中华蟾蜍中脑视叶白介素1α、干扰素γ和肿瘤坏死因子α阳性细胞的

中华蟾蜍中脑视叶白介素1α、干扰素γ和肿瘤坏死因子α阳性细胞的 ,,，,,,, ,,,,,,, ,, ,,,,,,, ,,,(,, ,,(, ,,,, 解剖学杂志,,,,年第,,卷第,期 中华蟾蜍中脑视叶白介素,仅、干扰素丫和肿瘤坏死因子,阳性细胞的分布， 杨乐乐 刘再群? (安徽师范大学生命科学学院安徽省重要生物资源保护与利用重点实验室， 生物环境与生态安全安徽省重点实验室，芜湖 ,,,,,,) 摘要 目的:研究中华蟾蜍中脑视叶白介素,,(，,,,,)，干扰素,(，,,,,)和肿瘤坏死因子,(,,,,,)免疫阳性细胞的形态 和分布特点，以丰富细胞因子在两栖类神经系统达的情况，为进一步研究细胞因子对中枢神经系统的作用积累材料。方 法:采用免疫组织化学,,,,法和,,,,,法对中华蟾蜍中脑视叶切片进行显色，光镜观察并进行统计处理。结果:，,, ,,和，,,,,阳性细胞在中脑视叶顶盖和被盖都有很多分布，为大、中和小型细胞，而且以中、小型细胞为主，胞体为圆形和似 锥形，另外顶盖带状层出现,亚层的阳性纤维;腿,阳性细胞只分布在中脑视叶被盖背侧区，都为中、小型细胞，胞体圆形。 结论:，,,,,和，,,,,阳性细胞广泛分布中华蟾蜍中脑视叶各区，而,,,,,阳性细胞数量较少且仅出现在视叶被盖背侧区。 关键词 白介素,,;肿瘤坏死因子一,;干扰素一丫;免疫组织化学;中脑视叶;中华蟾蜍 ,,,,,,,,,,,, ,, ，,,,,,，，,,(中,,, ,,,,;,,,,,, ,,,,,,,,,;,,,, ;,,,, ,, ,,, ,,,,; ,,,, ,, ,,,, ,,,,,,,,,,,,。 ,,,, ,,,,，,,, ,,,？,,,, (,,,,,,;,,, ,,, ,,,,,,,,,, ,,, ,,, ,,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,, ,, ，,,,,,,,, ,,,,,,,;,, ,,,,,,;,,， ,,,,,,;,,, ,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,,,; ,,,,,,,,,,, ,,, ,;,,,,,;,, ,,;,,,,,，,,,,,,, ,, ,,,,;,,,;,,， ,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,，,,,, ,,, ,,,，,,,,,) ,,,,,,;, ,,,,;,,,,:,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,, ,, ，,,,旷，，,,,卜,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,;,,,, ;,,,, ,, ,,, ,,,,; ,,,, ,, ,,,, ,,,,,,,,,,,,，,,, ,,, ,,;, ,,,, ,,,,,,,,, ,, ;,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,, ,, ,,,,,,,,,, ,, ,,, ,, ,,,,,,,,, ,,,,; ,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,, ,, ;,,,,,,,, ,;,,,, ,, ,,, ;,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,(,,,,,,,:,,, ,,,,,,,,,,,;,,,,;,,,,,, ,,,,,, ,,, ,,,,, ,,,,,,,, ,,,, ,,,, ,, ,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,, ,, ;,,,, ,, ,,, ,,,,; ,,,, ,,,,, , ,,,,, ,,;,,,;,,,，,,, ,,,,,,— ,,; ,,,,,,,, ,,, ,,,, ,,,,(,,,,,,,:,,,,, ,,,, ,,,, ，,,,旷,,, ，,,一,,,,,, ,,,,,,,,,;,,,, ;,,,, ,, ,,, ,,,,, ,,,,; ,,,,( ,,,, ,,,, ,,,,,，,,,,,, ,, ,,,,, ,,,,, ;,,,,，,,, ,,,, ,, ,,,, ,,,, ,,,,,, ,,, ,,,,, ,,,,, ;,,,,(,,,,, ,,,,,, ,,,, ,,,,, ,,, ;,,, ,,,, ,, ,,,,,(,,,,(,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,, ,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,, ,,,,,,(,,,,,,,,,, ,,,,,,,,— ,,,;,,,, ;,,,, ,,,, ,,,,,, ,, ,,,,, ,,,, ,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,(,,,,, ,,,,,, ,,,, ,,,,, ,, ,,,,,( ,,,;,,,,,,:，,,,旷,,, ，,,,,,,,,, ,,,,,,,,,;,,,, ;,,,, ,,,, ,,,,,, ,,,,,,, ,, ,,, ,,,,, ,,,,; ,,,, ,, ,,,, ,,,,,,,,,,,,， ,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,;,,,, ;,,,, ,,,, ,,,, ,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,( ,,, ,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,;,,,,, ,,;,,,,, ,,;,,,,,;,,,,,,,,,,,;,,,,,,,,;,,,,; ,,,,;,,,, ,,,,,,,,,,,, 早期研究认为，细胞因子是由免疫系统中的免疫 死因子,(,,,,, ,,;,,,,, ,,;,,,,,,,,,，,,,,仅)能提高细胞产生。但近些年来研究已经表明中枢神经系统也 培养神经元存活和生长〔,〕。在病理状态下，脑组织中可以产生和分泌细胞因子〔，〕。在正常的脑组织中细胞 的细胞因子数量会很快增加〔,,，过量的，,,,〔,〕，,,,,因子的含量较低〔,〕，但这少量的细胞因子却有着非常 ,【〔,〕和干扰素，,(,,,,,,,,,,,,,,,,，，,,一,),,,都可能导重要的功能，一定浓度的白介素,(,,,,,,,,,,,,,，，,, 致神经细胞死亡和脑损伤。所以无论在病理状态或是,),,,促进神经前体细胞分化为神经元，适量的肿瘤坏 正常情况下，神经细胞都可以合成细胞因子，通过自分 泌、旁分泌或内分泌方式，作为神经调质而影响其自,,,:,,(,,,,,,(,,,,(,,,,—,,,,(,,,,(,,(,,, 身、邻近细胞或远距离靶点。本研究以成年中华蟾蜍,安徽师范大学博士科研启动基金(,,,—,,,,,,);生科院联合开放课 中脑视叶为研究对象，研究，,,,,，，,,一丫和,,,—,阳 题;安徽重要生物资源保护与利用研究安徽省重点实验室科研基金; 性细胞的分布特点，丰富细胞因子在两栖类中枢神经 生物环境与生态安全安徽省高校重点实验室基金 系统的表达情况，为进一步研究细胞因子对神经系统第,作者,,,,,,:,,,,,,,,,,,(,,,,,,(,,，,, 的作用积累材料。?通讯作者，,,,,,,:,,,,,,？,,,,,,(,,,,(收稿日期:,,,卜,, ,,;修回日期:,,,,—,,—,, 万方数据 (图,，见封三);被盖可分为背侧区和腹侧区，细胞聚集,材料和 形成核团。在中脑视叶的顶盖、被盖背侧区和腹侧区,(,实验动物处理 的，,,,,，，,,一,和,,,,,阳性细胞(大、中和小型细 正常的成年中华蟾蜍,只(雌、雄各,只)，采自安 胞)的密度详细情况见表,。徽芜湖郊区，先乙醚麻醉，后打开颅腔取出完整脑，立 ,(, 中脑视叶，,,,,阳性细胞的分布和特征即用,,,,,液整 体固定，常规石蜡包埋，横向连续切片， ，,,,仪阳性细胞的细胞核为空泡状，主要是细胞质厚度,肚,。脱蜡复水后，一组用,,,,,法染色;另一组 被染成黄色，也有少量细胞突起可以被染成黄色。在用免疫组织化学,,,,法显色。最后,,,,,,,光镜下 视叶顶盖中，灰质层中的多数细胞都为阳性，胞体为圆观察并拍照。 形，比较规则，而白质层中，只有带状层纤维为阳性，并,(,免疫组织化学,,,,法 且带状层中有两亚层阳性纤维层和两亚层阴性纤维 石蜡切片脱蜡复水后，室温下用,,,。,,孵育 (图,,、,,，见封三)。在中脑被盖的多数核团都可见,, ,,,阻断内源性酶干扰，后用,,,(,, ,(,)冲洗 到阳性细胞。被盖背侧区也有很多细胞为阳性，胞体,,,次，每次,,, ,,,,(然后，再用,,,,,(在试剂盒 也为规则圆形(图,,，见封三)。而被盖腹侧区也含有中，购自武汉博士德公司，,,,,试剂盒编号为 大量的阳性细胞，细胞质被染成黄色，有些细胞突起有,,,,,,)室温下孵育,, ,,,，甩掉,,,，滴加一抗(，,, 黄色，胞体似锥形，也有圆形(图,,，见封三)。另外，,,，，,,一,和,,,,,，均为多克隆抗体，兔血清，即用型 视叶室和中脑水管的室管膜细胞都为阳性，但不同的试剂浓度为,,,,,卫,,,,，药品编号依次为,,,,,,， 是中脑水管的室管膜游离面阳性很强，呈线形(图,,，,,,,,,和,,,,,,，购自武汉博士德公司),?过夜。 见封三)。最后，滴加二抗(生物素化山羊抗兔，即用型试剂浓度 ,(, 中脑视叶，,,,,阳性细胞的分布和特征为,,,, ,,,,,,，药品编号为,,,,,,，购自武汉博士德 ，,,一丫阳性细胞的细胞核也为空泡状，胞质和突起公司),,?下,, ,,,。,,,洗,次，每次, ,,,。,,, 都可以被染成黄色。在视叶顶盖中，灰质层中的阳性(,:,:,:,,,,一,:,:,:,,)(在试剂盒中，购自 细胞较少，且多在中灰质层，而白质层中，带状层可以武汉博士德公司，,,,,试剂盒编号为,,,,,,)显色 观察到明显的黄色，且观察到带状层中有两亚层强阳, ,,,,后，流水冲洗,,, ,,,,，脱水透明封片。并设置 性纤维和一亚层弱阳性纤维(图,,、,,，见封三)。在阴性对照，以,,,代替一抗。 中脑被盖的背前侧被盖核、腹前侧被盖核、背后侧被盖,(,细胞大小的划分 核和腹后侧被盖核可见阳性细胞。在被盖背侧区有一 胞体直径在,,,，,以下的细胞为小型细胞，直径 些阳性细胞，细胞质被染成黄色，少数突起也有黄色，在,,,,,“,之间的细胞为中型细胞，直径在,,,，, 胞体多为圆形，少数似锥形(图,,，见封三)。而被盖腹以上的细胞为大型细胞。 侧区含有许多阳性细胞，细胞质和突起都可被染成黄,(,统计学处理 色，胞体不规则似锥形(图,,，见封三)。另外，观察到 随机选取,,张切片，对中脑视叶顶盖、被盖背侧 视叶室的室管膜细胞为阴性，而中脑水管的室管膜细区和腹侧区各取,(, ,,,面积，使用，,, ,(,细胞计 胞为阳性，且细胞游离面有一条颜色较黄的线形，因此数，分别测量出小、中和大型阳性细胞密度，并用,,;,, 在图中可以看到视叶室和中脑水管有很明显的界限,,,,和,,,, ,,(,对数据进行分析处理。 (图,,，见封三)。 ,(, 中脑视叶,,,,,阳性细胞的分布和特征,结果 ,,,,,阳性细胞的细胞核都为空泡状，胞质被染 中华蟾蜍中脑视叶由顶盖和被盖组成，顶盖可分 成黄色，少见黄色的突起。在视叶顶盖中，无论灰质为,层，由外向内依次为带状层、外灰质层、浅白质层、 层，还是白质层，都未观察到 阳性细胞和纤维(图,,，见中灰质层、中白质层、深灰质层、深白质层、中央灰质 封三)。在中脑被盖背前侧核可见阳性细胞。被盖背侧 表, 中华蟾蜍中脑视叶中，,,,,、，,,,,和,,,,旺阳性细胞密度的分布(,士,，,,(,删,,,,) ,,, , ,,,,,,, ,, ，，，,廿，，,,,,,,,，, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,;,,,, ;,,,, ,, ,,, ,,,,; ,,,, ,, ,,,, ,,,,,,,,,,,,(,,士,，,,(, ,,,,),,,,,:,,,, ,,,,,,, ,,,, ,, ,,,(, ,,,,(,,,(,,，,,,, ,,,,,, ,,, ,,,, ,,,,,, ,, ,,,,,, ,, ,,, ,,,,,, ,,,,,,(,,,:,,,,, ,,,,, ;,,,,;,,,:,,,,,,,,,,, ;,,,,;,,,:,,,,,, ,,,,, ;,,,,;,,;:,,;,,,;,,,,:,,,,,, ,,,,,,,,,;,,,,:,,,,,,, ,,,,,,,,, 万方数据区域有一些细胞为阳性，腹侧区很少见到阳性细胞(图 的功能上是不同的。被盖中有些细胞的胞体和突起都,,、,,，见封,,)。另外，观察到视叶室的室管膜细胞 表达，,,一,，而另一些细胞仅胞体中存在，,,一,蛋白，为阴性，而中脑水管的室管膜细胞为阳性，且细胞游离 这种细胞内定位的差异，说明至少存在两类能表达面有一条颜色较黄的线形，因此在图中可以看到视叶 ，,,,丫的神经细胞，而突起中含有，,,,,的细胞，可能室和中脑水管有很明显的界限(图,,，见封三)。 是一类以，,,一,作为神经递质的特殊神经细胞。另 外，显示中脑视叶顶盖的带状层中，出现两亚层的强阳,讨论 性纤维和一亚层的弱阳性纤维，而其他白质层却没有， ，,,,,在多种动物的中枢神经系统都有表达，对神 说明不同白质层的物质组成是有差异的。而带状层又经系统有很重要的作用。体外研究表明适量浓度的 可细分为,个亚层，这与使用，,,,,阳性物质区分的亚，,,,,，可以提高神经前体细胞或神经干细胞定向分化 层稍有不同。总之，正常成体中华蟾蜍中脑表达的为多巴胺能神经元的比例〔,,;在病理状态下，如阿尔茨 ，,,一,，可能参与脑的正常神经生理活动，具有增强脑海默氏病(,,,,,,,,,’, ,,,,,,,)是一种神经退行性疾 功能的作用。病，过量表达的，,,,,则可导致神经退行性疾病的发 对于,,,,,功能的研究也有很多。在动物脑缺血生，使细胞死亡〔,,;在正常生长和发育的脑中，，,,,可 状态下，,,,,,表达细胞的分布与缺血灶相一致，呈局以作为星形胶质细胞的生长因子，具有调节细胞增殖 灶性分布，,,,,,的大量表达可以加重脑组织损伤和分裂分化的作用〔,〕。本研究结果显示正常成体中华蟾 神经细胞死亡〔,’,,,;在,,,受体基因敲除的小鼠中，缺蜍中脑视叶中，多数细胞都可以表达，,一,,，以中、小型 血性脑损伤模型实验证实,,,,,可以通过激活抗氧化细胞为主，大型细胞很少，其中视叶顶盖阳性细胞密度 途径保护神经细胞〔,,,;同样，由病毒引起小鼠脑炎的实最高，被盖腹侧区的次之，被盖背侧区的最低。，,’,, 验证实,,,,,是通过,,,,,和,,,,,分别修复受主要存在于细胞的胞体中，也可见被盖腹侧区的某些 损的海马和纹状体〔, ,,。因此,,,,,不仅参与细胞凋细胞有阳性突起，表明，,,,,可能作为某些特殊神经细 亡，同时还可能具有保护和修复神经细胞的作用。本胞的递质，参与脑的正常神经生理活动。另外，在视叶 研究显示在正常成体中华蟾蜍中脑视叶中，只有 背侧顶盖中，带状层纤维出现,亚层阳性纤维和,亚层阴性 被盖的少数细胞和中脑水管的室管膜细胞可以表达纤维，而其他白质层则为阴性，表明不同白质层的物质 ,,,,,。所以，正常生理状态的蟾蜍中脑的,,,,,表组成是有差异的。同时本研究显示带状层可细分为, 达量是很低的。这种少量表达的,,,,,不是炎症细胞个亚层，表明带状层参与视觉生理活动，可能会有更复 表达的，不是参与炎症反应和损伤脑组织作用，而可能杂的作用机制。因此在两栖类中脑视叶中，，,,,,的细 是由神经细胞合成，起到维持神经细胞存活和增强脑胞内定位是有差异的，阳性细胞的大小是不同的，细胞 功能的作用。同时也有研究证明保护神经细胞的密度的分布也是有差异的。这些差异可能与中脑视叶 ,,,—,不是源自炎症细胞，而来自小胶质细胞〔， ,,。因顶盖、被盖背侧区和腹侧区的功能不同有关。 此，推测源于神经细胞的,,,,,可能具有保护神经细 同，,,,,一样，，,,一,也在动物脑中表达。在大鼠 胞的功能，而源于炎症细胞的,,,(,则可能参与炎症脑缺血过程中，，,,,,表达量增加，主要参与大脑损伤 反应。后期反应过程〔,,;在，,,,,基因敲除小鼠的脊髓损伤 在蜥蜴脑发育的过程中，电镜下观察可见，室管膜实验中，，,,一,的不表达导致神经细胞死亡，表明，,,, 细胞逐渐分化为多种类型，随着所在位置的不同，室管,可能在损伤后起到修复和促进再生，起到保护神经细 膜细胞的形态也是多样化的〔, ,,。在蛇脑的下联合器胞的作用〔,阳;在脑炎症反应中，神经前体细胞可表达 中，也观察到两种不同的室管膜细胞〔, ,,。本研究在中，,,一,的受体蛋白，小胶质细胞分泌的，,,一,可以通 华蟾蜍中脑中，同样有两种类型的室管膜细胞:中脑水过两条路径增加,,,和激活;,,,,,,,,诱导神经前体细 管室管膜细胞为，,,,,、，,,一丫和,,,,,阳性，而视叶胞凋亡或者增殖分化〔,,,。所以，,,,,的功能不是单一 室的室管膜细胞则只能表达，,,,,。同时，中脑水管的的，而是具有复杂的作用机制。在大鼠小脑中，浦肯野 室管膜游离面有一层，,,,,、，,,,,和,,,(,阳性的氏层细胞、顶核、间位核、齿状核等都广泛表达，,,一丫 物质，这可能是室管膜细胞的微绒毛。室管膜细胞可蛋白〔, ,。。本研究显示中华蟾蜍的中脑视叶也有很多细 以合成和分泌多种物质，所以中脑部位的室管膜细胞胞表达，,,一,，被盖腹侧区中阳性细胞密度最高，被盖 可能合成分泌这些细胞因子到脑脊液中，通过体液运背侧区的次之，视叶顶盖的最低。在视叶顶盖中，，,,一 输到靶器官或组织，参与机体的生理活动。丫仅存在于细胞的胞体中，而被盖阳性细胞的胞体和突 综上所述，正常成体中华蟾蜍中脑视叶可以表达起都含有，,,一,蛋白，尤其是被盖腹侧区的细胞阳性 ，,,,,、，,,一,和,,,,,。，,,,,在视叶顶盖阳性细胞突起较多也较明显。这种阳性细胞密度分布上的差 的密度最高，被盖背侧区和腹侧区的较低，阳性细胞以异，表明，,,一,在中脑视叶顶盖、被盖背侧区和腹侧区 .