苦瓜活性成分提取新工艺及其健康食品开发研究(可编辑)

苦瓜活性成分提取新工艺及其健康食品开发研究(可编辑) 苦瓜活性成分提取新工艺及其健康食品开发研究 分类号 密级 硕士学位 苦瓜活性成分提取新工艺及其健康食品 开发研究 .张中伟 指导教师姓名: 邀明要 塑援 垒金型堂堂跪 王运送 副数援生金型堂堂瞳 申请学位级别: 亟? 专业名称:营养与食品卫生学 论文提交日期:鱼生旦 论文答辩日期:年月 学位授予单位和日期: 直昌太堂 呈生旦 旦 答辩委员会主席 评阅人 二六年五月独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其 他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得南昌文学或其他教育机构 的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的志对本研究所做的任何贡献均 已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名: 签字日期: ,。同 沙一‘年月 张、中聿 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解南昌太学有关保留、使用学位论文的规定,有权 保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借 阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行 检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 保密的学位论文在解密后适用本授权书 学位碱文作者签名: 导师签名: 签字期: 年 月 曰 签字日期: 年 月 日 学位论文作者毕业后去向 工作单位: 电 话 通讯地址: 邮 编学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解 南昌大学 有关保留、使用学位论文的 规定,有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允 许论文被查阅和借阅。本人授权南昌大学可以将学位论文的全部或部分 内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段 保存、汇编学位论文。 保密的学位论文在解密后适用本授权书 导师签名:黝 学位论文作者签名: 张中易 签字日期: 沙占年月/日 签字日期:少。年月文日 学位论文作者毕业后去向: 工作单位: 电话: 通讯地址: 邮编:摘要 摘要 苦瓜 .原产亚热带,分布于热带、亚热带和温带。中 国传统医学认为,苦瓜性苦、寒,用于中暑发热、烦热口渴、痢疾、眼痛、痈 肿 和胃气痛。现代研究证实,苦瓜具有降血糖、抗肿瘤、抗艾滋病、抗氧化、 抗生 育、抗菌、抗病毒以及提高人体免疫性等药理作用。近年来,苦瓜成分和食 疗价 值研究成为新热点。苦瓜果实含苦瓜苷,是一谷甾醇一一葡萄糖苷和,一豆 甾醇二烯醇一一葡萄糖苷的等分子混合物。苦瓜皂苷是苦瓜中有效成分之一,具 有较高的药用和保健价值。苦瓜黄酮也是~种生理活性物质,具有多种药用保健 功能。苦瓜种植在我国历史悠久,地域广阔,原料易得,其生物活性物质的深入 研究和开发具有重要的理论和应用价值。 本文对苦瓜皂苷和黄酮提取工艺进行了优化,将超临界一萃取新技术首次 应用于苦瓜天然活性成分的提取中,可最大限度减小对有效成分的破坏,有选择 性地获得目标产物,提高纯度。同时建立了苦瓜皂苷和黄酮的分析方法,并对其 抗氧化功能进行了研究,在上述基础上研制了苦瓜冲剂和苦瓜含片两种健康食 品,为苦瓜皂苷和黄酮的药理活性、药效试验研究及天然健康食品开发提供了理 论与物质基础。现将主要研究结果概述如下: .采用乙醇回流法提取苦瓜总皂苷,以测得苦瓜样品中总皂苷含量为指标, 选用正交表对苦瓜总皂苷提取工艺进行研究。试验结果表明:提取温度, 提取时间对苦瓜皂菅的提取有显著性影响,固液比和乙醇浓度的影响不大,各因 素对提取效果的影响程度依次为:提取时间提取温度乙醇浓度固液比,所得 , 最佳工艺条件为:%乙醇水溶液为溶剂,固液比:,?回流提取. 重复提取次。在此条件下进行验证实验,苦瓜总皂苷含量高达.%以人参 皂苷计。 .将香草醛一高氯酸比色法用于苦瓜总皂苷测定。通过对比色条件进行优化 得到最佳条件:加热时间 ,加热温度?,显色剂用量. %香草 醛冰乙酸溶液。结果表明,该测定方法精密度高,在 内显色稳定,平均 %,为.%,操作简单,是一种快速测定苦瓜总摘要 加样回收率为 皂苷的有效方法。 .采用均匀设计来优化提取工艺,获得超声辅助提取苦瓜黄酮最 佳工艺条件为:乙醇浓度%,超声时间,固液比:,提取次数次。 试验结果证实了超声辅助提取苦瓜黄酮的可行性。 .络合法是使用最广泛的中草药、中药制剂总黄酮 类化合物的测定方法,本文将其应用于苦瓜总黄酮的测定。结果表明,该测定 方 法精密度高,重现性好,显色稳定,平均加样回收率为%,且操作简单,对 设备要求不高,是一种快速有效测定苦瓜总黄酮的好方法。 .首次将超临界一萃取技术用于苦瓜活性成分的提取研究。采用。 均匀设计对超临界一法提取苦瓜总皂苷和黄酮的工艺条件进行优化, 通过考察夹带剂无水乙醇用量、萃取温度、压力和萃取时间等影响因素,得 出苦瓜皂苷和黄酮的最佳提取工艺参数分别为:苦瓜总皂昔的最佳萃取条件: 压 力. 、温度.?、夹带剂用量 ;苦瓜总黄酮的最佳萃取条件: 压力. 、温度.?、夹带剂用量 。萃取时间均为 ,采用一 级分离,分离温度均为?。 .对苦瓜?萃取物采用气一质连用讧技术进行成分分析,确 定了亲脂性成分主要有十六碳二烯酸,十八烷三烯酸,环己胺,油酸,二十三烷。 .利用苦瓜的溶剂提取物和.萃取产物设计研苦瓜冲剂和苦瓜 含片两种新型健康食品。从产品的表观性质来看,以?萃取产物为原料 的苦瓜冲剂呈天然的淡绿色,松散性好,不易吸潮:苦瓜片剂颜色天然,但不够 ,光泽度也不够好,可能是在?萃取过程中溶有部分脂溶性成分, 均一 使造粒出现混合不均的现象,从而导致压片出现斑点。 .考察了苦瓜的溶剂提取物和?萃取产物及其产品的抗氧化性质, 结果表明,苦瓜提取物及其产品都具有一定的抗氧化能力,且随着提取物浓度增 加而呈增强趋势。超临界萃取产物及产品的抗氧化能力大致相同,说明. 操作条件温和,能最大程度保持各组分的原有特性。但苦瓜的醇提产物及产品抗 氧化能力有较大差距,可能是喷雾干燥温度过高导致生物活性物质的较大破坏。 说明超临界一:萃取技术用于天然活性成分的提取具有较大的优越性。摘要 关键词:苦瓜,总皂苷提取,皂苷测定,总黄酮,超声提取,黄酮测定 超临界一萃取,苦瓜健康食品,抗氧化 . ,? . , . ? ,? ,?,, , , , ,.,. ?? ,一 .. 一一 . . . . ? , ..? ,.,, . ,, .. : . . . . . ?. : %. , . . ,.%. .. . ? . ? .: %? . . % .%., .. . , . .: % . , ....? . ., . %.,? .. . . , , .? .。 . . .。.. . , , .. . , , . ,丽出. ? ?., . . ?. . , . .? ? ? 也? ? .,?, ? ..: ., , , , , ., ,?, 第一章绪论 第一章绪论 .苦瓜研究进展 ..苦瓜概述 苦瓜 ,别名锦荔枝、癞葡萄、?瓜,为葫芦科植物 苦瓜的果实,不仅有良好的食用价值,而且还有明显的药用功效,素有“药用蔬 菜”之称。苦瓜盼记载最早始于明代,《本草纲目》日:“去邪热,解劳乏,清心 明目。”苦瓜性苦寒,具有清热解毒,滋养强壮等功效【”。现代研究证实,苦瓜 具有降血糖、抗肿瘤、抗艾滋病、抗氧化、抗生育、抗菌、抗病毒以及提高人体 免疫性能等药理作用】因此,苦瓜可临床应用于糖尿病、艾滋病、痢疾的治疗。 另外苦瓜还具有清肝、抗衰老、护肤美容、减肥、消除口臭和青春痘、治疗便秘 等功能。近几年,随着对苦瓜研究的深入进展,人们对苦瓜的化学成分和药用价 值有了更加深刻的认识。 药材性状 鲜苦瓜呈纺锤形,卵形或长圆柱形,两端较窄,长~ ,直径.~ 。 外表绿色、黄绿色或带橘黄色,全体具钝圆不整齐的瘤状突起,质脆,易折断。 断面果皮部绿色,果瓤部呈黄白色。种子椭圆形,扁平,白色至淡棕黄色,较熟 者两端均具角状齿,包于黄白色至粉红色肉质的假种皮内,长~,直径.~ ,质柔软,气清香,味苦。 种类产地 苦瓜产地主要分布在广东、广西、福建、湖南、江西、四川、贵州等省区, 北方则极少。近年来,北方各省、区、市通过引种、育种也形成了一些地方品种。 苦瓜主要依采收期果实果皮的颜色分为绿色、绿白色和白色种类型。一般来说, 绿色和浓绿色果皮的苦瓜以华南栽培较多,较有名的有“江门大顶”、“湛油”等: 绿白色及白色果皮的苦瓜以长江流域及我国台湾省栽培较多,如“蓝山大白”、 “扬子洲”和“月华”等。因此苦瓜的品种类型分布按种植和消费习惯有明显的 地域性。第一章绪论 已知成分 苦瓜中富含苦瓜苷,黄酮,苦瓜素,还含一羟基色胺和多种氨基酸,如谷氨 酸、丙氨酸、一丙氨酸,苯丙氨酸,一氨基丁酸,脯氨酸,瓜氨酸,还有半乳 糖醛酸及果胶等。自上个世纪中叶以来人们对其化学成分进行了研究,已经分离 得到了三萜,生物碱,甾类化合物,三萜色素,脑苷,糖,蛋白质等近百个化合 物。 ..苦瓜的有效成分 ...苦瓜皂苷类 “皂苷”是广泛存在于地球植物界的一类非常复杂的有机化台物。现代分析 化学证实,苦瓜的果实含甾体皂苷、豆甾醇皂苷、苦瓜苷、,.豆甾一烯醇 及其葡萄糖苷。未成熟的果实含苦瓜皂苷、、、、、 ,尚含有内源性细胞分裂素:玉米素和玉米核苷。果实含苦瓜苷,是.谷甾醇 一一一葡萄糖苷和?,一豆甾二烯醇一一葡萄糖苷的等分子混合物。从种子中分 离出的成分有苦瓜苷、、、、、、、蚕豆苷、海藻 糖、甾醇苷等。常风岗【从苦瓜果实的乙醇提取物中首次分离出苦瓜素苷.、、 、胡萝甾醇,还有苦瓜苷、、、、蚕豆苷、甾醇苷等。 ...苦瓜黄酮类 绝大多数的植物都能够合 黄酮类化合物广泛存在于植物界, 成黄酮。从天然植物中提取出来的黄酮类成分是一类生理活性范围很广,值得开 发的生理功能物质。目前有关苦瓜黄酮的报道并不多见,只有华景清等【对苦瓜 果肉中黄酮进行了提取研究,采用分光光度法对苦瓜醇提液进行测定,发现在黄 酮的特征吸收波长 处有吸收,说明苦瓜中含有黄酮类物质。蔡健等‘也 从苦瓜籽中提取出了黄酮类物质。 ...植物胰岛素 据文献报道五,用醇、醚、纯碱等对新鲜苦瓜进行粗提,再经. 分离纯化,冷冻干燥,得到.%的白色植物胰岛素精品。 ...氨基酸,蛋白质,肽类 苦瓜中含有种氨基酸,如谷氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸等,其中 酪氨酸、组氨酸含量特别高,种必需氨基酸含量达%,但构成比例不理想,第一章绪论 赖氨酸、色氨酸及缬氨酸等含量相对不足‘。 目前,从苦瓜果实和种子中分离出多种蛋白质,其蛋白质为碱性多肽,由 种氨基酸组成。从种子中分离出的蛋白质有苦瓜凝集素 , 一苦瓜素 旺一苦瓜素?, 一,核糖体失活蛋白 ,苦瓜抑制剂 ?等‘。 ...微量元素 ,苦瓜中含有十多种人体必需微量元素,其中、、、、 文献报道七 、的含量较高。研究表明苦瓜中的微量元素是其促进机体生理功能,防治 某些疾病的重要物质基础。 ...有机酸类 苦瓜中含有多种有机酸‘】,包括?一桐酸、栝楼酸、丁酸、软脂酸、硬脂酸、 油酸、棕榈酸、月桂酸、肉豆寇酸、棕桐油酸及人体必需的脂肪酸、亚油酸、亚 麻酸等。 ..苦瓜药理学研究进展 ...降血糖作用 苦瓜的降血糖作用是其最重要的药理作用。目前,苦瓜降血糖机理的研究表 明,苦瓜降血糖的机理与刺激活性一细胞分泌胰岛素、类胰岛素作用及促进肝 糖元合成有关‘。 苦瓜中降血糖成分有多种‘”,主要为萜类、植物甾醇、甾体类和肽类等,还 可能广泛存在于生物碱及微量元素中。从苦瓜果实中提取的皂苷、蛋白质和植物 胰岛素对动物的血糖有显著的降低作用四。骆静等‘经研究发现苦瓜醇提物能 显著增加正常小鼠肝糖元的含量,并改善正常小鼠的糖耐量,能够显著降低链脲 佐菌素,明显降低四氧嘧啶糖尿病大鼠的血糖含量。 ...抗氧化作用 从植物中 肿瘤和心血管疾病的发生以及人体衰老等过程都涉及到氧化应激, 提取抗氧化活性成分已成为研究的热点。乔听等”对苦瓜抗氧化作用进行了初步 研究。研究结果表明:苦瓜果肉和苦瓜籽的乙醇提取液都有抗氧化作用,同时柠 檬酸对它们具有较好的增效作用。傅明辉口现将苦瓜提取液进行小鼠实验,测定提第一章绪论 取液对小鼠肝匀浆脂质过氧化的抑制作用,也发现苦瓜果肉及籽的提取液都有很 好的抗氧化作用。王先远等【】将苦瓜可食用部分经%乙醇水浴加热回流提取 得苦瓜皂昔,分别进行动物实验和体外实验,结果发现苦瓜皂苷能显著抑制剧烈 运动后各组织升高且有剂量效应,能显著升高各组织活力,还能明显升 高血清、肝脏中?活力,从而促进机体健康,有助于延缓衰老,是一种新 的来自天然食物的抗氧化剂。 ..抗艾滋病作用 苦瓜提取物可以抑制艾滋病的表面活性,选择性的杀死被感染的淋 巴细胞和巨噬细胞,使患者细胞数量显著上升,/比值较为正常‘。陈执 中研究证明了苦瓜提取物具有抗艾滋病作用。美国科学家发现苦瓜中含有抗艾 滋病毒的功能成分为苦瓜蛋白,它能够阻止艾滋病毒的合成,抑制艾 滋病病毒的感染和生长【】。 ...抗肿瘤作用 苦瓜也是一种抗癌防癌的保健食品。近年来,美国科学家发现苦瓜中含有某 将这种蛋白质注入动物体内具有刺激和增强动物体种生理活性的蛋白质‘, 内免 疫细胞吞食癌细胞的能力,它可同生物碱中的奎宁一起在体内发挥抗癌作用。苦 瓜种仁提取出来的一苦瓜素和一苦瓜素具有抗癌作用?们。【一苦瓜素能选择性 地杀伤绒毛膜癌细胞和黑色素癌细胞,而对肝癌细胞的作用不明显,它是通过抑 制肿瘤细胞的蛋白质合成而起到抗癌作用的;一苦瓜素能够抑制一亮氨酸、 一尿嘧啶和一胸腺嘧啶整合到人舌喉鳞状上皮细胞中。 ...抗生育作用 苦瓜汁具有较强的抗生育活性,其中分离出来的碱性蛋白质能抑制雄性小鼠 精子的发育。据报道九,苦瓜蛋白成分具有抗精子正常发育的作用,能使雄鼠睾 丸缩小,曲细精管生精上皮细胞受损,细胞内含量减少,给药组受孕率、产 仔率与对照组比较有显著差异.。 ..对免疫性影响 文献报道【】,苦瓜原汁能明显地提高正常小鼠和环磷酰胺所导致免疫受抑小 鼠的血清溶菌酶含量、血清血凝抗体滴度、白细胞吞噬活性和免疫玫瑰花形成细 胞的形成率。研究表明【,苦瓜提取液对正常小鼠的血清血凝抗体滴度、血清溶第一章绪论 菌酶的含量、血中自细胞的吞噬能力均有明显增强作用。说明苦瓜在特异性和非 特异性免疫两方面对正常小鼠的免疫功能都具有调节作用。 ...抑菌作用 王杰等【采用滤纸扩散法研究了苦瓜提取物和其不同溶剂萃取物的抑菌作 用及温度、值、紫外光等因素对其抑菌活性的影响。结果表明,苦瓜提取物 对细菌的抑制作用较强,其正己烷萃取物对酵母菌和霉菌有较好的抑制效果,苦 瓜提取物的抑菌活性具有很好的热稳定性和紫外光稳定性。文献报道口,苦瓜浸 出液对细菌和部分酵母的生长具有很强的抑制作用,但是抑菌的机理尚不清楚。 .植物皂苷和黄酮的提取和测定方法研究进展 ..提取方法研究 ...总皂苷的提取 “皂苷”是广泛存在于地球植物界的一类非常复杂的有机化合物。目前,对 植物中皂苷的提取常采用溶剂法,超声法,超滤膜法,大孑吸附树脂法,微波加 热辅助提取法,超临界一萃取法等‘。但对于苦瓜总皂苷的提取报道也只是 停留在对传统溶剂提取的层面上,鲜见先进新技术、新工艺应用到苦瓜皂苷的提 取的研究。陈勋等‘采用乙醇水溶液浸提,用大孔吸附树脂纯化,得到苦瓜皂苷; 崔恒林,徐斌等”以提取温度、浸泡时间、乙醇的质量分数和料液比为考察因素, 用正交设计对苦瓜皂苷的提取工艺进行了优化。孙磊‘也对乙醇提取苦瓜皂苷的 工艺进行了研究。 ....溶剂法 正丁醇提取法、甲 皂苷的提取方法按照其使用的溶剂不同一般可分为三种: 醇或乙醇提取一丙酮或乙醚沉淀法、碱液提取法。 正丁醇提取法是将植物有效部位用不同浓度的甲醇或乙醇冷浸萃取,提取过 滤后减压浓缩,必要时先用石油醚等亲脂性溶剂萃取,除去亲脂性杂质,然后再 用正丁醇溶解、萃取、静置,皂苷主要留在正丁醇相中,真空蒸千溶剂即可得到 粗制总皂苷。此法被认为是皂苷提取的通用方’法【引。崔恒林等鲫就是利用此方 法提取苦瓜总皂苷。 甲醇或乙醇提取一丙酮或乙醚沉淀法【是利用皂苷在醇中的溶解度较大,在第一章绪论 丙酮、乙醚中的溶解度小,而被沉淀出来获得皂苷粗提物。将提出的粗皂苷溶解 在少量甲醇或乙醇中,逐滴加入数倍体积的丙酮、乙醚或丙酮一乙醚:的混 合溶剂中,边加边摇匀,此时皂苷可成粉析出。 碱液提取法则是在粗皂苷的水或醇溶液中,加入中性醋酸铅溶液以沉淀酸 性皂苷,至不再有沉淀析出为止,滤出沉淀,滤液再加碱式醋酸铅以沉淀中性皂 苷,以后在水或稀醇溶液中按常规方法脱铅,滤出清液,减压浓缩至干,即得到 两部分总皂苷。 这些方法存在的共同缺点是真空干燥的能耗大,皂苷的得率较低,产品的纯 度不高。 ....超声法 超声提取技术主要是利用超声波的机械效应、空化作用及热效应加速植物有 效成分的浸出,另外超声波的次级效应,如乳化、扩散、击碎、化学效应等也能 加速欲提取成分的扩散释放并充分与溶剂混合,加快提取过程的进行,并提高药 物有效成分的提取率”。 邹静恂等‘】用超声波法从党参中提取党参皂苷,发现党参皂苷的提出率高于 常规法,粗品中纯度含量也高。宋小妹等实验证明超声法不但可以明显提高绞 股蓝总皂苷的提取率,还具有省时、节能等特点。 ....超滤膜法 超滤是利用超滤膜分离介质。料液以一定的压力和流量,以错流方式进行过 滤,使溶剂及小分子物质通过,高分子物质和微粒如蛋白质、水溶性高聚物、细 菌等被滤膜阻留,从而达到分离、纯化、浓缩目的最快的新型膜分离技术。。曹 万新,武丽荣等【删采用超滤膜法提取精制油茶皂苷,结果表明超滤膜法提取精制 油茶皂苷产品质量好,纯度高,生产成本比传统方法大大降低。 ....微波加热辅助提取法 利用微波强化固液浸取过程是颇具发展潜力的一种新型辅助提取技术。该技 术因具有选择性高、提取时间短、易挥发性成分的提取率高以及不需要特殊的分 离步骤等优点而广泛应用到天然产物的提取过程中‘”。 ,李琳等‘研究微波辅助水提取罗汉果皂苷的提取工艺,结果表明微 黎海彬 波辅助水提取法的罗汉果皂苷平均提取率比常规水提取法罗汉果皂苷提取率高第一章绪论 且时间大大缩短。高文等【】采用平行对照试验对比了水煮法与微波法在鲜苦瓜中 所提取苦瓜苷的总量,结果证明微波提取法明显优于常规水煮法。 ....大孔吸附树脂法 大孔吸附树脂是一类不含离子交换基团的交联聚合物,具网状结构和很高的 比表面积。与离子交换树脂分离原理不同,它本身具有的吸附性是由范德华引力 或产生氢键的结果,筛性原理则是由于其本身多孔性结构所决定的,是一种吸附 性与筛选性原理相结合的分离材料。常用型号有:一、一、一、 一、罐等,特点是吸附容量大、再生简单、效果可靠,尤其适用于苷类、 黄酮类、皂苷类、生物碱类等成分的提取分离及大规模生产”。金京玲等墚 用大孔吸附树脂法提取,并精制蒺藜总皂苷,所得产品纯度高,具有简便、快速 和安全的特点。说明大孔吸附树脂法有利于提高资源利用率,降低制剂成本和减 轻对环境的污染,适用于工业生产。 ....超临界.萃取法 超临界流体萃取是目前国际上最先进的物理萃取技术。超临界流体特 别是?萃取技术以其提取率高、产品纯度好、过程能耗低、后处理简单 近和无毒、无三废、无易燃易爆危险等诸多传统分离技术不可比拟的优势,年来 得到了广泛的应用,在食品工业中的应用正在不断扩展【。与传统提取方法相比, 用?进行植物有效成分的提取分离具有许多独特的优点。 .?萃取工艺简单,操作方便,物耗能耗小。而传统的萃取方法, 一般为蒸馏法或溶剂法,它们需经过多次的过滤和萃取,试剂的用量大。 .萃取能力强,提取率高。.技术的萃取能力取决于温度和压力的 控制,可以选择性地提取分离植物中的目标成分,这样就相对地减少杂质量,增 加有效成分的提取率,比传统方法更具优势。 .有效成分不易被破坏,较易发现新成分。.萃取由于临界温度低, 所以操作温度也低,相对于传统方法,能更好地保护植物中有效成分不受破坏, 这尤其适应于易氧化分解或易水解等活性成分的提取。 文献报道,葛发欢等【】采用?从黄山药中萃取薯蓣皂苷,与传统法 比较,收率提高.倍,生产周期大大缩短。又将之运用于柴胡皂苷的提取,弥 补了传统工艺因温度高、受热时间长而导致某些皂苷含量降低甚至损失殆尽的不茎二童塑堡 足【。 ...苦瓜总黄酮的提取 ....加热回流法 加热回流法主要以水、~%乙醇、碱性醇、石灰水、甲醇、丙酮等溶剂 为提取溶媒,加热回流温度为~?。回流提取次数为~次。黄阿根等【】 研究了荷叶黄酮的提取工艺,最终得出以%的乙醇水溶液为溶剂,固液比以 和:分两次浸提,沸点回流 ,浸出率最高。周文斌旧通过正交试验 : 对葛根黄酮浸取工艺进行了优化。研究表明影响葛根中黄酮类物质提取的因索 为乙醇浓度、温度、、浸提时间。用为,浓度在%以上的乙醇溶液, 在?下浸提 ,即可提得%的葛根总黄酮物质。 ....超滤法 超滤法是以外界能量为推动力,用高分子膜,凭借各组分在膜中传质的选择 性差异,对多组分流体物质进行分离、分级、提纯和富集的方法”。超滤技术的 主要特点是分离过程无相变化,耗能低,分离率高,药液温度?和 .时 提取得率高。用超滤法提取黄酮类物质时可以根据料液的要求来调节操作温度及 ,不仅可以把黄酮和其他固体杂质完全分离,而且把蛋白、胶体一同截留, 使滤液质量大幅提高】。 ....大孔树脂法 大孔树脂是近年来发展起来的一类有机高分子聚合物吸附剂,它具有物 化稳定性高、吸附选择性好、不受无机物存在的影响、再生简便、解吸条件温和、 使用周期长、宜于构成闭路循环、节省费用等优点,已经广泛应用于物质的分离 纯化,最近采用此法提高提取物有效成分的得率及其在体内的吸收效果‘”。 卢锦花等探讨了.大孔吸附树脂从银杏叶浸提液中提取分离黄酮类化 合物的因素,并确定了最佳提取条件。结果表明此法提取银杏叶黄酮产物纯度高, 收率高。 ....超临界一萃取法 ,随着超临界流体提毂技术的迅速发展,此技术在天然药用 近年来 植物有效成分提取中应用越来越广泛。游海等四采用.萃取的方法,研 究了从银杏叶中提取黄酮类化合物的最佳工艺条件。结果表明:在较低的操作压第一章绪论 力下可有效地提取出银杏叶中的黄酮类化合物,其中黄酮含量%以上,且银 杏叶中的有毒物质银杏酚酸的含量得到了较好的控制。 ....超声波提取法 刘祥义‘初步确定超声提取元宝枫叶黄酮的工艺参数为:超声波功率中档, 超声作用 ,叶:水:,提取次。研究结果表明:超声水提比常 规水提可以大量节省溶剂和提取时间,并得到较高的提取率。郭国瑞‘也曾用超 声波法提高了银杏叶中黄酮类化合物的提取率。 ....微波提取法 胡庆国采用微波法提取桑叶中黄酮类物质,其最佳工艺为:采用强度为 的微波处理 ,以%的乙醇水溶液为提取剂,提取时间为 。与 一般提取方法相比具有可以降低有机溶剂的浓度、缩短提取时间、提取率高的特 点。张梦军等‘寻找微波辅助提取甘草中黄酮的最佳条件,并对微波辅助提取法 和水提法进行对比研究。结果表明:微波辅助提取法提取率高,且提取时间大大 缩短,是一种适合甘草黄酮的提取法。 酶法 .... 王晓等‘采用酶法提取山楂叶中的总黄酮,实验确定的最佳提取条件为:酶 . 浓度为 /的纤维素酶和. /的果胶酶,酶解温度为。,提取 。与传统工艺相比,提取率提 温度为?,提取为.,提取时间为 高了.%,且提取条件温和。 ..测定方法研究 ...总皂苷的测定 皂苷的定量是皂苷研究利用中的一大难题。皂苷本身没有紫外吸收,无专一 性显色剂,直接测定的难度很大。以不同的测定方法得到的皂苷含量相差很大。 以高效液相色谱测定皂苷,只能以 的末端吸收作紫外检测,响 应值低,干扰严重,流动相梯度洗脱会引起剧烈的基线漂移。所以,以高效液相 色谱测定时仅能测定一种或几种皂苷的含量,测定总皂苷难度较大】。 薄层层析法也因为测定过程中多次分离操作和非特异性的显色方法使结 果偏低或偏高‘。文献报道,目前植物中总皂苷测定方法主要有紫外分光光度法、 薄层层析比色法等。第一章绪论 ....紫外分光光度法 谷利伟,谷文英等习将脱脂大豆样品的乙醇提取物以一大孔吸附树脂快 速纯化得到总皂苷,用香草醛一高氯酸体系显色后测定总皂苷含量,平均加标回 .%。陈勋】和孙磊用人参皂苷为对照品、崔恒林则以苦瓜 收率为 皂苷为对照品,用香草醛.高氯酸体系显色后选择最大吸收波长,测定苦瓜中 总皂苷含量。 ....薄层层析比色法 骆华星等‘删利用薄层层析比色法测定绞股蓝皂苷。将样品提取后,以硅胶 薄层板,苯:乙酸乙脂:为展开剂,用碘蒸汽显色,对照品用%磷钼酸. 乙醇液喷雾,烘烤显色,刮下斑点,用乙醇洗脱,然后加入香草醛.冰醋酸溶液 及高氯酸显色后,于 处测定吸光度,确定绞股蓝中皂苷含量。 ...总黄酮的测定 黄酮类化合物包括以黄酮为母核的一类黄色色素和黄酮的同分异构体及其 还原产物。由于各类黄酮物质的理化性质差别很大,因而检测手段也不可能统一。 据文献报导,有关总黄酮的测定方法‘】有:对照品测定法、金属离子络合法、高 效液相色谱法、荧光分光光度法,其他还有聚酰胺吸附法、近红外反射光谱法等。 ....对照品测定法 对照品测定法‘,即在对照品的最大吸收波长测定。李芙蓉等‘刀以芦丁为 对照品测定葛根中总黄酮含量,使黄酮类化合物与铝盐形成络合物在可见区能获 得稳定的特征吸收峰,然后进行全波长扫描,在芦丁的最大吸收波长 处 有吸收,测定吸光度。 ....金属离子络合法 此法多以、显色【 其原理是黄酮类化合物中的一羟基、. 羟基、羟基、羰基或邻二位酚羟基 与进行络合反应,在碱性条件下生 成红色络合物,在一定浓度范围内,其浓度与吸光度符合比耳定律,可进行比色 定量。隋焕平等‘分别用芦丁和槲皮素作为品,利用黄酮类物质在碱性条件 下与形成络合物这一性质,用比色法在最大吸收波长下检测芹菜提取物中的 总黄酮含量,结果表明,比色法测定芹菜提取物总黄酮简便可行,重现性好。魏 永生等四也用一一比色体系分光光度法测定提取物中的总第一章绪论 黄酮含量。 ....高效液相色谱法 高效液相色谱法多应用在银杏叶及其制剂总黄酮类化合物的测定 中。王远兴等‘采用反向高效液相色谱?分离测定了银杏提取水解 后的三个苷元一槲皮素,山蔡酚,异鼠李素的含量,利用各苷元的换算因子计算 了黄酮化合物的总含量。实验结果表明,该方法定量结果准确,重现性好。张荣 泉等‘也用反相高效液相色谱法测定沙棘提取物中总黄酮含量,证明此方法操作 简便,快速、准确。 ....其他方法 其他总黄酮的测定方法还有荧光分光光度法,聚酰胺吸附法【】、近红外 反射光谱法四等。 .苦瓜保健食品研究进展 苦瓜营养丰富,据营养学家分析测定,发现苦瓜有较高含量的蛋白质、碳水 化合物、氨基酸、维生素维生素、维生素、维生素、维生素、维生素 、尼克酸等和多种人体所必需的矿物元素钙、磷、铁、钾等,特别是维生 素的含量居于瓜类蔬菜之首。苦瓜果实虽性寒味苦,但营养成分丰富,并含 有苦瓜多糖、苦瓜皂苷、苦瓜黄酮等多种生理活性物质,具有极高的药用和食用 价值,在医药和食品领域中有着广泛的用途。现代研究证实‘ ,苦瓜具有多种药 理作用和保健功能。因此,苦瓜是一种优良的功能食品原料。用苦瓜制作的蜜饯 和果脯风味独特,甜、酸、苦适中【;苦瓜的果实和种子中含有多种生理活性物 质,加工成的饮料兼具有食用和降脂降糖等保健功能。利用性味甘寒的苦瓜和南 瓜【、草莓【、菠萝九以及金银花‘等复配而成的复合保健饮料具有风味独特, 降压降糖的作用:利用盐渍法脱去苦昧物质,制成风味独特的苦瓜冰洪淋‘,既 能降温,又能止渴;用苦瓜汁和绿茶浸提液混合配制的苦瓜?茶【洲,风味独特, 口感良好,是一种功效确切的消暑保健饮料,用于治疗暑热烦渴,小便不利,风 热赤眼等症,效果照好并且材料易得,药食两用;将苦瓜切片烘干制成的苦瓜茶 对人体有较明显的泻火解乏作用,尤其对中老年人便秘具有很好的通便效果; 将苦瓜汁质地细腻,富有弹性,具有纯加入到豆奶中可使苦瓜豆腐成型快捷, 正第一章绪论 的豆香和苦瓜芳香气味,味正无异味,无肉眼可见的外来杂质【】。用特殊工艺研 制成的瓶装苦瓜保健酒【】,具有保健功效,利用苦瓜汁枸杞汁酿造的保健啤酒【】 独具风味,具有清暑消热、明目解毒、降低血糖、增强人体免疫力之功效,尤其 适于糖尿病患者饮用。黄小琴等】研制的以苦瓜为主要成分的苦瓜降糖胶囊显示 出良好的降血糖、降血脂效果。张雁等’以苦瓜浓缩汁、麦芽糖醇、山梨糖 醇和低聚异麦芽糖为主要原料,研制的苦瓜保健含片和苦瓜保健固体饮料,使产 品达到良好口感和风味的同时,又增加了产品抗龋齿、改善肠胃的功能。但是, 上述产品均是将苦瓜果肉经过打浆,过滤等简单的加工工序后添加到食品中去, 还处于初级阶段,显然已经不能满足现代人们的消费需求,也落后于功能性食品 的发展现状。因此,在苦瓜功能性食品开发的同时要加强功能因子的提取、分离、 纯化和应用等新技术、新工艺研究,如膜分离技术、超临界萃取技术、冷冻干燥 技术、超微粉碎技术、微胶囊技术、生物和基因工程技术、现代分析检测技 ,从天然产物中分离、提取这类功能因子,最大限度地保留其活性,提高术等 其 稳定性。由此可见,功能因子明确,作用机理清楚的苦瓜功能性食品具有广阔的 开发前景。 .本文主要研究内容、创新点和科学意义 ..主要研究内容及创新点 从以上论述可以看出,前人在苦瓜研究方面已经作了一些工作,但国内外研 究现状也表明:苦瓜皂昔和黄酮的提取方法单一,主要是采用传统溶剂提取方法, 未见有关利用其他方法对其进行提取的报道;苦瓜皂苷的测定方法虽然有相关的 文献,但未对比色体系和比色条件进行系统的筛选;市场上苦瓜的产品也是琳琅 满目,但是这些产品多为经过简单的工艺处理,对其中的活性成分也不是很 明确。 基于苦瓜的研究现状及前人研究成果,本文主要在以下方面开展创新性研究工 作: 建立了香草醛一高氯酸比色法测定苦瓜总皂苷的分析方法。分别对比色体系 和比色条件进行筛选,最后确定最佳的比色参数,建立了一种快速测定苦瓜总皂 苷的好方法。 首次利用超声辅助方法提取苦瓜中的总黄酮,采用。均匀设计试验第一章绪. 论 进行工艺优化,最后获得超声辅助法提取苦瓜总黄酮的最佳工艺。 .首次将?萃取技术应用到苦瓜活性成分的提取当中,并采用 ”均匀设计试验优选提取苦瓜总皂苷和黄酮的最佳工艺条件。 .首次对苦瓜?萃取物采用气相一质谱连用技术?进行成分 分析。 .首次以?萃取的苦瓜提取物为原料,研究制作了苦瓜冲剂和苦瓜含 片等苦瓜健康食品,并与以传统乙醇提取的苦瓜功能提取物为原料研制的同类产 品进行表观和功能性质的比较。 .首次考察了?和传统乙醇提取的苦瓜功能提取物以及以其为原料 研制的苦瓜冲剂和苦瓜含片的抗氧化活性。 ..本研究工作的科学意义 本研究工作的科学意义和应用价值在于:对苦瓜皂苷和黄酮的提取工艺的优 化和对其抗氧化功能的研究,为苦瓜皂苷和黄酮的药理活性、药效实验和天然功 能性食品开发提供了物质基础。苦瓜皂苷和黄酮分析方法的建立,将为苦瓜皂苷 和黄酮药理活性、药效实验提供了正确有效精密的现代分析技术,为苦瓜保健食 品的质控与标准化提供了科学依据。尤其是将超声和.提取新技术应用 到植物天然成分提取中来,最大限度的减小对有效成分的破坏,有选择性的获得 目标产物,相对的减少杂质,从而得到高质量、功能因子明确的苦瓜保健食品原 料。对不同加工方法的苦瓜产品进行功能性质的比较,可筛选合理的产品加工方 式,避免产品的生产过程中对活性成分的破坏。本试验对苦瓜功能成分的基础研 究以及在此基础上的苦瓜健康食品的开发,不仅可提升健康食品的科技含量,也 为高附加值的苦瓜健康食品的工业化生产打下了很好的基础。 参考文献 王争光,俞颂东.苦瓜的有效成分和药用价值.浙江中医杂志,,: .,. . ,,: ~.?? 篓二童笪堕 . .., ,,:~ : 康延国,翟延君,王树实,张会宗,柳丽.苦瓜的生药鉴定研究.中草药,, :~ 万新建,陈学军,缪南生,方荣.我国苦瓜的研究现状及展望.江西农业学报, ,:~ 食品与机械,,:~ 苦瓜化学成分的研究进展. 袁杰,杜琪珍. 药学学报,,: 苦瓜子有效成分研究. 朱明静. ,,..: ,,: . ~ 华景清,蔡健.苦瓜总黄酮提取工艺.食品与发酵工业,,:~ , 蔡健,王薇.苦瓜资源开发与苦瓜籽黄酮提取技术.食品研究与开发 :~ 权建新,蒿兴厚,张振强.苦瓜化学成分的研究进展.陕西医学杂志,,: 中草药,,: 王庆华.苦瓜子蛋白的分离纯化及其性质研究. 彭爱之,李劲.苦瓜中氨基酸和无机元素的含量分析【.湖南医科大学学报,, :~ , , , ., ., 艇 卜 . , :~ ?,.,..,..,.. ? ,:~ .第~章绪论 ? 。? .? . . 。:~ , 潘国庆. 青海科技,,:~ 苦瓜的化学成分及药理作用. 侣丽红,赵余庆.苦瓜中降血糖活性成分的提取分离与鉴定. 中药材,, :~ 骆静,王玉坤,王棘,张平.苦瓜醇提物的降血糖作用.中药药理与临床, ,:~ .., , . , , . , , .蹦 ,,:~ 乔昕,陈雄,李冬生. 苦瓜抗氧化作用的初步研究. 湖北农业科学,, ,~ 付明辉,陈健汉,庄东红.苦瓜提取液的抗氧化、抑菌和降血糖活性.食品科 学, ,:~ 王先远,蒋与刚,金宏,许志勤,高兰兴.苦瓜皂甙的抗氧化作用初探.解放军 预防医学杂志,,:~ .?. ? ? , , , .,,:~ 陈执中 水溶性成分的分析.中国民族民 抗艾滋病天然药物一苦瓜成分的研究, 间医药杂志,,: ?, .,? , ., , ,~ . ? ,.,:~ , , . ? .,,: 笫一章绪论 , . , ,,: ? . 齐文波,徐中平,徐誉泰,宋剑秋.苦瓜素的分离纯化与抗肿瘤活性的研究.离 子 交换与吸附,,:~,, 【 ,..,矗 . . 。:~ 程光文,陈清山,张绪忠.苦瓜对正常小鼠和免疫受抑小鼠免疫促进作用的实 验观察 .中国冶金工业医学杂志,,:~ 严启新,罗天浩.苦瓜的研究及开发思考.时珍国药研究,,:~ ,张名位,刘兴华.苦瓜提取物的抑菌作用及其稳定性研究.食品科技,, 王杰 :~ .苦瓜抗菌作用研究.食品科学,,:~ 何煜波 秦勇,杜方麓.皂甙提取分离研究进展.湖南中医药导报,,:~ 陈勋,于海宁.苦瓜皂苷快速分离纯化方法研究.食品科学,,: ~ 崔恒林,徐斌,董英.苦瓜皂苷的提取过程研究江苏大学学报自然科学版, ,:~ 孙磊.乙醇提取苦瓜皂甙的工艺研究.宁夏医学杂志,,:~ 刘绣华.陈伯森,汪汉卿.皂甙分离和结构鉴定研究进展.化学研究,,: ~ 上海科学技 中国科学院上海药物研究所.中草药有效成分提取与分离第二版 术出版社,:~ 韩丽.实用重要制剂新技术.化学工业出版社,:~ 邹静恂,席宏伟,王桥. 超声提取对党参皂苷成分提出率的影响.首都医科大 学学报,,:~ 宋小妹,崔九成,张军.超声法提取绞股蓝总皂苷的工艺研究.中成药,, 第一章绪论 : 曹万新,武丽荣,史宣明,魏冰.超滤膜法提取精制油茶皂苷的研究 中国油 腊,.:~ 黎海彬,李琳,胡松青,杨晓泉,郭祀远,蔡妙颜.微波辅助提取罗汉果皂甙的 研 食品科学,,:~ . 究 高文,朱晓韵,刘丽君,陶玉梅微波技术在苦瓜甙提取中的应用. 广西轻工 ,,:~ 业 金京玲,任东鲜,金哲洙,崔华,韩立卓,朴惠善,李银姬. 大孔吸附树脂法提 取 蒺藜总皂苷. 延边大学医学学报,,:~ 岳松,马力,张国栋,芮光伟,任川宏.超临界流体萃取技术及其在食品工业中 的应用. 四『工业学院学报,,:~ 葛发欢,史庆龙,林香仙.超临界一从黄山药中萃取薯蓣皂素的工艺研究.中 草药,,: 葛发欢,李莹,谢健鸣.超临界从柴胡中萃取挥发油及其皂苷的研究.中 国中药杂志,,: 黄阿根。钱建孤,谭道经,郑瑞荷. 时黄酮提取工艺研究. 食品与机械, :~ 周文斌.葛根总黄酮提取工艺条件的研究. 渝州大学学报自然科学版,, :~ 李苑,张敏.中草药中黄酮类化合物提取工艺的研究概况.广东药学,, :~ 卢锦花,胡小玲,岳红,苏克和,阎鑫,管萍.大孔吸附树脂提取银杏黄酮.应 用化学,,:~ 游海,陶秉莹,张立麒.超临界萃取法从银杏叶中提取黄酮类化合物、萜内酯 的工 艺研究. 南昌大学学报工科版,,:~ 刘祥义.超声波提取元宝枫叶总黄酮方法研究.云南化工,,:~ ,谢永荣,钟海山,刘红波.超声波提取银杏黄酮苷的工艺研究.赣南师 郭国瑞 范学院学报,:~ .微波法提取桑叶黄酮工艺条件的研究.淮北煤师院学报,,: 胡庆国 第一章绪论 ~ 张梦军,金建锋,李伯玉.李志良.微波辅助提取甘草黄酮的研究.中成药,, :~ 王晓,李林波,马小来,张红侠,王其亮.酶法提取山楂叶中总黄酮的研究.工 艺技术,,:~ . .口 ....。:~ ,,..: . .. .,:~ 谷利伟,谷文英. 比色法测定大豆中的总皂苷, 中国粮油学报.,: ~. 骆华星,任玉翠. 灵芝绞股蓝胶囊中甾醇和绞股蓝皂苷的测定. 浙江预防医学, ,:~ 颜仁梁,刘志刚.中草药、中药制剂中总黄酮类化合物含量测定方法综述.广 州医 药,,:~ 刘逢芹,刘田云,李贵海,黄欣,余晓东分光光度法和法测定野葛藤总黄酮 及葛根素含量.中药材,,:~ ,吕 李芙蓉 博.葛根中总黄酮的微波提取及含量测定.新疆中医药,, :~ 于村,俞莎,沈向红.中草药总黄酮的提取和含量测定.浙江预防医学,, :~ 隋焕平,夏薇,张玉梅.芹菜提取物中总黄酮含量测定.中国公共卫生,, :~ 魏永生,王永宁,石玉平,卢挺.分光光度法测定总黄酮含量的实验条件研究. 青 海大学学报自然科学版,,:~ 千远兴,王玲,曾首元.高效液相色谱法分析银杏叶提取物中的黄酮类化台物. 江 西科学,,:~ 蓉. 张荣泉,张 药品质量与检验高效液相色谱法测定沙棘提取物中总黄酮含量 .天津药学,,:~ 朱炯波,张敏,龚竹琼,李贵.荧光分析法测定显齿蛇葡萄中总黄酮的含量 现 第一章绪论 代食品科技,,:~ 张中建,阎小伟.聚酰胺吸附法测定总黄酮.食品工业科技,,:~ 胡钢亮,吕秀阳,罗玲,徐铸德近红外光谱法同时测定银杏提取液中总黄酮和 总 内酯含量.分析化学研究报告,,:~ 王薇.苦瓜的营养与药用价值. 山东食品科技,,:~ 天津农学院学报,,:~ 甄润英低糖苦瓜脯生产工艺研究. 谭书明,朱庆刚低糖苦瓜蜜饯的加工工艺.山地农业生物学报,,: ~ 郑立红.苦瓜南瓜复合保健饮料的研制.食品工业,:~ 王静华,陈杏禹.苦瓜、草莓复合果汁饮料的研制.辽宁农业职业技术学院学 报, ,:~ 肖红,林明权,符以龙.苦瓜一菠萝复合饮料的研制.海南大学学报自然科学 版, ,:~ 钟世荣,陈云华,田心健.金银花菊花苦瓜保健饮料的研制.食品工业科技,, :~ 海金萍.苦瓜冰淇淋.冷饮与速冻食品工业,:~ 纪庆柱.新酗苦瓜茶保健饮料的研制、广州食品工业科技,,:~ 汝医,祁国栋.苦瓜?茶加工工艺.农牧产品开发.: 陈小梅,张迅捷,罗建玲,吴超.苦瓜酸豆奶的研制.福建轻纺,:~ 黄秀锦.苦瓜保健啤酒的试制.淮阴:二学院学报,,:~ 谭佩毅.苦瓜、枸杞保健啤酒的试制.食品科技,,:~ 黄小琴,杨延莉,施云星.苦瓜胶囊降血糖作用研究.药学服务与研究,, :~ 张雁,徐志宏,张名位.苦瓜的营养保健功能及加工工艺.广东食品工业科技, ,,~ 张雁,徐志宏,张名位,池建伟.保健型苦瓜固体饮料的研制.广东食品工业科 技,,:~第二章苦瓜总皂苷提取工艺研究 第二章苦瓜总皂苷提取工艺研究 引言 . 最近几年,随着人们对苦瓜研究的深入,人们对苦瓜的化学成分和药用价值 是四环三萜类化合物‘。苦瓜皂 有了更加深刻的认识苦瓜果实含苦瓜皂苷, 苷是苦瓜中的有效成分之一,文献报道苦瓜皂苛具有许多活性功能,如明显的降 血糖和抗氧化作用‘,对机体的免疫增强作用嗍,对肿瘤细胞的抑制作用等‘”。 皂苷一般易溶于热水、含水乙醇、热甲醇、热乙醇,几乎不溶于或难溶于乙醚、 苯、石油醚等极性较小的有机溶剂【】。用热水提取在将皂苷提取出来的同时,苦 瓜中的糖类也可以溶出,而糖类对本试验测定方法干扰较大。乙醇是一种经济、 安全的有机溶剂,通常将乙醇用于天然植物中皂苷类物质的提取。采用传统的热 回流工艺,以乙醇为浸提剂,可得到苦瓜皂苷。目前,国内关于苦瓜皂苷提取工 艺研究的文献报道较少,陈勋【、崔恒林‘刀、孙磊【等报道了苦瓜皂苷的提取及 含量测定,但弗没有对苦瓜皂苷提取工艺进行优化筛选。本文采用正交设计对回 流法提取苦瓜皂苷的工艺条件进行了研究。通过对提取温度、乙醇浓度、固液比 和提取时间等因素进行考察,得出最佳提取工艺参数,可为苦瓜皂苷的结构表征、 活性功能实验以及苦瓜皂苷的工业化生产奠定相关基础。 .实验部分 实验仪器与材料 .. 仪器:紫外分光光度计尤尼柯公司,电子天平上海精 天电子仪器厂,电子恒温不锈钢水浴锅上海宏兴机械仪器实业制造公司,旋 转蒸发器上海荣生有限公司 试剂:无水乙醇,香草醛,冰乙酸,石油醚,正丁醇,甲醇,高氯酸以上 试剂均为分析纯,人参皂苷标准溶液. / 样品:本地苦瓜 ..实验方法 ...苦瓜皂苷提取方法口?第二章苦瓜总皂苷提取工艺研究 准确称取苦瓜干料 %乙醇水溶液,于 置于圆底烧瓶中,加入 ?回流提取. ,重复次,合并提取液,过滤,真空浓缩至无醇味约 。 、 将浓缩液加入石油醚 脱脂,重复次,再用水饱和正丁醇萃取次 、 、 ,合并正丁醇萃取液,真空浓缩至于,称重,用甲醇溶解, 定容,待用。 ...苦瓜皂苷测定方法“。 准确移取样品溶液 ,置于?具塞试管中,水浴挥干甲醇,加. %的香草醛一冰乙酸溶液,再加入 高氯酸,摇匀,于?水浴 ,取 出立刻用流动的自来水迅速冷却至室温,以不加样品的平行样作空白,于 测定吸光度。 回流法工艺优化 ... ....回流法提取条件单因素试验 影响其得率的主要因素有】:提取温度、乙醇浓度、 在回流提取苦瓜皂苷时, 固液比、提取温度、提取次数。通过单因素试验确定它们作用的合适范围, 为回 流法提取苦瓜皂苷正交试验提供数据。 ....回流法提取条件的正交设计及试验’ 根据单因素试验结果,确定各正交设计因子的水平,按正交表对回 流法提取工艺进行研究,确定苦瓜总皂苷回流提取法的最佳工艺参数。 ....回流法最佳工艺条件验证试验 准确称取苦瓜干品份,在.,.节优化的工艺条件下,即%乙醇, 固液比为:,?回流提取. ,重复提取次,提取,离心,真空浓缩, 称重,定容,测定吸光度值,计算苦瓜总皂苷含量。 .结果与讨论 ..提取溶剂的选择 根据皂苷的极性和皂苷在几种常见溶剂中的溶解性质,选用对皂苷的溶解度 大、而对其它成分溶解度小的溶剂,从而将皂苷溶解出来。皂苷一般易溶于热水、 含水乙醇、热甲醇、热乙醇,考虑到甲醇对身体有害,且在相似的条件下,乙醇 提取皂苷的产量明显高于甲醇四。所以选择乙醇作为提取溶剂。据文献四报道第二章苦瓜总皂苷提取工艺研究 无水乙醇对皂苷的提取不完全,这是因为皂营不易溶解于完全无水的溶剂中。以 %以上浓度的乙醇提取使样品中的蛋白质变性沉淀,提取液容易澄清。而% 以下浓度的乙醇提取液中的蛋白很难以离心或过滤的方法除去,使测定值偏高。 %以上的乙醇水溶液提取速度快,提取的杂质少。且乙醇中含水量越多提取的 糖类越多【”,而糖类对本试验测定方法干扰较大。所以本试验选用%的乙醇 水溶液作为提取溶剂。 ..苦瓜皂苷回流法提取单因素试验结果及其分析 对苦瓜样品进行回流法提取单因素试验。 ...提取温度对苦瓜皂苷提取的影响. 篓九 擎 .温度