至75ml，配好后试剂避光4?冷藏6个月。 1.4.2.1.6试剂六:粉剂×1支，用时加蒸馏水75ml溶解后备用，配好后试剂避光4?避光冷藏3 个月。 显色剂的配制:按试剂五:试剂六:冰乙酸=3:3:2的体积比配显色剂，4?避光冷藏3个月。 1.4.2.2 50管试剂盒的组成与配制: 1.4.2.2.1试剂一:贮备液:5ml×1瓶(天冷时或放冰箱会有部分析出，需热水浴溶解后再用); 试剂一应用液的配制:用时加蒸馏水稀释至50ml，4?保存6个月。 1.4.2.2.2试剂二:液体5ml×1瓶，4?-10?保存6个月。 1.4.2.2.3试剂三:液体5ml×1瓶，4?-10?保存6个月。 - 11 - 1.4.2.2.4试剂四:液体350ul×1支，4?保存，不可冷冻;4号稀释液5ml×1瓶，4?保存6个月。 用时二者按1:14稀释，需多少配多少。配好的试剂四4?保存，不可冷冻。 注:所用吸嘴为一次性吸嘴。 1.4.2.2.5试剂五:粉剂×1支，用时加70?-80?蒸馏水37.5ml溶解后备用，若加热过程中水分 蒸发减少，此时必须用蒸馏水补充至37.5ml，配好后的试剂避光4?冷藏保存6 个月。 1.4.2.2.6试剂六:粉剂×1支，用时加蒸馏水37.5ml溶解后备用，配好后试剂避光4?冷藏保存6 个月。 显色剂的配制:按试剂五:试剂六:冰乙酸=3:3:2的体积比配显色剂，4?避光冷藏3个月。 1.4.2.3总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力的测定 1.4.2.3.1操作 总SOD(T-SOD)活力的测定: 试剂(ml) 测定管 对照管 试剂一(ml) 1.0 1.0 - 12 - 样品(ml) 0.05 蒸馏水(ml) 0.05 试剂二(ml) 0.1 0.1 试剂三(ml) 0.1 0.1 试剂四(ml) 0.1 0.1 用旋涡混匀器充分混匀，置37?恒温水浴40分钟 显色剂(ml) 2 2 混匀，室温放置10分钟，于波长550nm处，1cm光径比色杯，蒸馏水调零，比色。 1.4.2.3.2计算: 1.4.2.3.2.1血清(浆)、心肌灌流液、肾透析液、细胞培养液等总SOD活力计算: (1)定义:每亳升反应液中SOD抑制率达50%时所对应的SOD量为一个SOD活力单位(U)。 (2)血清(浆)、心肌灌流液、肾透析液、细胞培养液等总SOD活力计算公式: 总SOD活力= 对照管吸光度-测定管吸光度 反应体系的 样本测试前的 (U/ml) -------------------------?50%× 稀释倍数 × 稀释倍数 对照管吸光度 - 13 - 1.4.2.3.2.2组织匀浆中总SOD活力计算: (1)定义:每毫克组织蛋白在1ml反应液中SOD抑制率达50%时所对应 的SOD量为一个SOD活力单位(U)。 (2)计算公式: 组织匀浆中SOD活力 对照管吸光度-测定管吸光度 反应液总体积 (U/ml) = --------------------------? 50%×-----------------?组织中蛋 白含量 对照管吸光度 取样量 (mgprot/ml) 取100mg肝脏加1ml生理盐水，研制匀浆，离心3000转，20分钟，取上清30µl，测定SOD的活力; 2结果 2.1体重、肝重及脾重 组大 编 体重 体重 体重 肝重脾重 别 号 号 (g)3.16 (g)3.18 (g)3.21 (g) (g) 1 ?1 25 25 25 0.964 0.064 空 白2 2 17 18 22 0.741 0.093 对3 3 27 27 31 0.991 0.121 照 4 4 24 24 26 0.970 0.102 - 14 - 5 5 15 17 19 0.646 0.055 6 6 25 26 26 1.020 0.068 7 ?1 26 28 29 0.874 0.099 8 2 23 26 29 1.067 0.116 9 3 31 32 34 1.256 0.195 10 4 25 29 33 1.250 0.154 11 5 28 31 33 1.190 0.113 12 ?1 26 26 29 1.077 0.098 13 2 25 24 25 0.858 0.106 14 3 16 18 21 0.735 0.061 15 4 23 24 24 0.865 0.080 16 5 16 18 20 0.767 0.081 吐 17 6 21 23 26 0.908 0.053 温 18 7 23 20 对 19 ?1 31 33 35 1.420 0.126 照 20 2 22 26 27 1.116 0.150 21 3 30 33 36 1.383 0.092 22 5 29 31 33 1.126 0.089 23 ?1 25 25 26 1.007 0.106 24 2 22 24 25 0.990 0.038 模25 3 23 24 24 0.898 0.112 - 15 - 型26 4 27 28 30 1.070 0.130 对27 5 24 24 24 0.905 0.052 照 28 6 21 23 25 1.195 0.214 29 ?1 30 33 36 1.439 0.142 30 2 28 29 29 1.129 0.054 31 3 29 31 34 1.492 0.172 32 4 24 26 27 1.034 0.075 33 5 27 28 29 1.377 0.126 34 ?1 23 24 25 1.078 0.097 35 2 25 24 26 1.095 0.167 36 3 19 21 22 0.911 0.055 37 4 22 23 22 0.806 0.048 38 5 22 23 22 0.833 0.045 39 ?1 25 28 30 1.144 0.122 阳 性40 2 28 29 31 1.798 0.092 对41 3 28 30 31 1.428 0.199 照 42 4 30 33 34 1.270 0.129 43 5 27 29 30 1.414 0.133 44 ?1 24 23 24 0.831 0.145 45 2 25 25 25 0.977 0.114 银46 3 24 26 27 0.820 0.082 - 16 - 低 47 4 25 24 27 1.004 0.081 48 5 24 25 27 0.911 0.085 49 6 27 26 27 1.142 0.099 50 ?1 27 29 30 1.134 0.098 51 2 24 26 28 1.052 0.084 52 3 27 29 29 1.162 0.073 53 4 24 25 26 1.176 0.142 54 5 25 27 28 1.208 0.081 55 ?1 23 24 23 0.884 0.044 56 2 21 24 26 0.972 0.098 57 3 25 26 26 1.126 0.156 58 4 23 23 24 0.824 0.073 59 5 23 25 26 1.039 0.107 60 ?1 30 31 32 1.251 0.101 61 2 29 30 30 1.195 0.101 银 62 3 24 25 26 1.120 0.087 中 63 4 26 28 29 1.094 0.109 64 5 30 30 32 1.087 0.111 65 6 25 28 30 1.129 0.093 66 ?1 25 27 27 1.140 0.194 67 2 23 19 20 0.924 0.122 - 17 - 68 3 28 27 27 1.081 0.141 69 4 24 27 27 0.925 0.089 70 5 23 24 24 0.921 0.102 71 ?1 30 32 34 1.393 0.149 银 72 2 25 26 29 1.281 0.120 高 73 3 22 25 28 1.170 0.128 74 4 22 24 25 1.376 0.097 75 5 26 29 29 1.207 0.115 76 6 26 28 30 1.366 0.138 2.2小鼠肝组织中MDA含量的变化 组别 MDA(nmol?mg 性别 剂量 -1protein) 空白 — 2.71?0.15 吐温 0.1%Tween-80 2.05?1.15 ††,**模型 — 6.12?2.83 -1※雌 阳性药 30 mg?kg 3.14?1.32 -1※※GP 10 mg?kg 1.89?0.83 -1※※40 mg?kg 1.88?1.29 -1※※160 mg?kg 1.44?0.50 雄 空白 — 1.85?0.49 - 18 - 吐温 0.1%Tween-80 1.87?0.48 模型 — 3.05?1.85 -1 阳性药 30 mg?kg 2.54?1.39 -1GP 10 mg?kg 1.82?0.24 -1※ 40 mg?kg 1.27?0.32 -1160 mg?kg 2.32?1.13 EGB对CCl致急性肝损伤小鼠肝脂质过氧化产物的影响(n=5) 4 Effect of GP on lipid peroxidation (MDA) of hepatic tissue in mice with CCl-induced injuries. (n=5) 4 注:†为与空白对照组比较<0.05;††为与空白对照组比较<0.01; PP *为与溶剂对照组比较P<0.05;**为与溶剂对照组比较P<0.01; ※为与CCl模型组比较P<0.05; ※※为与CCl模型组比较44 P<0.01; 2.3肝组织中MDA含量的变化的结果分析 结果显示:雌性小鼠模型组与空白组相比较，模型组小鼠肝组织中MDA含量非常显著上升(P <0.01)。模型组与吐温对照组相比较，模型组小鼠肝组织中MDA含量非常显著上升(P <0.01)。 阳性组与模型组相比较，阳性组小鼠肝组织中MDA含量显著下降 (P <0.05)。低中高浓度的EGB与模型组相比较，EGB组小鼠肝组织中MDA含量非常显著下降 (P <0.01)。雄性小鼠模型组与空白组相比较，模型组小鼠肝组织中MDA含量无显著差异。模型组与吐温对照组相比较，模型组小鼠肝组织中MDA - 19 - 含量无显著差异。 阳性组与空白组相比较，模型组小鼠肝组织中MDA含量无显著差异。低中高浓度的EGB与模型组相比较，低高浓度的EGB组小鼠肝组织中MDA含量无显著差异，中浓度EGB组小鼠肝组织中MDA含量显著下降 (P <0.0,)。 2.4小鼠肝组织中SOD活力的变化 组SOD(U?mg 性别 剂量 -1别 protein) 空 — 330.57?26.79 白 溶 0.1%Tween-80 298.19?47.63 剂 模††,*— 213.05?7.85 雌 型 阳 -1※性30 mg?kg 292.99?50.11 药 -1※※GP 10 mg?kg 318.35?60.63 -1※※40 mg?kg 329.14?28.77 - 20 - -1※※160 mg?kg 377.93?36.99 空 — 303.94?20.93 白 溶 0.1%Tween-80 291.11?22.50 剂 模 — 272.63?34.92 型 雄 阳 -1 性30 mg?kg 318.65?53.09 药 -1GP 10 mg?kg 321.85?84.00 -1 40 mg?kg 336.68?11.66 -1※※160 mg?kg 409.64?25.21 EGB对CCl致急性肝损伤小鼠抗氧化活性的影响(n=5) 4 Effect of GP on antioxidation activity of hepatic tissue in mice with CCl-induced injuries. (n=5) 4 注:†为与空白对照组比较P<0.05;††为与空白对照组比较 P<0.01; *为与溶剂对照组比较P<0.05;**为与溶剂对照组比较 P<0.01; ※为与CCl模型组比较P<0.05; ※※为与CCl模型组比44 - 21 - 较P<0.01; 2.5肝组织中SOD活力的变化的结果分析 结果显示:雌性小鼠模型组与空白组相比较，模型组小鼠肝组织中SOD活性非常显著降低 (P <0.01)。模型组与吐温对照组相比较，模型组小鼠肝组织中SOD活性非常显著降低 (P <0.01)。 阳性组与模型组相比较，阳性组小鼠肝组织中SOD活性显著升高 (P <0.05)。低中高浓度的EGB与模型组相比较，EGB组小鼠肝组织中SOD活性非常显著升高(P <0.0,)。雄性小鼠模型组与空白组相比较，模型组小鼠肝组织中SOD活性无显著差异。模型组与吐温对照组相比较，模型组小鼠肝组织中SOD活性无显著差异。 阳性组与空白组相比较，阳性组小鼠肝组织中SOD活性无显著差异。低中高浓度的EGB与模型组相比较，低中浓度的EGB组小鼠肝组织中无SOD活性显著差异，高浓度EGB组小鼠肝组织中SOD活性非常显著升高(P <0.0,)。 2.5综合分析得出结果 联苯双酯阳性药是一种治疗肝炎的降酶药物，即可减轻因CCL所致的4肝脏损害，对CCL所致的肝脏微粒体脂质过氧化，CCL代谢为CO有抑4 4 制作用，降低MDA的含量，升高SOD活性。对雌性小鼠来说，低中高浓度的EGB，能非常显著降低CCl肝损伤小鼠的MDA的含量，提高CCl44肝损伤小鼠的SOD活性。对雄性小鼠来说，中浓度EGB能显著降低CCl4肝损伤小鼠的MDA的含量，高浓度EGB非常显著提高CCl肝损伤小鼠4 SOD活性。说明对雌性小鼠来说，低中高浓度的EGB比联苯双酯阳的 - 22 - 性药的效果显著，具有保护肝脏的作用。对雄性小鼠来说，中高浓度的EGB比联苯双酯阳性药的效果显著，具有保护肝脏的作用。 3讨论 本实验得出:对雌性小鼠来说，低中高浓度的EGB比联苯双酯阳性药的效果显著，具有保护肝脏的作用。对雄性小鼠来说，中高浓度的EGB比联苯双酯阳性药的效果显著，具有保护肝脏的作用。可能EGB对雌、雄性小数的治疗效果是一样的，可能由于某些原因导致不同，需要进一步研究。 我们发现, EGB的药理作用银杏(GinkgobilobaL)是我国特产的古代孑遗植物之一，中医药中常用银杏种子。近年来，银杏叶标准提取物在欧洲被用作药物，在美国被用作食物添加剂而在世界范围内被广泛应用。我国的银杏叶制剂于二十世纪七十年代应用于临床， EGB是富含生物类黄酮的植物提取物，有抗氧化和基因调控作用。银杏叶中所含化学成分相当复杂，包括黄酮类、菇类、生物碱、多糖、酚类和氨基酸等。黄酮类和菇类酷是发挥其独特药理活性的有效成分，且是银杏叶及其中间品和植物药制剂质量标准化的重要依据，其余70%成分为药效不明显或非药物部分。本实验所采用的银杏叶提取物中含总黄酮类物质>24%，含菇内酷>6%，符合EGB的质量标准。 研究发现，本实验在CCL腹腔注射同时给予小鼠按EGB10mg/kg、4 40mg/kg、160mg/kg灌胃，对CCL腹腔注射引起的肝损伤有保护作用，4 - 23 - 可使肝组织中丙二醛(malondiadehyde，MDA)含量降低，SOD活力升高，且EGB对肝损伤的保护作用与剂量正相关。EGB应用安全，长期应用未见明显副作用。较单纯给予CCL腹腔注射的小鼠明显减轻。 4 目前,研究发现几乎所有的临床和实验性慢性肝病中均发现氧化应激存在,且常伴有抗氧化能力降低,如过氧化脂质积聚,抗氧化酶活性下降,因此,脂质过氧化被认为是发生肝脏炎性损伤的主要原因，而抗氧化剂治疗可预防(减轻) 这种症状。本实验中CCl诱导的慢性肝损4 伤小鼠肝组织中SOD活性明显降低,MDA 含量明显升高,但银杏叶提取物( 黄酮类) 预防组SOD活性明显升高,MDA 含量明显降低,说明银杏叶提取物( 黄酮类)对肝脏的保护作用可能与其抗氧化性有关。银杏叶提取物( 黄酮类)中的主要成分是黄酮甙,其母核中含有还原性羟基功能基团,捕捉脂质过氧自由基、脂氧自由基和烷自由基等,通过对这些自由基起一种氢原子供体的作用而终止自由基连锁反应链,从而阻止和抑制氧自由基反应和脂质过氧化反应的病理性加剧,减轻氧自由基和脂质过氧化损伤。结合本文结果,我们认为银杏叶提取物( 黄酮类)是一个很有前景的保肝药物,值得进一步深入研究开发。 结论 1.小鼠以CCL腹腔注射1周，肝组织中MDA含量升高，SOD活力下降，同4 时改善肝功能。 2.连续使用EGB对肝功能和肝脏结构无明显影响; - 24 - 3.EGB可抑制CCL腹腔注射所致的细胞膜脂质过氧化，EGB长期应用可能4 提高大鼠肝脏抗氧化功能; 参考文献: [1]徐书云，广如濂，陈修.药理实验方法学.人民卫生出版社,2002年1 月第三版:1347. [2]于文涛等.. 银杏叶提取物预防大鼠酒精性肝损伤的机制研究.学 术期刊营养学报. 2005年2期. [3]陈梁，朱锦善，任建平. 柴胡疏肝散对四氯化碳所致大鼠急性肝损伤的防治作用.学术期刊中西医结合肝病杂志.2004年1期. [4]李素婷等. 黄芩茎叶总黄酮对CCL4小鼠急性肝损伤的保护作用.学术期刊 承德医学院学报.2003年4期. [5]刘彤云等. 雷竹笋汁对四氯化碳致大鼠急性肝损伤的防治作用.学术期刊医药导报.2004年2期. [6]冯端浩等. 四氯化碳致肝损伤对小鼠血清TNF-α IL-6的影响.学术期刊解放军药学学报. 2004年4 期. [7]潘京一等. 葛根-红景天口服液对四氯化碳诱发急性肝损伤的保护作用.学术期刊上海预防医学.2004年5期. [8]L oguercio C , Federico A. Oxidative st ress in vi ral and - 25 - alcoholic hepatitis J . Free Radic Biol Med , 2003 ,34 (1) :1 - 10. [9] Na ghii MR. Sulf ur mustard int oxication , oxidative st ress , and antioxidants J . Mil Med , 2002 ,167 (7) :573 - 575. [10]卢忠明. 银杏叶提取物药理作用的生理基础及其临床应用J . 广 西中医学院学报, 2001 ,4 :131 - 133. [11] Bridi R , Crosset ti FP , Stef f en VM , et al . The antioxidant activity of standardized ext ract of ginkgo biloba ( EGb761) in rats J . Phyt ot her Res , 2001 , 15 (5) :449 - 451. [12]陈 建,何 冰,刘新民,等. 银杏叶提取物治疗肺间质纤维化的 实验研究J . 中国中西医结合杂志, 2000 , 20 (6) :441 - 443. 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Free Radic Biol Med , 1997 , 22 (12) : 287 - 305. - 27 - 后记 2010年的1月，我开始了我的毕业论文工作，时至今日，论文基本完成。从最初的茫然，到慢慢的进入状态，再到对思路逐渐的清晰，整个写作过程难以用语言来表达。遇到困难，我会觉得无从下手，不知从何写起;当困难解决了，我会觉得豁然开朗，思路打开了;当论文经过一次次的修改后，基本成形的时候，我觉得很有成就感。同时，我也在思考，毕业论文的完成预示着什么,预示着我即将毕业，即将走出可爱的校园，开始我的又一个新的人生旅程。那么，我应该记下一些东西，对我的毕业论文做一个总结，划上一个完整的句号。 2010年1月1日，当我接到选题通知后，开始着手论文的准备工作。我主动找我的刘春卉老师商讨我的选题，及时沟通。通过老师的指导与帮助，在几个备选选题范围内确定了辐射研究这个领域，因为考虑到辐射研究涉及到许多先进的研究方法和设备，可以使自己的研究思路和技能得到提高。因此，我确定了要写《银杏叶提取物EGB对CCl4 - 28 - 肝损伤小鼠的MDA含量以及SOD活力的影响》, 并确定任务书。 在中医药研究所学习的时间里，我接触到一些前沿的科研方法、实验仪器，是在本科求学期间又一个充实、开阔眼界的阶段。研究所的左雅慧、王晓莉老师不仅在试验操作、专业知识给我以悉心的指导，而且给我树立了科研工作者不怕吃苦、乐于奉献的榜样。同时也感谢我的老师刘春卉为我提供了这样珍贵的学习机会。 毕业论文的整个创作过程，虽然辛苦，但很幸福。当然，至此，我知道这还不是整个论文的完成，还需要答辩，还要有答辩老师的提问与意见，我的论文才能最终定稿。因此，我还需要继续努力，好好准备答辩，认真检查我的论文，更好的完善。 - 29 - - 30 -