分光光度法同时测定维生素C和维生素E

分光光度法同时测定维生素C和维生素E分光光度法同时测定维生素C和维生素E一(实验目的学习在紫外光谱区同时测定双组分体系——维生素C和维生素E。二(实验原理维生素C(抗坏血酸)和维生素E(α-生育酚)在食品中能起抗氧化剂作用，即它们在一定时间内防止油脂变性。维生素C是水溶性的，维生素E是酯溶性的，它们都能溶于无水乙醇，因此能在同一溶液中，用于可见分光光度法测定双组分相同的原理，在紫外光区测定它们。三(仪器与试剂1.仪器紫外-可见分光光度计，石英吸收池一对，50mL容量瓶9只，1000mL容量瓶2只，10mL吸量管2只。2.试剂维生素C(抗坏血酸)，维生素E(α-生育酚)，无水乙醇。四(实验内容与操作步骤1.准备工作(1)清洗容量瓶等需要使用的玻璃仪器，晾干待用。(2)检查仪器，开机预热20min，并调试至正常工作状态。2.配制系列溶液(1)配制维生素C系列标准溶液:称取0.0132g维生素C，溶于无水乙醇中，定量转移入1000mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线，摇匀。此溶液浓度为7.50×10ˉ5mol/L。分别吸取上述溶液4.00mL，6.00mL，8.00mL，10.00mL于4只洁净干燥的50mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线，摇匀。(2)配制维生素E系列标准溶液:称取维生素E(α-生育酚)0.0488g，溶于无水乙醇中，定量转移入1000mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线，摇匀。此溶液浓度为1.13×10ˉ4mol/L.分别吸取上述溶液4.00mL，6.00mL，8.00mL，10.00mL于4只洁净干燥的50mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至标线，摇匀。(3)绘制吸收光谱曲线以无水乙醇为参比，在220,320nm范围绘制维生素C和维生素E的吸收光谱曲线，并确定入射光波长λ1和λ2。(4)绘制工作曲线以无水乙醇为参比，分别在λ1和λ2处测定维生素C和维生素E列标准的各溶液的吸光度并记录测定结果和实验条件。(5)试验的测定取未知液5.00mL于50mL容量瓶中，用无水乙醇稀至标线，摇匀。在λ1和λ2分别测出吸光度Aλ1和Aλ2。(6)结束工作?实验完毕，关闭电源。取出吸收池，清洗晾干后入盒保存。?清理工作台，罩上仪器防尘罩，填写仪器使用记录。五(注意事项试样取样量应经实验来调整，以其吸光度在适宜的范围内为宜。六(数据处理(1)绘制维生素C(抗坏血酸)和维生素E(α-生育酚)的吸收曲线。(2)分别绘制维生素C和维生素E在λ1和λ2时的4条工作曲线，求出4条直线的斜率，即ελ(1C)和ελ(2C)，ελ1(E)和ελ2(E)。(3)由测得的未知液Aλ1(C+E)和Aλ2(C+E)利用式(3-16)，计算未知样中维生素C和维生素E的浓度。七(思考题使用本方法测定维生素C和维生素E是否灵敏,解释其原因。