罗汉果止咳糖浆起草说明

罗汉果止咳糖浆起草说明 罗汉果止咳糖浆起草说明 【名称】 罗汉果止咳糖浆采用主要药味缩写加功效加剂型命名，汉语拼音为Luohanguozhiketangjiang。 【处方】 见正文 【制法】 见正文。 【性状】 根据多批中试样品内容物描述。内容物为棕黄色至棕色的澄清液体;味甜、微苦、凉。 【鉴别】 (1) 罗汉果的TLC鉴别:除正文所使用的展开剂外，以正丁醇-甲醇-水(8:2:3)为展开剂进行验证，亦得到相似分离效果。见图1、2。 图1 罗汉果止咳糖浆中罗汉果TLC色谱 图2 罗汉果止咳糖浆中罗汉果TLC色谱(比对) 1.罗汉果的阴性对照液;2、3、4.供试品溶液; 1.罗汉果的阴性对照液;2、3、4.供试品溶液 5.罗汉果对照药材溶液;6.罗汉果皂苷V对照 5.罗汉果对照药材溶液;6.罗汉果皂苷V对照 品溶液。展开剂。正丁醇-乙醇-水(8:2:3)(放 品溶液。展开剂。正丁醇-甲醇-水(8:2:3) 置过夜，取下层液);显色剂:2,香草醛的10, (放置过夜，去下层液);显色剂:2%香草醛的 硫酸乙醇溶液 10%硫酸乙醇溶液 (2)枇杷叶的TLC鉴别: 枇杷叶所含熊果酸为其主要有效成分，以熊果酸对照品及枇杷叶对照药材(购自中国食品药品生物制品检定研究院)作为对照进行薄层色谱鉴别，结果阴性样品无干扰。除正文所使用的展开剂外，以乙苯-丙酮(5:1)为展开剂进行验证，亦得到相似分离效果。见图3、4。 图3 罗汉果止咳糖浆中枇杷叶TLC色谱 图4 罗汉果止咳糖浆中枇杷叶TLC色谱(比对) 1.枇杷叶的阴性对照液;2、3、4.供试品溶液; 1.枇杷叶的阴性对照液;2、3、4.供试品溶液; 5枇杷叶对照药材溶液;6.熊果酸对照品溶液。 5枇杷叶对照药材溶液;6.熊果酸对照品溶液。 展开剂。甲苯-丙酮(5:1)(放置过夜，取下层 展开剂。乙苯-丙酮(5:1)(放置过夜，取下层 液);显色剂:10,硫酸乙醇溶液 液);显色剂:10,硫酸乙醇溶液 (3)桑白皮的TLC鉴别:以桑白皮对照药材(购自中国食品药品生物制品检定研究院)作为对照进行薄层色谱鉴别，结果阴性样品无干扰。除正文所使用的展开剂外，以甲苯-乙酸乙酯 -甲酸(5:2:1)为展开剂进行验证，亦得到相似分离效果。见图5、6。 图5 罗汉果止咳糖浆中桑白皮TLC色谱 图6 罗汉果止咳糖浆中桑白皮TLC色谱(比对) 1.桑白皮的阴性对照液;2、3、4.供试品溶 1.桑白皮的阴性对照液;2、3、4.供试品溶液;5. 液;5.桑白皮对照药材溶液。展开剂。醋 桑白皮对照药材溶液。展开剂。甲苯–乙酸乙酯 酸 –甲酸(5:2:1)(放置过夜，取下层液) (4)白前的鉴别:取本品粗粉2g，加70%乙醇10ml，加热回流1小时，滤过。取滤液1ml，蒸干，残渣加醋酐1ml使溶解，再加硫酸1滴，柳叶白前显红紫色，放置后变为乌绿色;芜花叶白前显棕红色，放置后不变色。 (5)百部的鉴别:取本品粉末5g，加70%乙醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸去乙醇，残渣加浓氨试液调节pH值至10~11，再加三氯甲烷5ml振摇提取，分取三氯甲烷层，蒸干，残渣加1%盐酸溶液5ml使溶解，滤过。滤液分为两份:一份中滴加碘化铋钾试液，生成橙红色沉淀;另一份中滴加硅钨酸试液，生成乳白色沉淀。 (6)桔梗的TLC鉴别:以桔梗对照药材(购自中国食品药品生物制品检定研究院)作为对照进行薄层色谱鉴别，结果阴性样品无干扰。除正文所使用的展开剂外，以二氯甲烷-乙醚(3:1)为展开剂进行验证，亦得到相似分离效果。见图7、8。 图7 罗汉果止咳糖浆中桔梗TLC色谱 图8 罗汉果止咳糖浆中桔梗TLC色谱(比对) 1.桔梗的阴性对照液;2、3、4.供试品 1.桔梗的阴性对照液;2、3、4.供试品溶液;5. 溶液;5.桔梗对照药材溶液。展开剂。 桔梗对照药材溶液。展开剂。二氯甲烷–乙醚 三氯甲烷–乙醚(2:1);显色剂:10, (3:1);显色剂:10,硫酸乙醇溶液 硫酸乙醇溶液 (7)薄荷素油的TLC鉴别:以薄荷素油对照物(购自中国食品药品生物制品检定研究院)作为对照进行薄层色谱鉴别，结果阴性样品无干扰(置紫外灯下观察)。除正文所使用的展开剂外，以乙苯-乙酸乙酯(19:1)为展开剂进行验证，亦得到相似的分离效果。见图9、10。 图9 罗汉果止咳糖浆中薄荷素油TLC色谱 图10 罗汉果止咳糖浆中薄荷素油TLC色谱(比对) 1.薄荷油的阴性对照液;2、3、4.供试品溶液; 1.薄荷油的阴性对照液;2、3、4.供试品溶液; 5.薄荷素油对照提取物。展开剂。甲苯-乙酸乙 5.薄荷素油对照提取物。展开剂。乙苯-乙酸乙 酯(19:1)(放置过夜，取下层液);显色剂: 酯(19:1)(放置过夜，取下层液);显色剂: 茴香醛试液 茴香醛试液 【检查】 (1) 相对密度:依据《中国药典》(2010年版一部附录VII A)相对密度测定法进行测定，具有如下:取洁净、干燥并精密称定重量的比重瓶，装满供试品(温度应低于20?或各品种项下的温度)后，装上温度计(瓶中应无气泡)，置20?(或各品种项下规定的温度)的水浴中放置若干分钟，使内容物的温度达到20?(或各品种项下规定的温度)，用滤纸除去溢出侧管的液体，立即盖上罩。然后将比重瓶自水浴中取出，再用滤纸将比重瓶的外面擦净，精密称定，减去比重瓶的重量，求得供试品的重量后，将供试品倾去，洗净比重瓶，装满新沸过的冷水，再照上法测得同一温度时水的重量， 按供试品的密度=供试品重量/水重量 计算，即得。均不低于1.13。 (2) PH值:依据《中国药典》(2010年版一部附录? G)pH值测定法进行测定，均符合规定。 (3)装量差异:依据《中国药典》(2010年版一部附录I H)糖浆剂通则进行检查，具体方法如下:取供试品5支，将内容物分别倒入经标化的量入式量筒内，尽量倾净。在室温下检视，每支装量与标示装量相比较，少于标示装量的不得多于1支，并不得少于标示装量的95,。多剂量灌装的糖浆剂，照最低装量检查法(附录? C)检查，均符合规定。 (4)微生物限度:依据《中国药典》(2010年版一部附录?? C)微生物限度检查法进行检查，均符合规定。 【含量测定】 罗汉果为本方的君药，罗汉果皂苷V为其主要有效成分之一，故选择罗汉果皂苷V作为控制本品质量的有效成分，参考《中国药典》(2010版一部)罗汉果药材的测定方法，建立了高效液相色谱法， 用蒸发光散射检测器测定本品中罗汉果皂苷V含量的方法，具有分离效果好、灵敏度高、准确度好等优点 1.仪器与药品 仪器:Waters-2695高效液相色谱仪，Alltech蒸发光散射检测器(ELSD)，色谱柱以十八烷基键合相为填充剂Diamonsil(200mm*4.6mm，5um)。 试剂:乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。 罗汉果皂苷V由中国食品药品生物制品检定研究院提供(供含量测定用)，在选定色谱条件分离后，按归一化法计算含量为99.5%以上。使用前105?干燥至恒重。 2.色谱条件 Diamonsil(200mm*4.6mm，5um)色谱柱，ODS预柱;乙腈-水(23:77)为流动相;流速:1ml/min;ELSD参数:飘移管温度为100?，N流速为2.1/min;柱温为35?。 2 在此色谱条件下，罗汉果皂苷V和样品中其他组分色谱峰基线分离，与其相邻色谱峰的分离度大于1.5;按罗汉果皂苷V计算，理论塔板数(N)为3000以上;拖尾因子(T)为1.03;同时取阴性供试品溶液进样，结果明，阴性供试品在罗汉果皂苷V色谱峰位置处于无相应峰出现。其色谱图分别见图11、12、13。 图11 对照品色谱图 图12 供试品色谱图 图13 阴性样品色谱图 3.供试品溶液的制备(见正文) (1)提取法考察: 精密称取本品0.5g，加甲醇50ml，超声处理20min和索氏提取器提取2小时，滤过，滤液蒸干，以下操作方法同供试品溶液制备。结果见表1。 表1 不同提取方法罗汉果皂苷V含量测定结果(n=3) 提取方法 面积1 面积2 面积3 罗汉果皂苷 V含量 (mg/g) 超声 索氏 (2) 提取时间考察 精密称取本品0.5g，加甲醇50ml，分别超声1小时、2小时、3小时，滤过，滤液蒸干，以下操作同供试品溶液制备。结果见表2。 表2 不同提取时间罗汉果皂苷V含量的测定结果 时间(小时) 面积1 面积2 面积3 罗汉果皂苷 V含量 (mg/g) 1 2 3 (3) 提取溶剂的考察:精密称取本品内容物0.5g，分别加甲醇、水和70%乙醇各50ml，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，以下操作同供试品溶 液的制备。结果见表3。 表3 不同提取溶剂罗汉果皂苷V含量测定结果(n=3) 溶剂 面积1 面积2 面积3 罗汉果皂苷 V含量 (mg/g) 水 70%乙醇 甲醇 4.线性范围的考察 精密称取经105?干燥2小时的罗汉果皂苷V对照品2.5mg，置10ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取 2ul、4ul、6ul、8ul、10ul、12ul，分别进样分析。以进样量(ug)的对数值为横坐标，峰面积A的对数值为纵坐标，在2~12ug，lgA与lgW呈良好的 线性关系。回归方程为lgA=1.5698lgW+5.6738，r=0.9999(n=6)，因为曲线不过原点，所以样品测定采用外标二点法计算。见表4及表5。 表4 罗汉果皂苷V对照品测定结果 进样量2 4 6 8 10 12 (ug) 峰面积 表5 罗汉果皂苷V对照品测定结果对数值 进样量0.3010 0.6020 0.7781 0.9031 1 1.0792 (ug) 峰面积 5.精密度试验 (1)重复性试验:取同一批(批号:050327)样品2.0g，共六份，精密称定，按正文方法制备六份供试品溶液，分别测定含量，结果见下表 RSD点样位置 含量 % 1 2 3 4 5 6 (2)中间精密度:取本品，由两位实验者分别在不同时间，不同仪器上测试，测定结果见下表 含量 仪器 第一人第一天 第二人第二天 第三人第三天 第四人第四天 RSD% 6.专属性考察 按以上色谱条件，分别测试罗汉果皂苷V对照品、供试品及阴性样品图谱，结果表明，阴性样品在罗汉果皂苷V对照品色谱峰相应位置无色谱峰，阴性无干扰。见图14、15、16。 图14 对照品色谱图 图15 供试品色谱图 图16 阴性样品色谱图 7.稳定性试验 取样品供试液(批号:050223)与不同时间，分别进样20ul，测得样品中罗汉果皂苷V峰面积的RSD<2%，结果见表8。 表8 稳定性试验结果(n=2) 时间(小时) 面积 RSD% 0 2 4 6 8 12 8.回收率试验 精密称定已知含量的样品(批号:050214)约1.1g，分别加入对照品溶液(1.000mg/ml)0.3ml、0.4ml、0.5ml，按上述供试品制 备方法及色谱条件，计算回收率，结果见表9。 表9 加样回收率试验结果 编号 样品样品加罗测得回收平均RSD( 重含量汉果量率回收%) (mg(mg皂苷(mg(%) 率 ) ) V) (%) (mg ) 1 2 3 4 5 6 9.样品测定 分别精密吸取对照液5ul、10ul与样品供试液20ul，按上述色谱条件测定，结果见表10。 表10 样品中罗汉果皂苷V含量测定结果(n=3) 批号 罗汉果皂苷V含量RSD(%) (mg/g)(n=3) 050811 050814 050817 根据上述实验结果，考虑到药材的来源，以及制剂生产、储藏等因素，本品每1ml含罗汉果皂苷V不得少于0.2mg。 【功能与主治】祛痰止咳。用于感冒咳嗽及支气管炎。 【用法与用量】口服，一次10,15ml，一日3次。 【贮藏】依据糖浆剂的贮藏要求确定为密封，置阴凉处贮存。