植物病害标本采集、制作和鉴定

实训十、植物病害标本采集、制作和鉴定 一、目的要求   通过采集和制作标本，了解植物病害标本采集要求，学会标本的采集与记录，掌握植物病害标本的制作方法，进一步巩固病害知识，每人抽签完成1份病害标本。  二、材料和用具   标本夹、吸水纸、塑料袋、纸袋、标签、铅笔、记号笔、小刀、枝剪、手锯、标本缸、酵酸铜、硫酸铜、95％乙醇、甲醛溶液、亚硫酸、甘油、蒸馏水等。  三、与方法 （一） 病害标本的采集   1  标本采集基本要求  采集完整的标本，最好是先摄影然后再压制或浸渍保存,拍照越清晰越好，要求拍正常植株和病害部位。每号标本，样本数量应至少采集2-3份。 2 取样部位 （1）标本上有子实体的应尽量在老叶上采集 因为它比较成熟，许多真菌有性阶段的子实体都在枯死的枝叶上出现，而无性阶段子实体大多在活体上可以找到。 （2）柔软多汁的子实体或果实材料，则应采集新发病的幼果。 （3）病毒病应尽量采集顶梢与新叶。 （4）线虫病害标本应采病变组织，为害根部的线虫病害标本除采集病根外还应采集根围土壤。 （5）表现蔫萎的植株要连根挖出，有时还要连同根际的土壤等一同采集。 （6）对于粗大的树枝和植株，则宜削取一片或割取一截。 （7）如果病害在叶、果实和枝干上都有表现时，尽量采集全面。 （8）寄生类应和寄主一起采集。病害症状很特殊病害，要连同植株的枝叶或花一起采集，以便鉴、定其寄主名称。  3 标本数据记录和标本编号 要求记录准确、简要、完整。完整的记录与标签同样十分重要，要有寄主名称、采集日期与地点、采集者姓名、生态条件和土壤条件等。 4 标本采集 方法 （1）枝干类、根部病害标本的采集 取其得病部位，用锯、枝剪或高枝剪采取，切勿用手折断，影响标本的美观，对纤维长而强韧的枝干等，尤应注意。 （2） 叶部病害标本的采集 大型叶植物，它们的叶子和花序均很大，采集标本时可采一部分或分段采集，以同株上幼小叶加上花果组成一份标本（同时标明叶实际大小）；或把叶、叶柄各自分段取其一部分； 对于像菟丝子、列当这样的寄生植物应连同寄主一起采集，并记录寄主的名称。  （3）肉质或多汁植物（花、果实）病害标本的采集 应将其纵切或横切，有时需将其内部的组织挖出，还要考虑是否将一半的材料浸泡在保存液中保存。在野外干燥时，要在切开的茎表面洒大量食盐，用盐包裹的材料应置于夹有多层报纸的标本夹中，24小时后要把浸有盐水的报纸移去，或者用开水将材料烫死，然后放置在薄纸板－铝板的三明治层中烘干。 （二）病害标本的制作  从田间采回的标本，除一部分用作分离鉴定外，对于典型的病害症状最好是先摄影然后再压制或浸渍保存。压制或浸渍的标本尽可能保持其原有性状，微小的标本可以制成玻片，如双层玻片、凹穴玻片或用其它小玻管小袋收藏。  （三） 病害标本的保存  1 干燥法  适用于一般含水较少的茎、叶等病害标本的制作，最简单、最经济、应用最广。 将采集的标本夹在吸水纸中，同时放入写有采集地点、日期和寄主名称的标签，再用标本夹压紧后日晒或加温烘烤，使其干燥，干燥愈快愈能保持原有的色泽，标本质量亦愈高。夏季采的标本在温湿度高的情况下，容易发霉变色，换纸宜勤，通常在压制的最初三、四天每天换纸l－2次（视标本含水多少，及温湿度情况而定），以后每二、三天换一次，至完全干燥为止。在第一次换纸的同时，应将标本加以整理，因经初步干燥，标本变软易于铺展。烟草、蚕豆、梨、马铃薯的茎叶等很易发黑变色，都是很难保存颜色的标本，在制作过程中特别要注意快速干燥。需要保持绿色的干制标本，可先将标本在2－4％硫酸铜溶液中浸24小时，或经过醋酸铜溶液（配方及方法见浸渍法中醋酸铜的浸渍法）处理后再压制。也可以在叶面抹一层液体石蜡后再压，可以保持鲜绿色2-3天。  2  浸渍法  适用于 多汁的病害标本， 如果实、块根或担子菌的子实体等，必须用浸渍法保存。浸渍液体种类很多，有纯属防腐性的，亦兼有保持标本原色的，现介绍数种常用及效果较好的方法。  （1）防腐浸渍法：此类浸渍法仅能防腐而没有保色作用，如萝卜、甘薯等，不要求保色的标本，洗净后直接浸于以下溶液中。  ①5％福尔马林浸渍液。  ②亚硫酸浸渍液：l000ml水中加5%-6%亚硫酸15ml（一般市售的亚硫酸含量为5—  6％）或用亚硫酸钠10.5g，浓硫酸8ml，水500ml配成混合液。   （2）保持绿色标本的浸渍液及浸泡法：    ①醋酸铜保（绿）色浸渍法：往50％的醋酸中逐渐加入醋酸铜结晶溶解至饱和作为母  液（大约1000ml50％的醋酸中加入l5g醋酸铜即可达饱和），使用时兑水稀释1－4倍（稀  释倍数视标本颜色而异，色深者稀释倍数可小些）。将此液加热煮沸，投入标本，开始时标本的绿色被漂去，再经数分钟后标本又恢复绿色，此时立即将标本取出，用清水洗净，保存于5％的福尔马林溶液中，此法称为热处理。冷处理的办法是将标本置于上述稀释液中浸3小时后标本退色，再经72小时后标本恢复绿色，此时将标本取出，取水冲净，保存于5％的福尔马林溶液中。此法保持色泽时间较长，其保色原理大致是铜离子与叶绿素中的镁离子发生置换作用。所以，溶液经多次处理标本后，铜离子会逐渐减少。如要继续使用，应补入适量的醋酸铜。此法保存标本往往略带蓝色，与植物标本原色稍有出入。  ②硫酸铜保（绿）色浸渍法：用清水冲洗标本，直接浸泡在5％的硫酸铜溶液中1—7天，待标本略带褐色时取出用清水漂洗，去除标本表面多余的硫酸铜溶液，然后保存在亚硫酸浸渍液中。  ③保存黄色和桔红色标本的浸渍液：保存杏、梨、柿、红辣椒等果实标本用亚硫酸浸  渍液，亚硫酸浸渍液有漂白作用，因此使用时要注意浓度，一般用1 ％即可（浸杏时浓度可再稀些），因浓度太小，防腐力不够，可加入适量酒精。为了防止果实崩裂，可加入少许甘油。  ④保存红色标本的浸渍液：保存标本红色较难，因为红色是水溶性的花青素，很难保存。常用Hesler浸渍液保存，成分是：氯化锌50g，福尔马林25ml，甘油25ml，水1000ml。  将氯化锌溶于热水中，加入福尔马林，如有沉淀，用其澄清液。此溶液适用于由于花青素  而显红色的标本，如苹果、番茄等。    （四） 标本的保存  制成的标本，经过整理和登记，然后依一定的系统排列和保藏。    菌类标本一般按分类系统排列，要有两套索引卡片，一套是寄主索引，一套是菌类索引，以便于寻拽和整理。  标本室（柜）要保持干燥、潸浩，并要定期施药以防虫蛀与霉变。    1 标本盒保藏 教学和示范用的干制病害标本，采用玻面纸盒保藏比较方便，玻面纸盒，的适宜大小为20×28×2 cm。纸盒中先铺一层棉花，并在棉花中加少许樟脑粉以驱虫。最后在棉花上放上标本和标签。 2 标本瓶保藏 浸渍的标本放在标本瓶内保藏，为了防止标本下沉和上浮，可绑在玻璃条上然后再放入标本瓶。标本瓶的口盖好后滴加石蜡封口，然后贴上标签。  3 纸套内保藏 用牛皮纸叠成15×33cm的纸套，大量保存的干制标本，大多采用纸套保藏，将标本装入纸套内，并在纸套上贴好标签，放在标本柜中即可。             四、作业：制作标本及详细资料。 植物病害标本野外采集记录卡片 标本号        96                        采集日期  2013-06-8                        采集地点    重庆市垫江县芙蓉镇牡丹园                                                生态环境  阳光充足，土壤深厚肥沃 ，光热条件较好，地形为坡地，排水条件较好。            寄主名称（通用名及学名）  芍药                                              病名或学名            芍药红斑病                                                    发病部位           叶片                                                                      症状描述             叶背出现针尖大小的凹陷斑点，不规则形的病斑，直径约5-24mm，叶边缘的病斑多为半圆形。叶片正面病斑上有淡褐色的轮纹，不太明显。                                                                            采集人          李倩                      鉴定人          张绍兵              芍药红斑病 【分布与危害】 又称芍药褐斑病，是芍药最常见的病害。国内芍药栽植均有发生。红斑病使芍药叶片早枯，连年发生则削弱植株的生长势，植株矮小，花少，乃至全株枯死，严重影响了切花产量和“白芍”的产量。该病害还危害牡丹。 【症状识别】 红斑病主要危害叶片，也侵染枝条、花、果壳等。早春叶片展开即可受到侵染，叶背出现针尖大小的凹陷斑点，逐渐扩大成近圆形或不规则形的病斑，直径约5-24mm，叶边缘的病斑多为半圆形。叶片正面病斑上有淡褐色的轮纹，不太明显。病斑相互连接成片，使整个叶片皱缩、枯焦，叶片常破碎。幼茎及枝条上的病斑长椭圆形，红褐色，病斑长3-13mm；叶柄基部或枝干分叉处发病呈黑褐色的溃疡斑，病部容易折断。叶柄上的病斑和茎上的相似；萼片、花瓣上的病斑均为紫红色小斑点。 【病原】 红斑病的病原菌是牡丹枝孢霉，属半知菌亚门，丝孢菌纲，丛梗孢目，枝孢菌属。 【发病规律】 病原菌主要以菌丝体在病叶、病枝条、果壳等残体上越冬；在南京地区，由于叶片的腐烂，病原菌不能在叶片上越冬。病原菌自伤口侵入或直接侵入，但伤口侵入发病率更高。在自然界，下雨时泥浆的反溅使茎基部产生微伤口，也有利于该病原菌的侵入，叶片等处茸毛的脱落，也可以造成微伤口。潜育期短，一般6天左右，但病斑上子实层的形成时间则很长，大约病斑出现1.5-2个月左右才产生子实层，因此再侵染次数极少。在生长季节该病均可发生。在南京地区，3月下旬开始发病，6-7月份为发病盛期；北京地区则4月底至5月初才开始发病，7-8月份为发病盛期。 【防治措施】 1、减少侵染来源。秋季割除芍药的地上部分，残茬越短越好，并及时处理病残体。休眠期发病重的地块喷洒波美3度的石硫合剂，或在早春展叶前喷洒50%多菌灵可湿性粉剂600倍液。 2、加强栽培管理，控制病害的发生。株丛过大要及时分株移栽，栽植密度不要过大，以利通风透光，降低田间小气候的湿度；肥水管理要好；及时清除田间杂草；种植圃早春覆盖塑料薄膜，对病残体上越冬菌源的传播起到隔离作用，能大幅度地降低发病率。 3、化学防治。在芍药展叶后、开花前，喷洒50%多菌灵可湿性粉剂1000倍液；落花后可交替喷洒65%代森锌可湿性粉剂500倍液和1%波尔多液与0.1%多菌灵。7-10天喷1次，雨后重喷。 4、栽培抗病品种，并加强养护管理，保持寄主的抗病性。 参考文献： [1]Morley,Joan.Plangt. Ann Arbor: The University of Michigan Press, 1998:138—145. [2武三安.园林植物病虫害防治.北京:中国林业出版社, 2006.8 [3]陈玉琴,汪霞. 花卉病虫害防治[M]. 浙江: 浙江大学出版社, 2012:206. [4]吴时英.  城市森林病虫害图鉴[M]. 上海: 上海科学技术出版社, 2005:247.                           正常叶                                  病叶