Biotek多工酶标仪荧光检测的高级应用——荧光偏振（可编辑）

Biotek多工酶标仪荧光检测的高级应用——荧光偏振（可编辑） Biotek多工酶标仪荧光检测的高级应用——荧光偏振 Biotek 多工 酶标仪 荧光检 测的 高级应 用 ??荧光 偏振 摘要: 偏 振光 和荧 光分 子 相互结 合形 成的 荧光 偏振 理论, 正在 生物 学分 支学 科理论 和应 用研 究中大 显身 手。 成为 基础 科学研 究和 药物 筛选 研究 中的一 个重 要检 测手 段。 正文: 光波可 以在 任何 一个 平面 上均匀 的震 动, 当其 通过 某些平 面时 , 有 可能 因受 到平面 的作 用将光 波的 能量 分成 不均 匀的光 束, 震动 平面 也就 发生了 变化 , 可 能在 某一 个方向 的震 动强 或弱于 其他 平面 , 这 种光 成为偏 振光 。 偏振光 和荧 光分子 相互 结合 形成 的荧 光偏振 理论 , 该 理论最 早由Perrin 在1962 年 提出, 他发 现溶 液中 的荧 光分子 在受 到偏 振光 激发 时,如 果在 激 发时分 子保 持静 止, 该分 子将发 出固 定偏 振平 面的 发射光 (发 射光 仍保 持偏 振性) 。然 而, 如果分 子旋 转或 者翻 转那 么发射 光的 偏振 平面 将不 同于初 始激 发光 的偏 振平 面。 分子 的偏 振 化程度 和分 子旋 转速 度成 反比 , 同 时也 受 溶 液黏 度、 绝对温 度 、 分 子体 积和 气体 常数的 影响 , 然而旋 转速 度的 变化 主要 取决于 分子 体积 和分 子重 量。 荧光偏振原理: 当荧光 分子 受 到 平面 偏振 光激发 时, 如果 分子 (对 于荧光 素约 持续4 纳秒 )保 持静止 , 发射光 将位 于同 样的 偏振 平面 。 如 果在 受激发 时 , 分子旋 转或 翻转 偏离 这一 平面 , 发 射光 将 位于与 激发 光不 同的 偏振 面。 如 果用 垂直 的偏 振光 激发荧 光素 , 可 以在 垂直 和水平 的偏 振平 面检测 发射 光光 强, 如果 分子很 大, 激发 时发 生的 运动极 小, 发射 光偏 振程 度较高 , 如 果分 子小, 分子 旋转 或翻 转速 度快, 发射 光相 对于 激发 光平面 将去 偏正 化。 近年来 , 以这 种物 理学 现象 为基础 的在 生命 科学 研究 的领域 中扮 演着 越来 越重 要的角 色 。 荧光偏 振技 术可 用来 研究 生命科 学领 域中 分子 相互 作用, 以及 分子 与所 处环 境的相 互作用 。 荧光偏振技术的优势: 荧光偏 振技 术比 研究 蛋白 质与核 酸结 合的 传统 方法 具有很 多优 势: 在溶 液中 进行检测 , 可最大 化的 模拟 真实 生命 环境; 实时 跟踪 监测 分子 间结合/分 离 变 化, 解决 定 量问题 ;相 较 于放射 性同 位素 更安 全可 靠; 检测 限更 低 , 所 需样 本 量少 , 灵 敏度 高 , 重 复性 好 , 操 作简 单。 荧光偏振的应用: 临床应 用:荧 光 免疫 偏振 技术 (Fluorescence Polarization Immunassay ), 利用荧 光偏振 技 术, 采 用竞 争结 合法 机制 , 常用 于检 测小 分子 物质 如药物 、 激 素在 样本 中的 含量。 例如 , 以 荧光素 标记 的药 物与 含待 测药物 的样 本为 抗原 , 与 一定量 的抗 体继 续竞 争性 结合, 在竞 争结 合过程 中 , 样 本中的 待测 样本越 多 , 与 抗体结 合的 标志抗 原就 越少 , 从 而激 发的荧 光偏 振 光 度也就 越少 。 如果 知道 了已 知浓度 的标 记抗 原与 荧光 偏振光 性的 关系 后就 可以 测量未 知浓 度 的物质 。 因此 , 这 项技 术 可以用 于检 测环 境或 食品 中有毒 物质 如农 药的 残留 , 还 可以 检测 病 人样本 中病 毒DNA 的 复制 量,为 临床 诊断 提供 有力 的量化 指标 依据 。