复方苦黄洗剂的质量标准研究

复方苦黄洗剂的质量研究 作者:赵平 李彦龙 郭艳霞 方明余 高明焕 【关键词】 大黄,苦参,黄柏,质量,评价标准 复方苦黄洗剂,批准文号:冀药制字Z20051604,是临床上用于清热燥湿、消瘀止痛、收敛止血～治疗湿热蕴结下注、瘀血阻络所致的内痔、外痔、混合痔、肛周湿痒、炎症及妇科带下病、阴道炎、外阴瘙痒等的常用药物。由大黄、苦参、黄柏、百部、白矾、蛇床子、花椒、芒硝、五倍子、地榆、防风、甘草12味药材组成。大黄为该制剂主药之一～其中大黄素、大黄酚是大黄的主要有效成分。现代药理研究表明～大黄煎剂对葡萄球菌、溶血性链球菌等多种细菌～以及一些常见致病性真菌和流感病毒等均有不同程度的抑制作用。测定煎剂中的有效成分的含量对临床合理用药具有指导意义。 1 与方法 1.1 仪器与药品 1.1.1 仪器 高效液相色谱仪,series ?泵～Model 500检测器～N2000工作站,,1/10万分析天平,德国METTLER TOLEDO公司,。 1.1.2 药品 中药材由河北省唐山市丰南区中医院制剂室提供～大黄对照药材(中国生物制品检定所～批号:120902-200408)～大黄素对照品,中国生物制品检定所～批号110756-200110,～大黄酚对照品,中国生物制品检定所～批号110796-200412,～苦参碱对照品,中国生物制品检定所～批号110725-200506,～盐酸小檗碱对照品,中国生物制品检定所～批号110713-200208,～甲醇色谱纯,天津四友试剂厂,～磷酸、三氯甲烷、甲醇、甲酸、乙醇等均为分析纯～水是纯化水～硅胶G薄层板,青岛海洋化工厂,。 1.2 方法 1.2.1 薄层鉴别 1.2.1.1 大黄的鉴别 取本品15 mL～加盐酸1.5 mL～水浴上加热30 min～放冷～用三氯甲烷振摇提取2次～每次20 mL～合并三氯甲烷液～蒸干～残渣加甲醇1 mL使溶解～作为供试品溶液。另取大黄对照药材0.5 g～同法制成大黄对照药材溶液。照薄层色谱法,1,试验～分别吸取大黄供试品溶液5 μL～大黄对照药材溶液4 μL～分别点于以同一以羧甲基纤维素纳为黏合剂的硅胶G薄层板上～以石油醚(30，60?),甲酸乙酯,甲酸,15?5?1,的上层溶液为展开剂～展开～取出～晾干～日光下检视。 1.2.1.2 苦参的鉴别 取本品20 mL～用氨试液调pH值至9，10～加氯仿振摇提取2次～每次20 mL～合并氯仿提取液低温蒸干～加乙醇2mL使溶解～作为供试品溶液。另取苦参碱对照品～加乙醇制成每mL含1 mg的溶液～作为对照品溶液。照薄层色谱法,1,试验～吸取上述2种溶液各3 μL～点于同一硅胶G薄层板～以醋酸乙酯-丙酮-苯-氨水,6?2?6?0.2,为展开剂～展开～取出～晾干～喷稀碘化铋钾试液～自然光下检视。 1.2.1.3 黄柏的鉴别 取本品5 mL～水浴蒸干～加甲醇5 mL使溶解～滤过～滤液作为供试品溶液。另取盐酸小檗碱对照品～加甲醇制成每mL含1 mg的溶液～作为对照品溶液。照薄层色谱法试验～吸取上述2种溶液各3 μL～分别点于同一硅胶G薄层板～以苯,乙酸乙酯,甲醇,异丙醇,水,20?10?5?5?1,为展开剂～展开～取出～晾干～臵紫外光灯,365 nm,下检视。 1.2.2 含量测定 1.2.2.1 溶液的配制 ?大黄素、大黄酚对照品混合储备液:精密称取大黄素对照品、大黄酚对照品适量～加无水乙醇,乙酸乙酯,2?1,混合溶液制成每mL含大黄素10 μg、大黄酚24 μg的混合溶液～即得。? 样品溶液:取供试液20 mL用0.45 μm微孔滤膜过滤即得～备用。 1.2.2.2 色谱条件 色谱柱为Hypersil ODS2分析柱,4.6 mm×250 mm～5 μm,～甲醇-0.1,磷酸溶液,85?15,为流动相～流速为1.0 mL/min～检测波长为254 nm。进样量为20 μL。在选定的色谱条件下测得的色谱图见图1(见封3)。由图1可见～大黄素、大黄酚的保留时间分别 为10.79 min和15.57 min～分离效果良好。 1.2.2.3 测定方法 1.2.2.3.1 线性关系的考察 分别精密吸取对照品储备液1、2、3、4、5 mL～臵10 mL量瓶中～加流动相至刻度～照上述色谱条件分别进样20 μL～色谱峰面积。 1.2.2.3.2 精密度试验 在上述色谱条件下～取大黄素浓度为9.88 μg/mL、大黄酚浓度为24.1μg/mL的混合对照品溶液～连续进样5次～测定大黄素和大黄酚相对标准偏差(RSD)。 1.2.2.3.3 稳定性试验 取本制剂按1.2.1.1项下方法制备好后0、2、8、12、24 h分别进样20 μL～测定大黄素和大黄酚的RSD。 1.2.2.3.4 重复性试验 取同一批次的供试品5瓶～分别按1.2.1.1项下的方法进行处理后进样～测定大黄素和大黄酚的RSD。 1.2.2.3.5 加样回收率试验 取已知浓度为大黄素5.84 μg/mL、大黄酚15.36 μg/mL的供试品溶液5份～每份5 mL～分别加入已知浓度为大黄素9.88 μg/mL和大黄酚24.1 μg/mL的混合对照品溶液5，10 mL量瓶中～混合～按1.2.1.1项下方法进行处理～测定大黄素和大黄酚的平均回收率和RSD值。 1.2.2.3.6 样品的测定 取060101批、060102批、060103批样品～按1.2.1.1项下操作～精密吸取此溶液20 μL～注入高效液相色谱仪中～记录色谱图～按外标法以峰面积计算含量。 2 结 果 2.1 薄层鉴别 2.1.1 大黄的鉴别 供试品色谱中～在与对照药材色谱相应的位臵上～显相同的黄色斑点～而阴性对照无干扰。见图1(封3)。 2.1.2 苦参的鉴别 供试品色谱中～在与对照品色谱相应位臵上～显相同颜色斑点～而阴性对照无干扰。见图2(封3)。 2.1.3 黄柏的鉴别 供试品色谱中～在与对照品色谱相应位臵上～显相同颜色荧光斑点～而阴性对照无干扰。见图3(封3)。 2.2 含量测定 2.2.1 线性关系的考察 将峰面积Y与相应的浓度进行回归处理～计算回归方程为～大黄素:Y,3079717，75.4X～r,0.9998,大黄酚:Y,5636054-13546.4X～r,0.9999。见图4～5。 实验结果表明,大黄素浓度在0.988，4.94 μg/mL范围内呈良好的线性关系～大黄酚浓度在2.41，12.05 μg/mL范围内呈良好的线性关系。 2.2.2 精密度试验 测得大黄素RSD,0.55,～大黄酚RSD,1.39,。见表1、2。图6。表1 大黄素精密度试验结果,略,注:1为大黄素,2为大黄酚 表2 大黄酚精密度试验结果,略, 2.2.3 稳定性试验 测得大黄素的RSD,1.31,～大黄酚的RSD,1.26,～结果表明样品在24 h内含量稳定。见表3。表3 大黄素稳定性试验结果,略,表4 大黄酚稳定性试验结果,略, 2.2.4 重复性试验 测得大黄素的RSD=0.96,～大黄酚的RSD=0.88,。见表5、6。表5 大黄素重复性试验结果,略,表6 大黄酚重复性试验结果,略, 2.2.5 加样回收率试验 实验结果大黄素的平均回收率为100.5%～RSD值为1.42%,大黄酚的平均回收率为99.82%～RSD值为1.30%。见表7、8。表7 样品的测定结果,略,表8 大黄酚加样回收率试验结果,略, 2.2.6 样品的测定 按外标法以峰面积计算含量。见表7。 3 讨 论 本试验对复方苦黄洗剂进行了质量控制标准研究～增加了大黄、苦参、黄柏的薄层鉴别～建立了采用高效液相色谱法测定处方中大黄的有效成分大黄素、大黄酚含量测定的方法～样品处理方法简单～薄层色谱图清晰～含量测定结果准确～重复性良好～可用于该制剂的质量控制。 【参考文献】 ,1,国家药典委员会.中国药典:一部,M,.北京:化学工业出版社～2005:461