人巨细胞病毒pp65抗原检测

人巨细胞病毒pp65抗原检测 监测免疫抑制病人的CMV感染· * * 人巨细胞病毒（CMV）感染甚为普遍 * 人巨细胞病毒（CMV）感染是免疫功能低下者的常见机会感染 * 器官移植后活动性HCMV感染率为20-70%，如发生CMV肺炎，死亡率可达80-90% * CMV还有抑制机体免疫功能的作用，CMV感染可增加真菌和其他机会感染发生率， * 还可能造成异基因移植物的损害。 * 目前对器官移植后CMV病的重点是预防，包括预防性抗病毒或针对CMV亚临床感染(Preemptive)抗病毒治疗治疗 。 * 早期检测活动性HCMV感染是pre-emptive治疗的前提条件 * CMV常规病毒培养(CCC)往往需4周才能获阳性结果,对早期 诊断帮助不大 * CMV特异性抗体IgM，在严重免疫抑制患者可不出现或延迟出现。 * 人巨细胞病毒pp65白细胞抗原血症较特异性抗体IgM阳性早出现30天1。优点是可定量检测，5小时内可出结果。 研究目的 了解HCMVpp65抗原检测在免疫功能低下者临床HCMV疾病预测或早期诊断中的价值。 了解HCMVpp65抗原检测在监测疾病活动性和指导CMV““亚临床感染抗病毒”治疗中的价值。 应用HCMVpp65抗原检测分析免疫抑制病人CMV感染的危险因素 试验原理 用免疫荧光标记的单克隆抗体检测CMV的低基质磷蛋白 pp65。 pp65的特点 * CMV病毒复制的早期蛋白，它出现于病毒感染的早期，在细胞感染后3－4小时即开始出现 * 是CMV病毒含量最丰富的蛋白 * 其功能是将病毒的DNA锚定在受感染细胞的核膜上 * 在胞浆的高尔基体内合成,然后运回核内。 CMV PP65抗原血症检测 （一)分离白细胞及制片 (二) 固定和打孔 (三) 免疫荧光染色 (四)、读片和结果判断 五、CMV感染的分类和定义 · 活动性CMV感染的定义为血中出现PP65阳性白细胞，即出现抗原血症 · CMV病的定义为：抗原血症出现后7天之内出现下述症状者 白细胞≤3000/mm3； 血小板《75×109/L； 单核细胞增多，异淋> 10%; 视网膜炎； CXR示间质性肺炎和低氧血症，无其他原因解释者； 肝炎（肝功异常、肝脾肿大），无其他原因解释者； 移植物功能异常 大脑病变/神经系统异常/多神经炎 · 无症状感染：PP65抗原血症阳性，无上述临床表现。 (三)患者一般资料见表 性别 年龄X＋SD 总数 男 女 骨髓移植 自身免疫病 血液系统肿瘤 17 13 34.1±6.99 36 2 38 45.8±17.1 40 23 7 36.7±10.2 30 试验结果 骨髓移植 自身免疫病 血液病 总计 病人总数 36 40 30 PP65抗原阳性(%) 16 (44.4%) 17 (42.5%) 8(26.6%) CMV病 15/16 11/17 7/8 CMVIgM阳性 2/16 1/17 1/8 106 41(38.3%) 33(80.4%) 4(9.75%) 治疗情况及死亡率 治疗人数 死亡 (%) 未治疗人数 死亡(%) 骨髓移植 14 2 (14.2% ) 2 2 ( 100%) 自身免疫病 6 1 (16.6%) 11 6 (50%) 血液病 1 0 (0) 7 4 (67%) 计 21 3 (13.6%) 20 12 (60%) 3周内感染7.7％ 3周－2月感染54.8% 2个月以上感染38.46％ TBI与CMV感染的关系 TBI 未用TBI 计 pp65抗原阳性 10 3 13 pp65抗原阴性 1 22 23 计 11 25 36 P<0.01 接受TBI组的CMV感染发病率明显高于未接受组。 GVHD与CMV感染的关系 GVHD 无GVHD 计 pp65抗原阳性 13 3 16 pp65抗原阴性 4 16 20 计 17 19 36 P<0.01 发生GVHD组的CMV感染发病率明显高于未发生组。 FK506 用药 未用药 pp65抗原阳性 6 10 16 pp65抗原阴性 0 20 20 合计 6 30 36 P<0.01 使用FK506组CMV感染率明显高于未使用组。 次pp65抗原阳性细胞数与CMV疾病危险性 首次pp65抗原阳性细胞 CMV PP65抗原阳性细胞 计数 例数 1 1/1 2－3 5/5 4－10 5/6 >10 2/2 由于病例数少，无法进行COX‘S比例危险性分析. 系 一例行Allo-PBSCT的病人两次抗原血症与症状和IgM的时间关 IgM 症状 1 症状2 抗原血症 1 抗原血症2 移植后时间 首次pp65抗原血症出现于移植后59天，2天后出现喘憋、低氧血症，经更昔洛韦治疗13天后症状消失，抗原血症转阴，此时IgM才开始出现弱阳性，此后IgM持续阳性。移植后6个月，再次出现喘憋、低氧血症，查pp65抗原血症转阳, 经更昔洛韦治疗7天后症状消失、抗原血症转阴。 SLE患者中CMV感染者和CMV病者的年龄构成 感染/发病例数 <1年 1－5年 >5年 病程 感染/发病 感染/发病 发病5年以上的狼疮病人既往CTX 的用量与CMV感染的关系如表 CTX用量 >10克 <10克 总计 感染 0 7 7 非感染 5 1 6 总计 5 8 13 发病5年以上的狼疮患者既往CTX 的用量>10克组的发病率低于用量<10克组。 发病5年以上的狼疮患者既往CTX 的用量>10克组的发病率低于用量<10克组。 入院后是否接受激素和/或CTX冲击治疗对发病率的影响 冲击 未冲击 总计 P MP MP＋CTX CTX 感染 2 3 1 11 17 非感染 6 2 2 13 23 8 5 3 总计 16 24 40 P>0。05 入院后是否接受免疫抑制剂冲击治疗对发病率无显著影响。 发病组pp65抗原阳性细胞数与无症状感染组阳性细胞数比较 发病 无症状感染 <100 3 8 11 >100 5 1 6 总计 8 9 17 P< 0.01 发病组pp65抗原阳性细胞数>100/1.5x105PMNL，无症状感染组阳性细胞数<100/1.5 x 105PMNL。如下表 讨论 一pp65抗原血症检测 直接检测病毒蛋白的方法不受机体免疫功能的响，在检测免疫抑制病人的CMV活动性感染时尤其有用. 其检出率明显高于血清学方法 特点为快速（手工操作4-5小时）、敏感性高（活动性感染80-90%，CMV病99-100%）和较高的特异性（77-95%）、可以定量测试 用其指导治疗明显降低了死亡率 在骨髓移植中，可在发病早期诊断，亚临床感染的检出率偏低，应寻求更好的预测方法，或调整诊断标准 不能检测新毒株和抗原决定簇有变异的毒株 治疗后抗原血症转阴的病人少部分会复发，应结合更好的监控疗效的方法 一PP65检测在监测骨髓移植后CMV感染中的应用1 －－－早期诊断 * 骨髓移植后早期用IGM来诊断CMV感染将贻误治疗 * pp65抗原检测可用于早期诊断，甚至预测发病 * 如果能在骨髓重建的早期检测到对CMV的细胞免疫或体液免疫异常或抑制则能更准确地预测CMV感染。 病人的百分比 A 100％ B C 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 移植后天数 A 骨髓数量重建 B 配型完全符合者T细胞功能重建 C 配型不完全符合者T细胞功能重建 PP65检测在监测骨髓移植后CMV感染中的应用 2 － 骨髓移植后CMV感染的危险因素 CD34＋细胞分选 GVHD(FK506) TBI 合并其他病原体感染 PP65检测在监测骨髓移植后CMV感染中的应用3 －－治疗时间 细胞数多者和少者症状性感染的发病率是相近的 90％的症状性感染首次阳性抗原血症的PP65阳性细胞数 <10个/1.5×10（1－7） 我们认为这组病人只要发现阳性细胞即应治疗 首次pp65抗原阳性细胞数与CMV疾病危险性 首次pp65抗原阳性细胞 发病/活动性感染 计数 例数 1 1/1 2－3 5/5 4－10 5/6 >10 2/2 由于病例数少，无法进行COX‘S比例危险性分析. PP65在监测自身免疫病病人CMV感染中的应用 发热的自身免疫病病人出现CMV感染发病率和死亡率均很高，CMV感染可能是重要的致病原 较之白细胞减少机体免疫状态异常和这种异常未被有效控制，可能是病毒活动性复制的更主要的原因 阳性细胞数多少可以帮助判断和预测CMV症状性感染 CMV特异性IgM的阳性检出率非常低， CMV感染的危险因素 CMV感染组DRI评分大多>20 合并细菌或感染 病程长、未正规治疗的狼疮 三 PP65检测在监测血液肿瘤化疗后和再障病人中CMV感染中的应用 发热的血液肿瘤化疗后和再障病出现CMV感染发病率和死亡率均很高 幼稚细胞多，分化程度低，无抗病毒作用或病毒 作用很弱，可能是病毒活动性复制的更主要的原因 CMV特异性IgM的阳性检出率非常低 合并细菌或其他感染者CMV感染率高，感染可由多种炎症因子触发 结论 人巨细胞病毒pp65白细胞抗原血症检测可作为免疫功能低下者活动性CMV感染或HCMV疾病的预测指标 骨髓移植后或激素冲击/化疗后发热患者PP65抗原血症出现开始抗病毒治疗可明显降低死亡率。 CMV感染与多种临床危险因素有关 *