【doc】农村地区RVVC病人阴道内所分离的假丝酵母菌分型和药敏分析
农村地区RVVC病人阴道内所分离的假丝
酵母菌分型和药敏分析
?
l58?中国妇幼保健2005年第2O卷
农村地区RVVC病人阴道内所分离的假丝酵母菌分型和药敏分析
肖敦振赵丁源高俊姚念华中科技大学同济医学院计划生育研究所430030
中国图书分类号R711.31文献标识码A文章编号1001-4411(2005)02-0158-03
【摘要】目的:了解农村地区复发性假丝酵母菌外阴阴道炎(RVVC)病人假丝酵母菌菌型分布情况及其对常见抗真菌
药物的敏感性.方法:对农村地区RVVC患者阴道内分离到的菌株分别采用科玛嘉显色培养基和ATBFungul药敏试剂盒进行分
型鉴定和药敏分析.结果:所得30个菌株中自假丝酵母菌,光滑假丝酵母菌,热带假丝酵母菌,中间假丝酵母菌的构成比分别
为13.33%,33.33%,26.67%,10.00%;菌株对5一FC,AMB,NYS,MIC,KET,ECO6种药物的敏感性分别为52%,48%,
64%,16%,16%,16%.结论:农村地区RVVC病人假丝酵母菌呈明显非白念化趋势,菌株对常见抗真菌药物敏感性降低,
而且不同菌型有不同的药敏谱.
【关键词】复发性假丝酵母菌外阴阴道炎(RVVC)真菌药敏实验念珠
菌菌型分布
Theclassificationandantifungalsusceptibilitytestingofcandidaisolatedfrom
RVVCpatientsofrural
XIAODun—zhen,ZHAODing—yuan,GAOJun,eta1.FamilyPlanningRe
searchInstitute,TongfiMedicalCollege,
HuazhongUniversityofScienceandTechnology,Wuhan,Hubei430030,China
(Abstract]Objective:ToacquainttheclassificationandsensitivitytoantifungalagentsofcandidaisolatedfromRVVCpatientsof
rura1.Methods:TousetheChromogenicmediumandATBfungulkittoconducttheclassificationandantifungalsusceptibilitytestingof
candidaisolatedfromRVVCpatientsofruralseparately.Results:Amongallthirtystrains,theratioofcandidaalbicans,candidaglabrata,
candidatropicalisandcandidaintermedialWas13.33%,33.33%,26.67%,10.00%separately;Thesensitiyityto5一FC,AMB,NYS,
MIC.KETandECOwas52%,48%.64%,16%,16%,16%separately.Conclusion:ThecandidaiaolatedfromRVVCpatientsofru-
ralhasthetrendofnon—candidaalbicans;besides,thesensitivitytoantifungushasdecreased.Differentstrainshavedifferentantifungal
susceptibilityspectrum.
(Keywords]Recurrentvulvovaginalcandidiasis;Antifungalsusceptibilityt
esting;Classificationofcandida.
育龄妇女假丝酵母菌外阴阴道炎患病率高,在初发病例
中自假丝酵母菌为其主要病原菌.但随着抗真菌药的广泛应
用,由非白假丝酵母菌引起的阴道炎感染逐渐增多;而且假
丝酵母菌对常见抗真菌药物的敏感性逐渐降低,不同菌型的
假丝酵母菌对常见抗真菌药的敏感性也存在差异.假丝酵
母菌外阴阴道炎经治疗后5%一10%复发;而目前有关复发性
假丝酵母菌外阴阴道炎(RVVC)菌株分型及药敏情况尚无报
道.本研究通过对临床RVVC病人体内分离的假丝酵母菌进
行分型和药敏分析,以了解农村地区RVVC感染的菌种分布
和药敏情况.
1材料和方法
1.1菌种来源.2003年9月从湖北省仙桃市计划生育服务站
门诊的复发假丝酵母菌外阴阴道炎病人阴道分泌物中分离到
30株假丝酵母菌:白假丝酵母菌
株,ATCC10231,由湖
北省疾病控制中心微生物室提供.
1.2主要试剂.科玛嘉显色培养基(郑州博赛生物工程有限
责任公司);ATBFungulkit和ID32C鉴定卡(法国梅里埃公
司).
1.3实验方法.
1.3.1科玛嘉显色培养基分型鉴定:将沙堡琼脂培养基中的
样本菌株和白假丝酵母菌标准株接种于科玛嘉显色培养基上,
37%培养48h,按培养基上所形成菌落的颜色进行分型鉴定.
1.3.2ATB微生物鉴定仪分型:将初判为光滑假丝酵母菌的
菌株,用ID32C鉴定卡和ATB微生物鉴定仪进行鉴定,用于
区分易于与光滑假丝酵母菌显色相近的其它菌株.
1.3.3药敏实验:随机挑选25个样本株,严格按试剂盒操
作说明书进行药敏实验.
2结果
2.1分型鉴定结果见
1.
表1假丝酵母菌分型结果(共3o人)
区RVVC型和药敏分析第2
显色培养基从3O株样本菌中分得13株(43.33%)光滑
假丝酵母菌,8株(26.67%)热带假丝酵母菌,4株
(13.33%)白假丝酵母菌和5株(16.67%)其它类型的假丝
酵母菌.对显紫色初判为光滑假丝酵母菌的菌落,继续观察
其在显色培养基上的颜色变化;在接种培养后的第4天,有3
株(10.O%)假丝酵母菌的菌落颜色发生了变化,散在分离
的单个菌落由紫色变成淡蓝色,其余1O株(33.33%)仍为
紫色;后经ATB鉴别系统验证,菌落颜色发生变化,初判为
光滑假丝酵母菌的菌株实为中间假丝酵母菌.
2.2药敏结果见表2.
表2各型假丝酵母茵的药敏试验
注:S:敏感;I:中介;R:耐药
所有菌株对5一FC,AMB,NYS,MIC,KET,ECO6种
药物的敏感性分别为52%,48%,64%,16%,16%,16%;
其中自假丝酵母菌对5一FC,AMB,NYS的敏感性较高
(75%),但对吡咯类抗真菌药均不敏感,对MIC和ECO全部
耐药;光滑假丝酵母菌对5一FC,NYS的敏感性较高
(77.8%),对其它药物的敏感性较低(11.1%);中间假丝酵
母菌对5一FC全部敏感,除对NYS敏感性为33.3%外,对其
它4种药物均不敏感;热带假丝酵母菌对AMB全部敏感,对
NYS的敏感性为71.48%,但对5一FC全部耐药,x,-l~lt:咯类抗
真菌药的敏感性也不高(均低于30%).
3讨论
假丝酵母菌外阴阴道炎多发于育龄妇女,主要引起外阴
?
l59?
搔痒,灼痛,白带增多等症状;若不经
的诊治,以及连
续3个月经周期的复查,很易慢性化,非白念化,并形成耐
药株.由于卫生服务条件,知识水平和就医行为等原因,使
得农村育龄妇女成为罹患RVVC的弱势群体.本研究结果显
示农村地区RVVC病例呈现非白化和高耐药性两大特征:
3.1非白化特征.3O例RVVC病人中自假丝酵母菌仅占
13.33%,而非白假丝酵母菌占86.67%,其中光滑假丝酵母
菌和热带假丝酵母菌分别占33.33%和26.67%.这与初发病
例中,白假丝酵母菌为主要病原菌(占80%,90%)相差甚
远.其可能原因是现在临床广泛应用的是吡咯类抗真菌药,
而该类药物的杀菌作用主要是针对白假丝酵母菌,对光滑假
丝酵母菌和克柔假丝酵母菌的杀菌作用较弱;这就使得其
它菌种能够逃逸吡咯类抗真菌药的杀菌作用而存活下来,从
而使得非白假丝酵母菌的比例增大.另一可能原因是长期的
不规范用药导致了菌种的变迁.ChongPP等H在研究中发现,
RVVC病人中自假丝酵母菌的遗传相似性较初发病人低,说
明菌种在复发感染中维持着微观进化.
3.2高耐药性特征.耐药性可以分为两种:一种是天然耐
药,另一种是获得性耐药或继发性耐药.本次调查发现,从
25例复发病例中分离到的假丝酵母菌呈很高比率的耐药性.
总体趋势为对吡咯类抗真菌药不敏感或耐药.其中白色念珠
菌最为典型,不敏感或耐药性达100%.出现上述结果的可能
原因是不规范的用药(在农村地区主要为疗程短,不复查)
使抗真菌药起到了筛选和消灭敏感株的作用,从而使得耐药
株在药物存在情况下选择性存活下来;或者是抗真菌药诱导
敏感株突变为耐药株.NYS是治疗假丝酵母菌外阴阴道炎
的传统用药,但研究中我们发现实验菌株对NYS的敏感性
(64%)高于吡咯类抗真菌药;出现该现象的可能原因是放弃
了传统药物或是NYS使用方法不当.因为NYS不溶于水,阴
道给药时应该将药物碾成粉末,均匀的涂布于阴道表面.而
调查中我们发现,农村地区在使用该药时只是简单地将药片
塞入阴道,这样隐匿于阴道粘膜皱襞的假丝酵母菌得以逃逸,
并作为菌种导致复发感染.值得注意的是本研究中热带假丝
酵母菌对5一FC全部耐药,而且MIC>128mg/L.温旺荣等
也有同样的报道.其可能原因是患者感染的即为具有遗传
稳定性的耐药菌株.研究中我们还发现,25株实验菌株都对
6种实验药物中1种或几种敏感.上述结果提示对RVVC病人
在有条件的医院需进行假丝酵母菌分型和药敏分析,选择有
效的抗真菌药物;对没有条件的基层门诊,可选用传统药物
NYS,采用粉剂和栓剂.使药物能在阴道表面均匀分布.若
治疗无效,应转诊到有条件的大医院就诊.
4参考文献
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(2004-05-17收稿)
[编校李秀娟]
MMP一2在宫颈腺癌中的表达及其活化状态与转移之间的关系
徐琳李一雷?赵秀芝吉林省人民医院130021
中国图书分类号R737?3文献标识码B文章编号1001-4411(2005)02-0160-02
金属基质蛋白酶(MMPs)是一类zn”依赖的细胞外蛋Kit购自Invitrogen北京分公司.该方法的原理为:试剂盒中
白水解酶家族,可以降解细胞外基质所有成分,在基质重构包含与明胶交连在一起FITC荧光染料,当明胶被明胶酶降解
及胚胎发生过程中发挥重要作用.MMPs以酶原形式分泌,后,可导致荧光的激发,从而显示活化酶存在的部位和活性
随之被其他蛋白酶等激活物所激活,从而发挥生物学作用.强度.方法按说明书进行.
MMP一2(明胶酶A/72kDa?型胶原酶)是MMPs家族的重要1.3阳性判定标准.MMP一2以肿瘤细胞或上皮细胞出现棕
成员,可降解细胞外基质中的IV型胶原,在肿瘤侵袭转移时黄色颗粒为阳性判定标准.MMP一2表达的判定以染色强度
起重要作用”.实验应用免疫组化的方法,研究MMP一2和阳性细胞百分率的得分之积进行评估.?染色强度:0
在各型宫颈腺癌中的表达,通过原位酶谱分析的方法,对为阴性;l为弱阳性;2为阳性;3为强阳性.?阳性细胞百
MMP一2的活化进行检测和定位,从而明确其在肿瘤侵袭转分率:无阳性细胞为0;<25%为l;25%50%为2;>
移日寸的作用.50%为3.两者之积最高为9,0视为阴性,l3弱阳性,4
6视为阳性,7—9视为强阳性.活化型MMP一2的观察在O一
1材料与方法LYMPUSFV500共聚焦显微镜下进行,当MMP一2活化时,
1.1材料.1996—2004年手术切除宫颈腺癌3l例,因其他出现绿色荧光,以信噪比大于2为阳性判断标准.
原因子宫全切的正常宫颈12例.宫颈癌组年龄31—75岁,1.4统计学分析.采用INSAT软件,应用检验处理数据.
平均年龄44.1岁.正常组平均年龄45.5岁.病理学分型按
WHO分类进行.伴有淋巴结转移者19例.31例宫颈腺癌中2结果
19例取材新鲜组织用于原位酶谱分析,剩余部分与其他病例2.
1正常宫颈和官颈腺癌中MMP一2的表达.MMP一2在正
组织按常规方法包埋,固定.常宫颈上皮及腺体中无陌性表达,宫颈腺癌MMP一2的表达
1?2方法c全部标本按常规制成3,4Ixm厚的连续切片,依率为77.
4%,各亚型之间表达率无显着性差异(P>0.05),
次进行苏木素一依红染色(HE)及免疫组织化学染色.19例肿瘤细胞阳性表达定位于细胞膜和细胞浆,染色阳性的细胞
新鲜组织制备冰冻切片,通过原位酶谱分析的方法,对MMP呈散在,片状或灶状分布.肿瘤问质和正常官颈基质中,部
一
2的活化进行检测和定位.分血管内皮细胞,浸润的单核细胞和淋巴细胞也可见阳性反
1.2.1免疫组织化学染色.采用sp法,鼠抗人MMP一2单应.
克隆抗体及免疫组化染色试剂盒均购自迈新生物制剂有限公2.2MMP一2表达与临床分期及淋巴结转移的关系.结果显
司.切片脱腊,浸入修复液中,98%热修复5min.冷却后用示,宫颈腺癌临床I期,II期和IIIIV期MMP一2阳性率分
过氧化氢溶液(A液)阻断15min去除内源性过氧化酶活别为75%,77.8%和77.8%,组间无显着性差异(P>
性.用血清(B液)封闭后,用l:200稀释的鼠抗人MMP一20.
05).淋巴结转移组MMP一2阳性率高达89.5%.明显高于
单克隆抗体孵育切片,4?过夜,再用生物素标记的二抗(C无淋巴结转移组(58.
3%),两组间差异显着(P<0.01),
液)和链霉素抗生物素一过氧化物酶(D液)孵育,各10见表l.
min(37?),其间用PBS缓冲液洗涤.DAB(现配)发色.2.
3MMP一2的活化与宫颈腺癌淋巴结转移之间的关系.采
经苏木素复染后,常规脱水,透明,封片.镜下观察并摄片.用原位酶谱分析的方法,检测了19例冰冻宫颈腺癌组织,以
用PBS代替一抗设阴性对照.用浸润性乳腺癌标本作阳性对明确是否存在活化型MMP一
2,并观察其分布.伴淋巴结转
照.移的宫颈腺癌组织,83.3%出现活化型MMP一2;而7例无淋
1?2?2常规HE染色.巴结转移的宫颈腺癌组织仅1例出现活化型MMP一2
1.2.3原位酶谱分析.ENZchekGelatinase/CollagenaseAssay(14.3%),两组间差异显着(P<0.01),见表2.活化型
——
MMP一2存在于肿瘤细胞膜,呈灶状或团簇状分布,多位于
?吉林大学基础医学院病理教研室癌巢与正常组织交界处和管腔周围.