天麻素速溶片的溶出度测定
天麻素速溶片的溶出度测定
沈映冰1,陈 杰2,朱彩燕1,曾令杰3
(1. 中山大学附属第六医院,广东 广州 510655;2. 中山大学附属第一医院,广东 广州 510080;3. 广东药
学院中药学院,广东 广州 510006)
摘 要 目的:建立天麻素速溶片溶出度的测定方法。方法:采用浆法,转速为 50 r /min,介质体积是 900 mL测
定溶出曲线,以 C18为色谱柱,流动相为乙腈-0. 05 %磷酸水溶液(20∶ 80) ,检测波长为 220 nm,流速为 1. 0 mL /min,
柱温为 25 ℃,进...
天麻素速溶片的溶出度测定
沈映冰1,陈 杰2,朱彩燕1,曾令杰3
(1. 中山大学附属第六医院,广东 广州 510655;2. 中山大学附属第一医院,广东 广州 510080;3. 广东药
学院中药学院,广东 广州 510006)
摘 要 目的:建立天麻素速溶片溶出度的测定
。方法:采用浆法,转速为 50 r /min,介质体积是 900 mL测
定溶出曲线,以 C18为色谱柱,流动相为乙腈-0. 05 %磷酸水溶液(20∶ 80) ,
波长为 220 nm,流速为 1. 0 mL /min,
柱温为 25 ℃,进样量是 100 μL。结果:天麻素在 11 ~ 132 μg /mL(r = 0. 9997)浓度范围内与峰面积有良好的线性
关系,采用 pH 6. 8 磷酸盐溶液为天麻素速溶片溶出度测定介质。结论:该方法简便、准确、专属性强,可用于该制
剂的质量控制。
关键词 天麻素速溶片;高效液相色谱法;溶出度测定
中图分类号:R284. 1 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2012)04-0654-02
收稿日期:2011-12-19
天麻素是兰科多年生寄生植物天麻 Gastrodia e-
late Blume中的主要有效成分,天麻素具有多方面的
药理作用,可恢复大脑皮质兴奋与抑制过程间的平
衡失调,具有镇痛、安眠、抗癫痫等中枢抑制作用,能
增加脑血流量,改善椎基底动脉、小脑前下动脉、小
脑后下动脉、迷路神经动脉及内耳供血不足,保护神
经细胞,促进心肌细胞能量代谢〔1〕。临床上广泛用
于眩晕(美尼尔氏病、药性眩晕、外伤性眩晕、突发
性耳聋、前庭神经元炎、椎基底动脉供血不足等)、
头痛(血管性头痛、偏头痛等)、神衰、神衰综合征及
脑外伤性综合征等,效果良好;神经痛如三叉神经
痛、坐骨神经痛等均是难治疾病,天麻素对其也有较
好的疗效〔2〕。天麻素使用安全,不良反应低,在体
内不易蓄积,服用后不会影响第二天的工作及生活,
为一种治疗失眠、头疼等疾病的有效药物。本研究
将天麻素研制成速溶片,加快其溶出度,以期提高其
生物利用度与临床效果。
1 仪器与试药
Waters 型高效液相色谱仪(美国 waters 公司) ;
ZRS-8 型智能溶出测定仪(天津大学无线电厂)。
天麻素对照品(中国药品生物制品检定所,含
量测定用,批号:110807-200205) ;天麻素片(规格:
100 mg /片,广东药学院提供,批号:20110304)。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件及系统适应性试验〔2〕 色谱柱:
Waters C18(250 mm ×4. 6 mm,5 μm) ;流动相:乙腈-
0. 05% 磷酸水溶液 = 20∶ 80;流速:1. 0 mL /min;检
测波长:220 nm;柱温:25 ℃;进样量:100 μL。在此
条件下,供试品中天麻素峰能达到基线分离,理论板
数按天麻素峰计应不低于 2 000。
2. 2 线性关系考察 精密称取天麻素对照品
11. 11 mg置 10 mL 量瓶中,加入 pH 6. 8 磷酸盐溶
液稀释并定容至刻度,得浓度为 0. 1111 mg /mL 的
对照品贮备液。精密移取 0. 1、0. 2、0. 4、0. 8、1. 0、
1. 2 mL对照品贮备液置 10 mL量瓶中,加入 pH 6. 8
磷酸盐溶液稀释并定容至刻度,精密移取 100 μL注
入液相色谱仪,测定天麻素的峰面积,以峰面积为横
坐标,浓度为纵坐标进行线性回归,得回归方程为 y
=0. 034x + 1. 01 (r = 0. 9997)。
明天麻素在 11 ~
132 μg /mL浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2. 3 供试品溶液的制备 采用中国药典 2010 年
版二部附录溶出度测定法第一法即浆法,设转速为
50 r /min,溶出介质分别为水、pH 1. 2 盐酸溶液、pH
4. 0 醋酸盐溶液、pH 6. 8 磷酸盐溶液,在 5、10、15、
20、30、45、60 min 分别取样 10 mL 并同时补充等量
介质,采用 0. 45 μm 滤膜滤过,作为供试品溶液;精
密移取 0. 8 mL天麻素对照品贮备液置 10 mL 量瓶
中,加入溶出介质稀释并定容至刻度,作为对照品溶
液。精密移取供试品溶液、对照品溶液各 100 μL注
入液相色谱仪,测定天麻素的峰面积,以外标法计算
每个时间点天麻素的溶出量。
2. 4 专属性试验 称取处方中除主药外的辅料,
分别加入溶出介质水、pH 1. 2 盐酸溶液、pH 4. 0 醋
酸盐溶液、pH 6. 8 磷酸盐溶液溶解稀释成一定浓
度,滤过,取续滤液,精密移取续滤液 100 μL注入液
相色谱仪,结果显示,辅料在天麻素保留时间处并未
出峰,表明辅料、空白溶剂均对天麻素溶出度测定无
干扰,此法专属性强。
2. 5 滤膜吸附试验 分别取天麻素在水、pH1. 2
盐酸溶液、pH4. 0 醋酸盐溶液、pH6. 8 磷酸盐溶液溶
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解的对照品溶液,天麻素速溶片在水、pH1. 2 盐酸溶
液、pH4. 0 醋酸盐溶液、pH6. 8 磷酸盐溶液的溶出
液,取尼龙 6(孔径 0. 45 μm)作为过滤头,分别对天
麻素对照品溶液、天麻素速溶片溶出液作高速离心
(4 000 r /min,10 min) ,过滤弃去 2、4 mL 后取滤出
液,精密移取 100 μL 注入液相色谱仪,测定天麻素
的峰面积,观察同一浓度值峰面积的变化情况。
结果显示,在 4 个介质中天麻素的溶出液、对
照液,当过滤弃去 2 mL 时,峰面积与高速离心相比
偏差均小于 2%。表明与高速离心相比,此过滤头
对天麻素对照品溶液、天麻素速溶片溶出液过滤弃
去 2 mL后,没形成对主药的吸附影响。
2. 6 稳定性试验 分别取天麻素对照品溶液、天
麻素速溶片在各个介质中相当于完全溶出时 50%、
100%溶出量的溶出液,分别在 0、1、2、4、8、12、24 h
测定天麻素的峰面积,观察峰面积的变化情况。结
果显示,在 24 h内天麻素的峰面积与 0 h比较,其变
化均小于 2%,表明样品溶液在 24 h内为稳定。
2. 7 重复性试验 分别配制天麻素速溶片各个介
质中相当于累计溶出 50%、100%的溶出液,每个浓
度配制 6 份,测定其天麻素的溶出量。结果显示,2
个浓度中天麻素的溶出量相对标准偏差均小于
2%,表明此法测定天麻素溶出度重复性高。
2. 8 中间精密度试验 与重复性试验的仪器、时
间、操作人员不同,分别配制天麻素速溶片各个介质
中相当于累计溶出 50%、100%的溶出液,每个浓度
配制 6 份,测定天麻素的溶出量。结果显示,2 个浓
度中天麻素的溶出量相对标准偏差均小于 2%,每个
浓度与重复性比较,12个结果的相对标准偏差均小于
2%,表明此法测定天麻素溶出度的中间精密度良好。
2. 9 加样回收率试验 分别配制天麻素口腔崩解
片各个介质中相当于累计溶出 40%、80%、120% 的
溶出液,每个浓度配制 3 份,测定天麻素的溶出量,
计算其回收率,结果显示,天麻素在 4 个介质中 3
个浓度的回收率均在 95% ~ 105% 间,相对标准偏
差均小于 2 . 5%。
2. 10 耐用性测定 取天麻素溶出液,分别在改变
柱温、流速、流动相组成以及 pH 条件下,精密移取
100 μL注入液相色谱仪,测定各主峰面积,考察主
峰间的分离情况与拖尾因子。结果显示,在上述各
条件下,天麻素与相邻色谱峰均能达到良好的分离,
分离度均大于 2,拖尾因子均小于 2,符合测定的要
求,表明此法耐用性好。
2. 11 溶出曲线测定 分别取天麻素速溶片 6 片
(批号 20110304) ,按“2. 3”项下溶出条件,测定其
溶出曲线,结果显示,天麻素速溶片在 4 个介质中 5
min即达溶出平台。考虑到天麻素主要在小肠吸收,
为模拟其在体内的吸收情况,暂定天麻素速溶片的溶
出度测定可采用 pH 6. 8 磷酸盐溶液为溶出介质。
2. 12 溶出均一性试验 分别取天麻素速溶片 3
批,每批 6 片(批号 20110301、20110302、20110303) ,
按“2. 1”项下色谱条件,测定 pH6. 8 磷酸盐溶液中溶
出曲线,结果显示,天麻素速溶片在 pH6. 8 磷酸盐溶
液中溶出行为相似。
2. 13 溶出度指标制定 由“2. 11”项的试验结果
可知,天麻素速溶片在 pH6. 8 磷酸盐溶液中溶出 5
min 已达溶出平台,基本已全部溶出。为控制本品
质量,适当延迟溶出度取样时间及限度,初步确定为
15 min时溶出不低于 75%。
3 讨论
溶出度试验是为了模拟制剂口服后在体内的释
放情况。溶出试验应该尽量在生理条件下进行,以
用于解释制剂在体内的行为。
溶出度试验不仅具有为建立体内相关性而设立
的理念,且还已成为证明药物在体内释放的一种简
单、廉价而不失严谨的实验室检测方法。所以,测定
药物在多 pH 介质中溶出曲线,可指示出来源不同
的同一制剂的品质差异,从而为临床上疗效的差异
提供佐证。
紫外扫描图谱显示,天麻素在 220 nm 波长处
有最大紫外吸收,在该波长下处方量的空白辅料不
干扰测定,故采用分光光度法在 220 nm 作为天麻
素的溶出量测定波长,方法学考察符合要求。天麻
素在水、胃液、肠液中溶解度都很大,均符合漏槽条
件。且稳定性实验表明天麻素水溶液的稳定性可以
满足操作时间的要求。在方法学考察的基础上,确
定了天麻素制剂的释放度测定方法,为今后的处方
筛选和制剂评价奠定了基础。
本文采用水、pH 1. 2 盐酸溶液、pH 4. 0 醋酸盐溶
液、pH 6. 8 磷酸盐溶液为溶出介质,在 5、10、15、20、
30、45、60 min 测定其累计溶出率,得出天麻素速溶片
的溶出曲线。结果显示,天麻素速溶片在 4 个介质中
的溶出率在 5 min 时已达溶出平衡,为控制本品质量
以及考虑到工业生产的偏差,适当延迟溶出度取样时
间及限度,初步确定为 15 min 时溶出不低于 75%。
参 考 文 献
[1]岑信钊 . 天麻的化学成分与药理作用研究进展[J]. 中
药材,2005,28(10) :958-962.
[2]程刚,郝秀华,刘国良,等 . 天麻素在大鼠体内的药动学
研究[J]. 中国药学杂志,2003,38(2) :127-129.
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