人巨细胞病毒pp65抗原检测
人巨细胞病毒pp65抗原检测
监测免疫抑制病人的CMV感染·
*
* 人巨细胞病毒(CMV)感染甚为普遍
* 人巨细胞病毒(CMV)感染是免疫功能低下者的常见机会感染
* 器官移植后活动性HCMV感染率为20-70%,如发生CMV肺炎,死亡率可达80-90%
* CMV还有抑制机体免疫功能的作用,CMV感染可增加真菌和其他机会感染发生率,
* 还可能造成异基因移植物的损害。
* 目前对器官移植后CMV病的重点是预防,包括预防性抗病毒或针对CMV亚临床感染(Preemptive)抗病毒治疗治疗
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人巨细胞病毒pp65抗原检测
监测免疫抑制病人的CMV感染·
*
* 人巨细胞病毒(CMV)感染甚为普遍
* 人巨细胞病毒(CMV)感染是免疫功能低下者的常见机会感染
* 器官移植后活动性HCMV感染率为20-70%,如发生CMV肺炎,死亡率可达80-90%
* CMV还有抑制机体免疫功能的作用,CMV感染可增加真菌和其他机会感染发生率,
* 还可能造成异基因移植物的损害。
* 目前对器官移植后CMV病的重点是预防,包括预防性抗病毒或针对CMV亚临床感染(Preemptive)抗病毒治疗治疗
。
* 早期检测活动性HCMV感染是pre-emptive治疗的前提条件
* CMV常规病毒培养(CCC)往往需4周才能获阳性结果,对早期 诊断帮助不大
* CMV特异性抗体IgM,在严重免疫抑制患者可不出现或延迟出现。
* 人巨细胞病毒pp65白细胞抗原血症较特异性抗体IgM阳性早出现30天1。优点是可定量检测,5小时内可出结果。
研究目的
了解HCMVpp65抗原检测在免疫功能低下者临床HCMV疾病预测或早期诊断中的价值。
了解HCMVpp65抗原检测在监测疾病活动性和指导CMV““亚临床感染抗病毒”治疗中的价值。
应用HCMVpp65抗原检测分析免疫抑制病人CMV感染的危险因素
试验原理
用免疫荧光标记的单克隆抗体检测CMV的低基质磷蛋白 pp65。
pp65的特点
* CMV病毒复制的早期蛋白,它出现于病毒感染的早期,在细胞感染后3-4小时即开始出现
* 是CMV病毒含量最丰富的蛋白
* 其功能是将病毒的DNA锚定在受感染细胞的核膜上
* 在胞浆的高尔基体内合成,然后运回核内。
CMV PP65抗原血症检测
(一)分离白细胞及制片
(二) 固定和打孔
(三) 免疫荧光染色
(四)、读片和结果判断
五、CMV感染的分类和定义
· 活动性CMV感染的定义为血中出现PP65阳性白细胞,即出现抗原血症
· CMV病的定义为:抗原血症出现后7天之内出现下述症状者
白细胞≤3000/mm3;
血小板《75×109/L;
单核细胞增多,异淋> 10%;
视网膜炎;
CXR示间质性肺炎和低氧血症,无其他原因解释者;
肝炎(肝功异常、肝脾肿大),无其他原因解释者;
移植物功能异常
大脑病变/神经系统异常/多神经炎
· 无症状感染:PP65抗原血症阳性,无上述临床表现。
(三)患者一般资料见表
性别 年龄X+SD 总数
男 女
骨髓移植
自身免疫病
血液系统肿瘤
17 13 34.1±6.99 36
2 38 45.8±17.1 40
23 7 36.7±10.2 30
试验结果
骨髓移植 自身免疫病 血液病
总计
病人总数 36 40 30
PP65抗原阳性(%) 16 (44.4%) 17 (42.5%) 8(26.6%)
CMV病 15/16 11/17 7/8
CMVIgM阳性 2/16 1/17 1/8
106
41(38.3%)
33(80.4%)
4(9.75%)
治疗情况及死亡率
治疗人数 死亡 (%) 未治疗人数 死亡(%)
骨髓移植 14 2 (14.2% ) 2 2 ( 100%)
自身免疫病 6 1 (16.6%) 11 6 (50%)
血液病 1 0 (0) 7 4 (67%)
计 21 3 (13.6%) 20 12 (60%)
3周内感染7.7%
3周-2月感染54.8%
2个月以上感染38.46%
TBI与CMV感染的关系
TBI 未用TBI 计
pp65抗原阳性 10 3 13
pp65抗原阴性 1 22 23
计 11 25 36 P<0.01
接受TBI组的CMV感染发病率明显高于未接受组。
GVHD与CMV感染的关系
GVHD 无GVHD 计
pp65抗原阳性 13 3 16
pp65抗原阴性 4 16 20
计 17 19 36 P<0.01
发生GVHD组的CMV感染发病率明显高于未发生组。
FK506
用药 未用药
pp65抗原阳性 6 10 16
pp65抗原阴性 0 20 20
合计 6 30 36 P<0.01
使用FK506组CMV感染率明显高于未使用组。
次pp65抗原阳性细胞数与CMV疾病危险性
首次pp65抗原阳性细胞 CMV PP65抗原阳性细胞
计数 例数
1 1/1
2-3 5/5
4-10 5/6
>10 2/2
由于病例数少,无法进行COX‘S比例危险性分析.
系
一例行Allo-PBSCT的病人两次抗原血症与症状和IgM的时间关
IgM
症状 1 症状2
抗原血症 1 抗原血症2
移植后时间
首次pp65抗原血症出现于移植后59天,2天后出现喘憋、低氧血症,经更昔洛韦治疗13天后症状消失,抗原血症转阴,此时IgM才开始出现弱阳性,此后IgM持续阳性。移植后6个月,再次出现喘憋、低氧血症,查pp65抗原血症转阳, 经更昔洛韦治疗7天后症状消失、抗原血症转阴。
SLE患者中CMV感染者和CMV病者的年龄构成
感染/发病例数
<1年 1-5年 >5年
病程
感染/发病 感染/发病
发病5年以上的狼疮病人既往CTX 的用量与CMV感染的关系如表
CTX用量
>10克 <10克 总计
感染 0 7 7
非感染 5 1 6
总计 5 8 13
发病5年以上的狼疮患者既往CTX 的用量>10克组的发病率低于用量<10克组。
发病5年以上的狼疮患者既往CTX 的用量>10克组的发病率低于用量<10克组。
入院后是否接受激素和/或CTX冲击治疗对发病率的影响
冲击 未冲击 总计 P
MP MP+CTX CTX
感染 2 3 1 11 17
非感染 6 2 2 13 23
8 5 3
总计 16 24 40 P>0。05
入院后是否接受免疫抑制剂冲击治疗对发病率无显著影响。
发病组pp65抗原阳性细胞数与无症状感染组阳性细胞数比较
发病 无症状感染
<100 3 8 11
>100 5 1 6
总计 8 9 17 P< 0.01
发病组pp65抗原阳性细胞数>100/1.5x105PMNL,无症状感染组阳性细胞数<100/1.5 x 105PMNL。如下表
讨论
一pp65抗原血症检测
直接检测病毒蛋白的方法不受机体免疫功能的响,在检测免疫抑制病人的CMV活动性感染时尤其有用.
其检出率明显高于血清学方法
特点为快速(手工操作4-5小时)、敏感性高(活动性感染80-90%,CMV病99-100%)和较高的特异性(77-95%)、可以定量测试
用其指导治疗明显降低了死亡率
在骨髓移植中,可在发病早期诊断,亚临床感染的检出率偏低,应寻求更好的预测方法,或调整诊断
不能检测新毒株和抗原决定簇有变异的毒株
治疗后抗原血症转阴的病人少部分会复发,应结合更好的监控疗效的方法
一PP65检测在监测骨髓移植后CMV感染中的应用1
---早期诊断
* 骨髓移植后早期用IGM来诊断CMV感染将贻误治疗
* pp65抗原检测可用于早期诊断,甚至预测发病
* 如果能在骨髓重建的早期检测到对CMV的细胞免疫或体液免疫异常或抑制则能更准确地预测CMV感染。
病人的百分比
A
100%
B
C
10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 移植后天数
A 骨髓数量重建
B 配型完全符合者T细胞功能重建
C 配型不完全符合者T细胞功能重建
PP65检测在监测骨髓移植后CMV感染中的应用 2
- 骨髓移植后CMV感染的危险因素
CD34+细胞分选
GVHD(FK506)
TBI
合并其他病原体感染
PP65检测在监测骨髓移植后CMV感染中的应用3
--治疗时间
细胞数多者和少者症状性感染的发病率是相近的
90%的症状性感染首次阳性抗原血症的PP65阳性细胞数 <10个/1.5×10(1-7)
我们认为这组病人只要发现阳性细胞即应治疗
首次pp65抗原阳性细胞数与CMV疾病危险性
首次pp65抗原阳性细胞 发病/活动性感染
计数 例数
1 1/1
2-3 5/5
4-10 5/6
>10 2/2
由于病例数少,无法进行COX‘S比例危险性分析.
PP65在监测自身免疫病病人CMV感染中的应用
发热的自身免疫病病人出现CMV感染发病率和死亡率均很高,CMV感染可能是重要的致病原
较之白细胞减少机体免疫状态异常和这种异常未被有效控制,可能是病毒活动性复制的更主要的原因
阳性细胞数多少可以帮助判断和预测CMV症状性感染
CMV特异性IgM的阳性检出率非常低,
CMV感染的危险因素
CMV感染组DRI评分大多>20
合并细菌或感染
病程长、未正规治疗的狼疮
三 PP65检测在监测血液肿瘤化疗后和再障病人中CMV感染中的应用
发热的血液肿瘤化疗后和再障病出现CMV感染发病率和死亡率均很高
幼稚细胞多,分化程度低,无抗病毒作用或病毒 作用很弱,可能是病毒活动性复制的更主要的原因
CMV特异性IgM的阳性检出率非常低
合并细菌或其他感染者CMV感染率高,感染可由多种炎症因子触发
结论
人巨细胞病毒pp65白细胞抗原血症检测可作为免疫功能低下者活动性CMV感染或HCMV疾病的预测指标
骨髓移植后或激素冲击/化疗后发热患者PP65抗原血症出现开始抗病毒治疗可明显降低死亡率。
CMV感染与多种临床危险因素有关
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