【doc】血浆同型半胱氨酸和血清叶酸水平与胃黏膜异型增生的关系

【doc】血浆同型半胱氨酸和血清叶酸水平与胃黏膜异型增生的关系 血浆同型半胱氨酸和血清叶酸水平与胃黏 膜异型增生的关系 ?294?ChinJGastroenterol,2004,Vo1.9,No.5 血浆同型半胱氨酸和血清叶酸 水平与胃黏膜异型增生的关系 沈必武王毓明庞智李明珍华江郑家驹 江苏省苏州市第三人民医院消化科苏州市消化系疾病与营养研究中心(215008) 背景:近年来,同型半胱氨酸与细胞癌变的关系已引起广泛重视.叶酸及其辅酶对活细胞的生长发育等功能具 有重要影响.叶酸缺乏与多种肿瘤的发生有关.目的:了解胃黏膜异型增生患者的血浆同型半胱氨酸和血清叶酸水 平,并探讨其间的关系.:选取29例胃黏膜异型增生患者和25名健康对照者,采用高效液相色谱法测定血浆同 型半胱氨酸水平,微生物学法测定血清叶酸水平.结果:胃黏膜异型增生患者的血浆同型半胱氨酸水平显着高于健 康对照者(14.74Ixmol/L-+5.40Ixmol/L对8.16Ixmol/L-+3.50Ixmol/L,P<0.001),血清叶酸水平显着低于健康对照者 (4.29ng/ml+3.13ng/ml对l1.24ng/ml-+4.26ng/m1.P<0.001).结论:胃黏膜异型增生与血浆同型半胱氨酸水平升高和 血清叶酸水平降低之间存在一定联系.血浆同型半胱氨酸水平升高和血清叶酸水平降低可能是胃黏膜异型增生的 危险因素.有必要对此作进一步的探讨. 关键词高半胱氨酸;叶酸;胃黏膜;异型增生 RelevanceofPlasmaHomocysteineandSerumFolicAcidLevelsandGastricDysplasiaSHE NBiwu,WANG Yuming,PANGZhi.LIMingzhen,HUAJiang,ZHENGJi~j..DepartmentofGastroenterolo gy,The77lPeople'5 Ho~hdofSuzhou,SuzhouInstituteofDigestiveD~easeandNutrition,Suzhouf2:5OO8) Background:Therelevanceofhomocysteineandcarcinomatouschangeshasbeenatopicofconsiderableinterestin recentyears.Folicacidanditscoenzymearenecessaryforthegrowthanddevelopmentoflivingcells,andfolicacidde— ficiencymaypromotetumorigenesisinmanykindsofcells.Aims:Toidentifytheplasmahomocysteineandserumfolic acidstatusinpatientswithgastricdysplasia.andtoinvestigatetheirrelevance.Methods:Twenty—ninepatientswitIlgas— tricdysplasiaand25healthycontrolswereenrolled.Theplasmalevelofhomocysteinewasmeasuredbyhigh?performance liquidchromatography,andserumleveloffolicacidbymicrobiologicalassay.Results:Inpatientswithgastricdysplasia, theplasmalevelofhomocysteinewassignificantlyhigherthanthatofthehealthycontrols(14.74Ixmol/L_+5.40I.Lmo1]LVS. 8.16Ixmol/L_+3.50I.Lmo1]L,P<0.001),andtheserLlmleveloffolicacidWasmarkedlylowerthanthatofthehealthycon— troisf4.29ng/ml+3.13ng/mlVS.11.24ng/ml+4.26ng/ml.P<0.001).Conclusions:Gastricdysplasiamaybecorrelated withtheincreasedplasmahomocysteineanddecreasedserLImfolicacidlevels.Increasedplasmahomocysteineandde— creasedserumfolicacidlevelsmaybetheriskfactorsforgastricdysplasia.furtherstudiesaleawaited. KeywordsHomocysteine;FolicAcid;GastricMucosa;Dysplasia 近年来.同型半胱氨酸与细胞癌变的关系已引 起广泛重视.叶酸及其辅酶对活细胞的生长发育等 功能具有重要影响.为涉及一碳基团转移的众多关 键性代谢途径所必须.叶酸缺乏与多种肿瘤的发生 有关.然而,关于胃黏膜异型增生患者的血浆同型 半胱氨酸和血清叶酸水平国内尚未见文献报道.本 研究通过测定胃黏膜异型增生患者的血浆同型半 胱氨酸和血清叶酸水平,并与健康对照者进行比 较.以探讨其间的关系. 本文通讯作者 对象与方法 一 ,研究对象 随机选取于2001年12月,2003年11月在我院作胃镜检查,活检标本病理检查示胃窦黏膜异型 增生的胃窦炎患者29例,其中男16例,女13例, 平均年龄48.3岁?6.8岁.另选取25名性别,年龄 匹配(男14例,女11例,平均年龄46.7岁?9.O岁), 于同期在我院接受体检的健康人作为对照.所有健 康对照者均排除心,脑,肺和血管病变,临床生化指 胃肠病学2004年第9卷第5期 标均正常.排除消化系疾病和营养不良性疾病. 二,血浆同型半胱氨酸水平测定 参照Ubbink等【l】的方法.空腹抽取受试者静脉 血2m1.注入洁净,含EDTA二钠的抗凝试管中, 4c【=3000xg离心5min.标本管置一3Oc【=冷藏待 测.采用LC一9A高效液相色谱仪(日本岛津公司)进 行测定,分析柱为ODSCl8(粒径5m,250mmx 4.6mm.美国Beckman公司),荧光分光光度计为岛 津RF535型;激发光波长为358nm.发射光波长为 515nm.流动相为0.1mol/L磷酸二氢钾(以正磷酸 调至pH2.1),含10%乙腈.质控指标:以美国Sigma 公司提供的同型半胱氨酸品作为对照.测定的 批间误差为4.5%.批内误差为9.8%. 三,血清叶酸水平测定 参照Home等【1的方法进行测定.主要试剂和 材料包括干酪乳酸杆菌(L.caseiATCC7469),丙三 醇,亚叶酸标准品,抗坏血酸(均为Sigma公司产 品)和96孔培养板.叶酸培养基配制:称取叶酸培 养基9.4g.加重蒸馏水100ml,使之完全溶解,煮 沸1,2min,冷却后用0.22m滤过器过滤,4?保 存一周.菌液配制:将冻干L.casei溶于5Oml叶酸 培养基内.37?培养l6,18h,然后与80%丙三醇 5Or【ll充分混和,0.5m1分装于无菌管内.一30c【=保 存6个月.测定时加pH6.3的0.1mol/L无菌磷酸缓 冲液(PB)4.5ml.准确称取亚叶酸标准品150mg, 加重蒸馏水l5ml,滴加0.1mol/LNaOH至亚叶酸 完全溶解.再用0.1mol/LHCI调至pH为6.8,7.2. 于25rnl棕色容量瓶中定容.其亚叶酸含量为6g/ L.即为叶酸标准储备液.测定方法:使用前用含抗 坏血酸(1g/L)PB溶液将标准储备液配制2.0ixg/L 叶酸标准应用液.用12通道吸液器吸取150l含 抗坏血酸PB溶液.加入96孔培养板(最后两行除 外).将2.0g门L亚叶酸标准应用液150tzl加入l, 2ZfL.其余312孔加入100tzl含抗坏血酸PB溶 液;吸取5Ol混合血清(取自2O名健康供血者, 用于批间控制)加入3孔;吸取5Ol测定血清加 入4,12孔.然后用12通道吸液器作150tzl倍比 稀释至6个稀释度.将150tzl叶酸培养基加入上 述含有亚叶酸标准应用液,混合血清和测定血清的 各孔内,每孔再加入10lL.casei菌液.最后两行 作为试剂空白(加入150l含坏血酸PB溶液和 150tzl叶酸培养基)和蒸馏水空白(加人300tzl蒸 馏水).37c【=培养16,18h.应用DG-3022A型酶联 仪(南京华东电子管厂产品),以蒸馏水调零,在波 长600nm下进行吸光度测定.再根据标准曲线换 算成nr【ll的叶酸水平. 四,统计学分析 数据以+j示.采用SPsS10.0统计软件.以t 检验分析组间差异,P<0.05为差异有显着性. 结果 胃黏膜异型增生患者的血浆同型半胱氨酸水 平显着高于健康对照者.血清叶酸水平则显着低于 健康对照者(见表1). 表1胃黏膜异型增生患者与健康对照者血浆同型半胱氨 酸和血清叶酸水平比较(+j) 与健康对照组比较.P<O.001 讨论 同型半胱氨酸与细胞异型增生的关系已引起 人们广泛的关注.有研究f3'41报道.子宫颈上皮异型 增生和胃黏膜异型增生患者同型半胱氨酸水平升 高.叶酸水平降低.并认为低叶酸摄入可能是宫颈 癌和胃癌的危险因子.本研究也观察到胃黏膜异型 增生患者的血浆同型半胱氨酸水平显着升高.与健 康对照者相比有显着差异.据文献报道,同型半 胱氨酸引起细胞癌变可能与同型半胱氨酸硫内酯 的形成及其毒性有关.现已了解.同型半胱氨酸硫 内酯可引起细胞增殖性改变,如纤维化,血管形成, 胶原性炎症,钙化,血管内栓塞,鳞状上皮化生,伴 有角蛋白形成(即角质化)以及上皮异型增生.对内 皮细胞进行体外培养的研究[6,71发现,同型半胱氨酸 可促进过氧化氢形成.抑制内皮细胞呼吸,从而导 致内皮细胞损伤并刺激平滑肌细胞增殖.此外,胃 黏膜异型增生性变化与细胞内的DNA,多胺,核蛋 白,组蛋白等与同型半胱氨酸发生酰化有关. 叶酸及其辅酶对活细胞的生长发育等功能具 有重要影响.对核酸的合成以及DNA,RNA,蛋白 质和磷脂分子的生物学甲基化亦有重要影响f81.现 已了解叶酸缺乏与多种肿瘤的发生有关.流行病学 研究发现.叶酸水平与子宫颈,结直肠,肺,食管, 脑和胰腺上皮异型增生有关.叶酸在人体甲基供体 S一腺苷蛋氨酸的形成,以及DNA和RNA的嘌呤, 嘧啶合成中均起重要作用.其缺乏可影响DNA甲 基化以及DNA的整合和受损修复19,10],从而阻碍肿 瘤抑制基因的表达,促进肿瘤的形成.此外,甲基四 氢叶酸还原酶基因多态性对于肿瘤的形成也起一 定作用l】Ol.本研究结果显示胃黏膜异型增生患者的 血清叶酸水平显着低于健康对照者.表明胃黏膜异 型增生与叶酸缺乏之间存在一定联系.大量研究 资料表明.叶酸缺乏患者血浆同型半胱氨酸水平升 高,本研究结果与之类似.提示血浆同型半胱氨酸 水平升高是叶酸缺乏的敏感指标. 通过补充叶酸可以降低血浆同型半胱氨酸水 平.并可能逆转胃黏膜异型增生.我院正在采用这 一 营养干预疗法治疗胃黏膜异型增生患者.予5例 胃黏膜异型增生患者每日补充叶酸5mg,30天后 其血浆同型半胱氨酸水平由l8.6Ixmol/L降至8 Ixmol/L.胃镜活检标本病理检查结果显示胃黏膜异 型增生也有明显改善.与Xiao等…J进行的叶酸干预 研究结果类似.表明补充叶酸是治疗胃黏膜异型增 生极具潜力的有效方法.有必要对胃黏膜异型增生 患者进行大规模人群干预研究. 综上所述.胃黏膜异型增生与血浆同型半胱氨 酸水平升高和血清叶酸水平降低之间存在一定联 系.血浆同型半胱氨酸水平升高和血清叶酸水平降 低可能是胃黏膜异型增生的危险因素.有必要进行 大样本调查以对此作进一步的探讨.天然的叶酸主 要来自生菜,牛肝,羊肝,橙汁和麦胚,而这些食物在 国人膳食中所占的比例较低甚至缺如.目前尚无对 我国大规模人群进行食物中叶酸摄入量调查的报 道.而笔者等的小样本研究表明正常人血清叶酸水 平偏低.有鉴于此,除叶酸补充治疗外,还应提倡多 进食一些富含叶酸的食物,以预防叶酸缺乏,这对预 防胃黏膜异型增生.从而预防胃癌具有重要的意义. 参考文献 1UbbinkJB,HaywardVermaakWJ,BissbortS.Rapid ChinJGastroenterol,2004,Vo1.9,No.5 high—performanceliquidchromatographicassayfortotal homocysteinelevelsinhumansenlm.JChromatogr, 1991,565:441,446. 2HO1TleDW.PattersonD.Lactobacillcaseimicrobiolo— gicalassayoffolicacidderivativesin96一wellmicrotiter plates.ClinChem.1988.34:2357,2359. 3KwasniewskaA,TukendorfA,Gozdzicka.JozefiakA, Semczuk—SikoraA,KorobowiczE.Contentoffolicacid andfreehomocysteineinbloodsenlmofhuman papillomavirus?infectedwomenwithcervicaldysplasia. 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