女贞子多糖的抗衰老作用

女贞子多糖的抗衰老作用 ? l08? 中国药理学与毒理学杂志2006年4月;2o(2):108—111 ChinJPharmacolToxicol2006Apr;20(2):108—111 女贞子多糖的抗衰老作用 张振明,葛斌H,许爱霞,蔡曦光 (甘肃省人民医院1.药剂科,2.呼吸科,甘肃兰州730000) 摘要:目的研究女贞子多糖(PFI.)是否有抗衰老 作用.方法昆明种小鼠60只,随机分为正常对照 组,模型组,维生素E(VitE)2O0mg?kg,?d组, PFLL100,2OOg~.400nag?kg,?d组.小鼠颈背部sc 5%D一半乳糖1mg?kg,?d,,7周,制备衰老模型;正 常对照组小鼠8C等量注射用水.同时按分组ig给予 相应药物,对照组和模型组等量溶剂(_只含防腐剂 泥泊金),每日1次,给药7周.分别用TBA比色法, 亚硝酸盐法,IYrNB法及Sohal等法测定心,肝,肾中 丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘 肽过氧化物酶(GSH—Px)活性和脑中脂褐质(ty)含 量.结果衰老模型组小鼠胸腺指数和脾脏指数较 正常对照组下降,脑组织中LF升高,心,肝,肾组织中 MDA含量升高,SOD及GSH—P】【活力下降.与模型组 比,PFIJL和VitE抑制胸腺指数和脾脏指数下降,其 量效关系呈正相关;对抗心,肝,肾组织中MDA升高 及脑组织中LF升高,其量效关系均呈负相关;抑制 心,肝,肾组织中SOD及GSH—Px活力下降,其量效关 系均呈正相关.结论PFLL具有抗衰老作用,其机 制可能与其增强免疫功能,清除氧自由基和活性氧, 提高机体抗氧化酶活力有关. 关键词:女贞子多糖;衰老;超氧化物歧化酶;丙 二醛;谷胱甘肽过氧化物酶 中图分类号:R285 文献标识码:A 文章编号:1000-3002(2006)02-0108-04 女贞子(Fructusligustrilucidi)系木犀科植物女 贞的成熟果实,女贞子多糖(polysaccharidefrom 收稿日期:2005-07-20接受日期:2005.11-09 基金项目:甘肃省科学事业科研项目(Qso41.C33-25) 作者简介:张振明(1954一),男,医学学士,副主任药 师,从事基础药理及临床药理研究.Te1:(0931)8281682. '联系作者E-mail:siyO63O@163.conTel:(0931) 828】345 Fructu~ligustrilucidi)为其有效成分,根据传统中医 理论,肝肾不足可导致人体衰老,女贞子可防治因肝 肾不足引起的头晕耳鸣,双目昏糊,腰膝酸软,须发 早白.现代研究表明,女贞子多糖具有显着的免疫 增强作用J,而衰老与免疫功能减退及自由基水平 密切相关J.本研究拟对女贞子多糖的抗衰老作 用及其机制进行探讨,旨在寻求有效的抗衰老剂及 自由基清除剂,为延缓人体衰老及防治与自由基有 关的疾病提供理论依据. 1材料和方法 1.1试剂及动物 选浙江产冬季采摘的女贞子干燥果实药材,由 甘肃省人民医院药理基地药物实验室按文献[1,3] 方法制备女贞子多糖,经甘肃省药检所鉴定,其成分 为鼠李糖,阿拉伯糖,葡萄糖及岩藻糖等,苯酚一硫酸 法测定多糖含量,其样品纯度为87.6%.丙二醛 (malondialdehyde,MDA)测试盒,超氧化物岐化酶 (superoxidedismutase,SOD)测试盒,谷胱甘肽过氧 化物酶(glutathioneperoxidase,GSH—Px)测试盒均为 南京建成生物工程研究所产品.D一半乳糖为上海恒 信化学试剂有限公司产品.三氯甲烷为天津市化学 试剂六厂产品.甲醇为天津市科蜜欧化学试剂中心 产品.实验用昆明种清洁级雌性小鼠,7,8周龄, 体重18,22g,由兰州生物制品研究所提供(动物合 格证编号:2004-049). 1.2动物分组及给药 昆明种小鼠60只,按完全随机设计法分为6 组,每组10只,即正常对照组,模型组,维生素E(vi. taminE)200mg?kg,?d组,女贞子多糖100,2OO及 4O0mg?kg,?d组.在小鼠颈背部8C5%D一半乳糖 1mg?kg,?d一,共7周,制备衰老模型;正常对照组 小鼠SC等量注射用水.同时按分组ig给予相应药 物,对照组和模型组ig等量溶剂(只含防腐剂泥泊 金),每日1次,7周后进行各项指标测定. 中国药理学与毒理学杂志2006年4月;20(2)?1O9? 1.3小鼠胸腺指数和脾脏指数 小鼠处死前称重,处死后分别取出胸腺和脾脏, 电子天平上称重,胸腺(或脾脏)指数=胸腺(或脾 脏)重(ms)/4~鼠体重(g). 1.4小鼠脑组织中脂褐质含量的测定 用Sohal等法J,取小鼠大脑100mg,加人2:1 氯仿-甲醇提取液2mL,充分匀浆,滤纸过滤,滤渣 用提取液洗涤,加提取液至5mL,测定荧光强度,激 发波长365am,发射波长435am. 1.5小鼠心,肝及肾组织中丙二醛含量测定 用MDA试剂盒检测,心,肝,肾组织用Tris缓冲 液(pH7.4,10mmol?L,Tris-HC1,0.1mmol?L EDTA-2Na,10mmol?L蔗糖,0.8%NaC1)制备 10%组织匀浆,取肝或肾匀浆0.1mL,按试剂盒操 作法加人试剂,反应终体积为4.2mL.反应管振荡 混匀,水浴中煮沸40min,3500×g离心10min,上 清液于532am处测吸光度(A)值.考马斯亮蓝G- 250染色法..测组织蛋白含量. 1.6小鼠心,肝及肾组织中超氧化物歧化酶活性的 测定 SOD活性表示为试剂盒对照管与样品管间亚 硝酸盐含量的差值(?A).亚硝酸盐量根据亚硝酸 盐的曲线计算得出.本实验的标准曲线为: Y=一4.70826+137.7962X(r=0.9998). 1.7小鼠心,肝及肾组织中谷胱甘肽过氧化物酶活 力的测定 用GSH-Px试剂盒检测,取1%组织匀浆及1 mmol?LGSH各0.2mL(对照管不含GSH), 37?水浴中预温5min,按试剂盒操作法加人试剂, 37?水浴中反应5rain,3500×g离心10rain,取上 清液加人显色剂,室温静置15win,于412am处测 A值,根据试剂盒提供的公式,将GSH-Px单位换算 成I~mol?min?g蛋白.用考马斯亮蓝G-250 染色法测组织蛋白含量,取组织匀浆60L,加3 mL染色液混匀,室温放置15min后,于595am处 测定A值,用标准曲线对应的回归方程Y= 104.5648X一3.7525(r=0.9946)求算蛋白含量,蛋 白含量(mg?L)=If/取样量. 1.8实验数据用元-i-s表示,t检验分析组间实验数 据显着性差异,受试药量.效相关显着性用相关性检 验分析. 2结果 2.1女贞子多糖对衰老模型小鼠胸腺指数和脾脏 指数及脑组织中脂褐质含量的影响 小鼠连续SCD一半乳糖7周后,胸腺指数和脾脏 指数明显下降,而ig女贞子多糖能剂量依赖地抑制 衰老模型小鼠胸腺指数,脾脏指数的下降和脑组织 中脂褐质含量的升高.VitE组胸腺指数和脾脏指 数与正常对照组接近(表1). 2.2女贞子多糖对衰老模型小鼠心,肝和肾组织中 丙二醛含量,超氧化物歧化酶及谷胱甘肽过氧化物酶 活性的影响 JD一半乳糖致衰老模型小鼠心,肝,肾组织中 MDA含量明显升高,SOD及GSH.Px活性均明显下 降,女贞子多糖能剂量依赖地抑制心,肝,肾组织中 MDA含量升高和SOD及GSH.Px活性下降(表2). Tab1?EffectofpolysaccharidefromFructusligustrilucidi(PFLL)onthymusindex,spleenin dexand 删ofbraininsenilemodelmicecausedbyD-galactose(D-Ga1) D-galactose(se)andv~taminE(VitE)orPFLL(ig)weregivenonceadayfor7weeks,respecti vely.元?s,n=10.''P<0.01. comparedwithcontrolgroup;P<0.05,P<0.O1.comparedwithD.galactosemodelgrou p. Tab2.EffectofPFLLonMDAcontent,SO1)andGSI-I-Paetiviliesinheart,liverandkkllneyo fsenile modelcausedbyD-galactose SeelegendofTab1formicetreatment.SOD:superoxidedism~;IdDA:malondialdehyde;GS It-Px.-glut~e帅d嶂e.i4-$t^=10...P<O.ol,comparedWitlI eonholgroup;<n05,槲P<0.O1.咖paredwD—galact?e咖delgroup. 2.3女贞子多糖对衰老小鼠各指标作用的药效关系 PFLL可显着抑制D.半乳糖致衰老模型小鼠胸 腺指数和脾脏指数下降,其量效关系均呈正相关,相 关系数分别为0.990(相关性检验P<0.01)及 0.992(P<0.01);对抗脑组织中脂褐质含量上升, 其量效关系呈负相关,相关系数为一0.983(P< 0.01);对抗心,肝,肾组织中MDA上升,其量效关 系均呈负相关,相关系数分别为一0.963,一0.992 及一0.971,相关性检验P值均小于0.01;抑制心, 肝,肾组织中SOD活力下降,其量效关系均呈正相 关,相关系数分别为0.995,0.982及0.997,相关性 检验P值均小于0.01;可显着抑制心,肝,肾组织中 GSH-P】【活力下降,其量效关系均呈正相关,相关系 数分别为0.999,0.973及0.994,相关性检验P值均 小于0.01. 3讨论 我国传统中药具有医治百病的悠久历史,从滋 肝补肾中药寻求抗衰老剂是发展新药的重要途径. 本实验用D乳糖制备衰老小鼠模型,发现了女贞 子多糖的抗衰老作用及其机制.结果提示,女贞子 多糖可显着抑制机体免疫器官退化及提高免疫功 能,清除羟自由基,超氧阴离子自由基和活性氧,提 高抗氧化酶活力,量效变化说明其作用呈剂量依赖 性,这可能是女贞子防治肝肾不足所致衰老的中医 理论依据.可见,女贞子多糖有抗衰老作用,其机制 可能与提高免疫功能,清除氧自由基和活性氧,增强 机体抗氧化酶活力有关. 业已证明,自由基可诱发炎症,免疫失调及恶性 肿瘤等多种疾病J,也是导致肝,肾缺血性损伤及 心脑组织缺血.再灌注损伤的关键因素引.结果提 示,女贞子多糖是一种有效的抗衰老剂及自由基清 除剂,可能对与衰老和自由基有关的疾病有防护作 用. 4参考文献: [1]YuLG,HaoLM,YaIlgM.~tmetingandeffectof p0】ysaccharidefrom,h'ct如饿luck//Onimmai~, ofraiee[J].I'tJ(中国药学杂志), 1992,27(1):26. [2]GeB,(;henLD,锄gZM.tmtioxid~iveactivityof4- sulformte-2,2,6,6-tetmme~ylpiperidine0xylintissues andelylllrocyt?fromrats[J].Ck/nJPharma~Toni- co/(中国药理学与毒理学杂志),21101,15(1):47— 5O. [3]ChenQ,YaIlgGW,AnLG.Isolationpm4_fieationand analysisofp0lysacchdefrom岱础gob//o/~seed[J]. Chin,(中国药学杂志),2002,37(5):331— 333. [4]XuQP,Wu.F_~eet0fcomplexgin蝴lg删onmice wi?lsIIb矗cutesenileIn0delClml~byD-gal~se[A]. In:(:henQ,ed8.肘eIJIodDS'lP^彻l,la蝴 inc^渤Herbal胁(中药药理研究方法学) [M].BeijiIIg:PeoplesHygienePre鹤,200O.937— 939. [5]Soh~lRS,DnnatoHJr.F_~eetofexperirnentalpmlon~- tionoflifespBlIOnbpI疵l8cincontentand1y?帅?alell- Zylrlrll~acti~tyinthebrain0fthehoII8efly,lff~eadDmel- t[J].JGe,1979,34(4):4119—496. [6]SunY,aIlgHQ.ThemethodtomellSUl~pin.inCOI1. tent[A].hl:XusY,l(am,(:henx.册咖 脚e,,le,ll胍!IJIodD(药理实验方法学)[M].3Id ed.Beiji~:PeoplesHygienePress.2002.14111— 中国药理学与毒理学杂志2006年4月;20(2) 1483. MarxJL_Oxygenfreeradicalslinkedtomanydiseases [J].Sc/ence,1987,2.35(4788):529—531. HessML,MansonNH.Molecularoxygen:friendand foe.Theroleoftheoxygenfreeradicalsysteminthe calciumparadox,theoxygenparadoxandisehemia/ reperfusioninjury[J].JMolCellCardiol,1984,16 (11):969—985. AntisenileeffectofpolysaccharidesfromFructus ZHANGZhen—Ming,GEBin,XUAi—Xia,CAIXi—Guang (1.DepartmentofPharmaceutics,2.DepartmentofRespiration,PeoplesHospitalof GansuProvince,Lanzhou730000,China) Abstract:AIMTostudyifthepolysaccha- ridesfromFructusligustrilucidi(PFLL)pos- sessesantisenileeffect.MTHoDSKun- mingmicewererandomlydividedintocontrol, model,vitaminE(VitE)2o0mg?kg,?d,, PFLL100,2o0and400mg?kg,?d,groups, 10miceineachgroup.Micewerei.jectedSC D-galactose1mg?kg,?df0r7weekstopre- paresenilemode1.Atthesametime.PFLL 1oo.2ooand400mg?,?dorVitE2oo mg?kg,?d,weregivenigfor7weeks.Ma- londialdehyde(MDA)content.superoxidedis. mutase(S0D)andglutathioneperoxidase (GSH.P】【)activitiesinheart.1iverandkidney weremeasuredbyTBAcolorimetricmethod. nitritemethodandDTNBmethod.respectively. andlipofuscin(LF)contentinbrainwasdeter- minedbySohalmethod.RESULTSCom. paredwithcontro1.thymusindexandspleenin. dexsignificantlydescended:LFcontentin brainsignificantlyascended;MDAcontentsig- nificantlyroseandSODandGSH.Pxactivities significantlydroppedinheart,liverandkidney ofmiceinmodelgroup.Comparedtllmode1. descendingofthymusindex,spleenindex, SODactivityandGSH--Pxactivitywasdose??de-- pendentlyinhibitedinPFLLgroups.Ascending ofLFcontentinbrainandMDAcontentin heart,liverandkidney.CONCLUSION PFLLhasthenotableantisenileeffect,its mechanismprobablyrelatedtoimprovingimmu— nity,eliminateoxygenfreeradicalsandactive oxygenandstrengthenactivityofantioxidase. Keywords:polysaccharide,Fructusligstri lucid;aging;superoxidedismutase;malondi? aldehyde;glutathionperoxidas Foundationitem:TheprojectsupportedbyGansuProv- inceScienceProgram(Qs041一C33-25) 'Correspondingauthor. (本文编辑乔虹)