杞蓉药酒质量标准的研究

杞蓉药酒质量的研究 杞蓉药酒质量标准的研究 2004年2月 第26卷第2期 中成药 ChineseTraditionalPatentMedicine Feb.,2004 VO1.26NO.2 测定时,干扰大,重复性差,终点难以掌握.高效液 相色谱法具有重复性好,稳定性及精密度高的优点, 曾采用0.01moL.L磷酸二氢钾一甲醇(95:5)磷酸 调pH2.5l3J及乙腈一水一磷酸一十二烷基硫酸钠(38: 62:0.1:0.5)为流动相E4J,结果盐酸麻黄碱峰拖尾 严重.峰形较差,后改用了氰基键合硅胶为填充剂, 以乙腈一水一二正丁胺一磷酸(15:85:0.015:0.2)为流 动相,使盐酸麻黄碱峰峰形大大改善,分离度及理论 塔板数均符合要求,可简便,准确地控制该产品中盐 杞蓉药酒质量标准的研究 酸麻黄碱的含量. 参考文献 『1]中华人民共和国药典2000年版二部[s].北京:化学工业出版 社,2000:302. [2]杨蕾,贺建华,何夏秋,等.HPLC测定宣肺祛痰口服液中盐 酸麻黄碱的含量[J].中国药学杂志,2000,35(8):548 [3]梁宏,李文英,陈燕.高效液相色谱法测定清宣颗粒剂中麻黄 碱的含量[J].药物分析杂志,1999,19(4):276. [4]甘勇强.三蛇胆川贝糖浆中麻黄碱的鉴别与含量测定[J].中 草药,1999,30(7):508. 干国平,王中红,昝俊峰 (1.湖北中医学院,湖北武汉430061;2.成宁市药品检验所,湖北成宁437100) 关键词:杞蓉药酒;TLC;HPLC;补骨脂素;异补骨脂素;含量测定 摘要:目的:建立和完善杞蓉药酒(当归,补骨脂,制何首乌,枸杞子,红花等)质量标准. 方法:采用TLC法鉴别了当归, 补骨脂,制何首鸟,枸杞子,红花5味药,采用HPLC法测定了补骨脂素和异补骨脂素 的含量.结果:补骨脂素平均加样 回收率为98.7%,RSD为2.18%,=5;异补骨脂素平均加样回收率为 100.8%,RSD=1.67%,=5.结论:本方法简 便,快速准确,可作为该制剂的质量标准. 中图分类号:R927.2文献标识码:A文章编号:1001—1528(2004)02—0113—03 StudyonqualitystandardforQirongMedicinalWine GANGuo—ping,WANGZhong—hong, (1.HubeiCollegeofTCM.Wuhan430061,China;2 ZANJun—feng XianningInstituteforDrugControl,Xianning437100,China) KEYWoRDS:QirongMedicinalWine;psoralen;isopsoralen;TLC;HPLC ABSTRACT:AIM:ToEstablishthestandardofQirongMedicinalWine(RadixAngelicaeSinensis.Fructus Psoraleae,RadixPolygoniMultifloriPreparata,FructusLyciiandFlosCarthami.etc.).METHoDS:Radix AngelicaeSinensis,FructusPsoraleae,RadixPolygoniMultifloriPreparata,FructusLyciiandFlosCarthamiin thepreparationwereidentifiedbyTLC.Psoralenandi~psoralenweredeterminedbyHPLC.RESULTS:The averagerecoveriesofpsoralenandisopsoralenwere98.7%and100.8%,respectively.,RSDwere2.18%(= 5)and1.67%(=5),respectively.CONCLUSION:Themethodsaresimple,accurateandreproducible. 杞蓉药酒由枸杞子,补骨脂,制何首乌等11味 药组成,具有补益肝肾,养血明目之功效,原标准…1 无鉴别及含量测定项,为了更好地控制该制剂的质 量,本实验采用TLC法鉴别了当归,补骨脂,制何首 乌,枸杞子,红花等五味药,参照文献方法【2J,采用 HPLC法测定了制剂中补骨脂素和异补骨脂素的含 量.本方法简便,快速准确,可作为该制剂的质量标 准. 1仪器与试药 岛津LC一10AT高效液相色谱仪,浙江大学 N2000在线色谱工作站,HyPersilC一18(150mm× 4.6ram,5m)色谱柱;对照药材当归(批号927一 收稿日期:2003—01-29 作者简介:干国平(1965,),男,湖北省武穴市人,副教授,从事新药开发及质量标准 研究.电话:027—68889109. 113 2004年2月 第26卷第2期 中成药 ChineseTraditionalPatentMedicine Feb.,2004 VO1.26NO2 9907),枸杞子(批号1072—9901),红花(批号907— 9204);对照品补骨脂素(批号739—8802),异补骨脂 素(批号738—8802),大黄素(批号756.9908)均为中 国药品生物制品检定所提供.杞蓉药酒:市售;其他 试剂均为分析纯. 2鉴别部分 2.1当归及补骨脂的鉴别取本品50mL,加石油 醚(30,60?)提取2次,每次30mL,合并石油醚 液,挥干,残渣加醋酸乙酯1mL溶解,作为供试品溶 液.另取当归对照药材1g,加石油醚(30,60?) 3mL,密塞,浸泡30min,时时振摇,取上清液作为对 照药材溶液.再取补骨脂素,异补骨脂素对照品,加 醋酸乙酯制成每1mL各含0.2rag的混合溶液,作 为对照品溶液.吸取供试品溶液4L,对照药材溶 液2L,对照品溶液2L,分别点于同,硅胶G薄层 板上,以正己烷一醋酸乙酯(8:2)为展开剂,展开,取 出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视.供试品色谱 中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的 荧光斑点;在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜 色的荧光斑点,再喷以5%氢氧化钾甲醇溶液后,斑 点荧光增强.阴性对照样品均无干扰.见图1. 22何首鸟的鉴别取2.1项下的供试品溶液. 另取大黄素对照品,加甲醇制成每1mI含1mg的 溶液,作为对照品溶液.吸取上述2种溶液各5L, 分别点于同,硅胶G薄层板上,以石油醚(30, 60~C)一醋酸乙酯一甲酸(15:5:1)的上层溶液作为展 开剂,展开,取出,晾干.供试品色谱中,在与对照品 色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,阴性对照样 品无干扰.见图2. 图1当归,补骨脂的T1LC 图谱 1缺补骨脂阴性对照2补骨脂 素及异补骨脂素对照品3供试 品4当归对照药材,5缺当归阴 性对照 ? oo 123 图2何首乌的TLC图 谱 1大黄素对照品2供试品 3缺何首乌阴性对照 2.3枸杞子的鉴别取本品50mL,水浴蒸至无乙 114 醇味,加水50mL使溶解,加氯仿提取2次,每次 25mL,合并氯仿液,蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解, 作为供试品溶液.另取枸杞子对照药材2g,加水 30mL,加热回流提取30min,冷却,滤过,滤液加氯 仿20mL提取,分取氯仿液,蒸干,残渣加甲醇1mL 使溶解,作为对照药材溶液.吸取上述2种溶液各 以氯仿一甲醇 4L,分别点于同一硅胶G薄层板上, (9:1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯 (365nm)下检视.供试品色谱中,在与对照药材色 谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,阴性对照 样品无干扰.见图3. 2.4红花的鉴别取23项下氯仿提取过的水溶 液,加用水饱和的正丁醇提取2次,每次20mL,合 并正丁醇液,加用正丁醇饱和的水20mL提取,弃去 水层,取正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇1mL使溶解, 作为供试品溶液.另取红花对照药材02g,加乙醇 20mL,密塞,冷浸15rain,时时振摇,滤过,滤液蒸 干,残渣加水40mL溶解,滤过,自"加用水饱和的正 丁醇提取2次"起,同法制备对照药材溶液.吸取上 述2种溶液各6L,分别点于同一硅胶G薄层板上, 以醋酸乙酯一丙酮一甲酸一水(5:5:1:1)为展开剂,展 开,取出,晾干.供试品色谱中,在与对照药材色谱 相应的位置上,显相同颜色的斑点,阴性对照样品无 干扰.见图4. 图3枸杞子的TLC图谱图4红花的TLC图谱 1缺枸杞子阴性对照2供试1红花对照药材2供试品3 品3枸杞子对照药材缺红花阴性对照 3含量测定 3.1色谱条件与系统适用性试验HyPersilC一18 (150mm×4,6ram,5m)色谱柱;流动相:甲醇一水 (50:50);流速09mL?rain;柱温:室温;检测波长 245nm;AUFS004,进样量5L.理论板数按补骨 脂峰计算,不低于6000,补骨脂素峰和异补骨脂素 峰分离度大于1.5. 3.2对照品溶液的制备精密称取补骨脂素,异补 骨脂素对照品适量,加甲醇制成每1mL各含32g 2004年2月 第26卷第2期 中成药 Chin~eTraditionalPatentMedicine Feb.,2004 Vo1.26NO.2 的混合溶液,即得. 3.3线性试验取对照品溶液2,4,6,8,10L,分 别进样,测定峰面积值,将各自的峰面积值与各自的 含量进行线性回归,得回归方程:补骨脂素,Y= 2.35×l0X+3467.1,r=0.9999,=5,线性范围 0.06992,0.3496~g;异补骨脂素Y=1.89×10.X +8627.5,r=0.9998,=5,线性范围0.07424, 0.3712~g. 3.4空白试验精密吸取不含补骨脂的空白对照 样品5f』I,进样并测定,结果,空白样品(阴性对照) 色谱中,在与对照品色谱峰相同保留时间处,无吸收 峰,即空白样品无干扰,见图5. 图5供试品,对照品及空白样品的HPLC谱图 A.供试品B.对照品C空白样品1补骨脂紊2异补骨脂 素 3.5精密度试验取同一份对照品溶液,连续进样 5次,结果,补骨脂素峰面积平均值为483279,RSD 为0.48%;异补骨脂素峰面积平均值为431525, RSD为0.67%.明仪器性能良好. 3.6稳定性试验取供试品溶液6L,每隔1h进 样1次,连续进样6次,结果,补骨脂素峰面积平均 值为49431l,RSD为0.73%;异补骨脂素峰面积平 均值为428008,RSD为0.77%.表明供试品溶液 在5h内稳定. 3.7重复性试验按3.9项下精密吸取同一批号 的样品5L进样,测定,补骨脂素平均含量为 34.16g?"1I,RSD:1.25%,,2=5;异卒骨脂素 平均含量为38.05ug?mI,RSD=2.38%,=5. 3.8加样回收率试验精密量取已知浓度的样品 5mL,置于10mL量瓶中,精密加入对照品溶液补骨 脂素174.8ug?mL,异补骨脂素185.6g?mL|1) 1mL,加甲醇至刻度,摇匀,离心,取上清液5L,进 样,测定.结果补骨脂素(I)平均回收率为98.7%, RSD=2.18%(=5);异补骨脂素(?)平均回收率 为100.8%,RSD=1.67%(n=5),见表l. 表1加样回收率试验结果 3.9样品测定取本品适量,离心,精密吸取上清 液5L,进样,测定3批样品,结果见表2. 表23批样品含量测定结果 4结果与讨论 补骨脂素于209nm,245nm,290nm波长处分别 有最大吸收;异补骨脂素于205nm,246nm,298nm 波长处分别有最大吸收.因二者在245nm处有较 大吸收,灵敏度高,可减少取样量,减少对柱污染,故 本实验选择245nm为检测波长. 本实验在湖北中医学院中药资源与中药化学重点实验 室完成,特此致谢! 参考文献: [1]卫生部药品标准,中药成方制剂[s].第十三册.124 [2]邓开英.HPLC测定更年平胶囊中补脂骨素和异补骨脂素的 含量[J].中成药,2001.23(9):643. 115