干化学和湿化学方法测定尿蛋白结果的比较

干化学和湿化学方法测定尿蛋白结果的比较 干化学和湿化学方法测定尿蛋白结果的比 较 临京医学工程2010年5月第17卷第5期 干化学和湿化学方法测定尿蛋白结果的比较 李笑平..曹永坚.,刘振杰. (广州卫生学校,广州510180;广东省中医院芳村分院检验科,广州510370) ? 论着? 【摘要】目的探讨干化学与湿化学不同方法测定尿蛋白(UPRO)的差异.方法选用强生干化学仪器的干化学法和日立 7170A仪器连苯三酚红显色湿化学法测定尿蛋白,同时检测53份标本,进行相关性比较,结果采用t检验,相对偏差,回归分析. 进行统计分析.结果湿化学结果与干化学结果相比明显偏低:低值,中值和高值分别偏低22.8%,39.7%和26.2%.t值分别为 3.452,6.352,6.956,P<0.01,差别有极显着意义.其回归曲线:y=0.7936x-64.224,对b(总体斜率)与a(总体截距)的检 验,tb=5.397,8.502,5.741,5.520,,=2.502,1.944,1.259,0.818:两种方法学测定UPRO结果的系统误差属临床不可接受水 平.结论两种方法的测试结果有显着性差异,有条件的实验室应使用千化学方法定量检测尿蛋白 【关键词】干化学;湿化学;尿蛋白;差异 中图分类号:R446.1T2文献标识码:Adoi:10.3936~.issn.1674—4659.2010.05.044 ComparisonoftheResultsofUrineProteinDeterminationbyDryChemicaiandWetChemic alMethods LIXiaopingJ,CA0yo,mLIUZhenjie.(GuangzhouHealthSchool,Guangzhou510180,Chi na," 2LaboratoryMedwine,FangcunBrahehofGuangdongProvincialHospital,Guangzhou51 0370,China) 【Abstract】 ObjectiveTodiscussthedifferenceofurineprotein(UPRO)determinationbydifferentmethodsofdrychemistryand wetchemistry.MethodsJohnsonchemicalapparatus'SdesiccationresearchmethodandHitachi7170Ainstrumenttrihydroxybenzenered colorationwetchemicalprocesswereselectedtodetermineurineprotein,simultaneouslyexamining53specimenstoearlyontherelevant comparison.TheresultswerestatisticallyanalyzedbyT— test,relativedeviationandregressionanalysis.ResultsWetchemicaldetermination resultwassignificantlylowerthandrychemicalone:low-value,median—valueandhigh— valuewerelower22.8%,39.7%and26.2% respectively,T— valueswere3.452,6.352,6.956,withhighlysignificantdifference<0.01).Theregressioncurve:y=0.7936x-64.224,on theb(overallslope)anda(overallintercept)ofthetest,tb=5.397,8.502,5.741,5.520,,a=2.502,1.944,1.259,0.818;systematicerrorof determinationofUPRobytwokindsofchemicalmethodswasclinicallyunacceptable.ConclusionsDeterminationresuItsoftwomethods havesignificantdifference,whichlaboratorywithgoodconditionsshouldusedrychemicalmethodtodetermineurmeprotein. 【Keywords】Drychemistry;Wetchemistry;Urinaryprotein;Difference 尿蛋白(UPRO)的检测是肾脏疾病诊断常用的初筛实验, 其中.试条法为目前广泛应用于临床尿蛋白定性的方法,简 便,快速,而24h尿蛋白定量则能更准确反映每天排泄的尿蛋 白量.尿蛋白定量检查方法有:沉淀法,比色法,比浊法,染 料结合法等;有学者报道[1],在全自动生化分析仪上用连苯i 酚红法测定尿蛋白是一种准确,快速,方便的方法,而强生 VITROS干化学测定尿蛋白是近年推出的新方法,由于其 值来源于NISTSRM927b标准品,具有可溯源性,目前未见报 道.为探讨两者结果差异程度,特做以下实验. 1材料与方法 1.1材料和标本德国利德曼公司试剂盒,原配参考较准品和 强生配套试剂.仪器:日立7170生化分析仪和强生VIT ROS250分析仪.测定参数:试剂盒所提供的检测参数和仪器配 套参数.测定样品45份:来源于广东省中医院芳村分院肾内 科住院患者留取24小时的尿液样本.利德曼公司标准品浓度: 收稿日期:2010—03—16修回日期:2010—04—20 作者简介:李笑平(1974一),女,本科,主要从事实验室教学工作. ? 44? 1000mg/L. 1.2方法 1.2.1湿化学试剂采用连苯三酚红法原理:连苯三酚红与钼酸 结合形成红色复合物,这个复合物在酸性条件下与蛋白结合形 成蓝紫色复合物,在600nm外有最大吸收.VITROS干化学原 理:在草酸盐存在的条件下,蛋白与邻笨二酚紫一钼酸盐混合 物结合,经固定的孵育时间后,颜色复合物数量与样本中的蛋 白浓度成正比. 1.2.2检测过程使用德国利德曼公司和强生公司配套试剂,分 别用试剂盒所配标准液进行校准,使用两种方法同时检测53 份标本UPRO结果. 1.2.3数据的统计分析不同浓度均值数据比较采用配对t检 验,回归分析选用SPSS14.0软件统计. 2结果 2.1两种方法测试的UPR0结果比较湿化学检测结果与VIT. RO干化学检测结果相比明显偏低,低值,中值和高值分别偏 低22.8%,39.7%和26.2%;数据统计分析,t值分别为3.452, 6.352,6.956,P<0.01,差别有极显着意义,结果见表1. 表1两种方法检测UPRO结果均值比较In=53) 2.2两种方法测试的UPRO结果回归分析比较对测试的53 份UPRO结果进行散点图描述,回归分析,相关系数r: 0.9924?0.975,C=0.9849?0.95,可认为范围合适;对不同 浓度回归曲线b(总体斜率)与a(总体截距)的检验,tb= 5.397,8.502,5.741,5.520,,=2.502,1.944,1.259,0.818, 结果见表2. 表2两种方法检测UPRO结果回归分析比较(n=53) 2.3结果临床可接受性能分析根据临床使用要求,以医学决 定水平的系统误差来判断检测系统的结果是否可以接受.可 在各个临床决定水平浓度xc处,了解Y方法引入后相对于x 方法的相对系统误差(%SE).%sE=(1Yc—xcI/xc)×100% = I(b—1)xc+al/xc]x100%.以CLIA88对室间评估的 允许误差的二分之一为判断依据,由方法学比较评估的相对系 统误差(%SE)不大于允许误差的二分之一,参考血总蛋白的 允许误差.表3统计数据表明,两种方法学测定UPRO结果的 系统误差属临床不可接受水平. 表3实验统计数据和结论 3讨论 尿液蛋白质检测是肾脏疾病诊断和治疗的重要指标之一, 临床中24h尿蛋白量大于3.5g是肾病综合征诊断的重要标准 正常情况下,健康成人尿中排出蛋白质总量为0.024g/24h,可 含有少量来自肾小球的血浆蛋白,如白蛋白,免疫球蛋白,, 微球蛋白和肾小管细胞分泌的蛋白质,如TAMM蛋白及其他肾 脏衍生蛋白等,常规方法检测为阴性,在某些生理情况下可出 现暂时性升高.当肾脏出现肾小球,.肾小管疾病时,尿蛋白常 呈现异常增高.在尿液形成过程中,血浆蛋白的过滤及吸收对 健康完整的肾脏是重要的功能,故通过尿蛋白的有无,蛋白含 量的多少以及蛋白组分的分类检测,对肾脏疾病的诊断,鉴别 Il蠡京医学工程2010年5月第17卷第5期 诊断以及疾病的严重程度,治疗效果评价与预后判断具有重要 意义.同时蛋白尿也可见于糖尿病,肿瘤,高血压以及特定感 染性疾病.最近的研究,尿蛋白已成为其它领域研究对象p---. 尿蛋白定量检查方法有:沉淀法,比色法,比浊法,染料 结合法,免疫测定法和尿蛋白电泳法等.染料结合法,比色法 应用较广泛.免疫法及尿蛋白电泳法具有更高的灵敏度和特异 性,有很好的临床应用前景.由于全自动生化仪在我国的普 及.虽然染料结合法测定结果的可靠性得到认可,但容易污染 比色杯,已逐渐被其它方法取代;邻苯_二酚红钼络合显色法是 目前实验室最常用的蛋白定量方法[51,也可用于尿量有限的大 鼠尿液总蛋白的测定,其方法不受尿比重的影响,当患者尿 中含多量蛋白时结果较可靠. 本次实验结果表明,无论在低值范同内(0,199mg/L) 或浓度达到较高(>800mg/L)时,两者结果相对偏差较大, 分别偏低16.5%,39.6%和24.0%;除低值浓度t外,查t界值 表,,>o5.=2.079,P<0.05,其余水平<?,P>0.05直线 方程的截距与0之间的差别不具有统计学意义;tb>= 2.009.P<O.05.直线方程斜率与1之间的差别具有统计学意 义,即两种测定方法测定的结果之间一致性较差,b<l,说明 当样品含量高于199mg/L时,干化学测定结果明显高于湿化学 的测定结果仔细分析,邻苯三酚显色湿化学法成本低,使用 方便.测定不受尿比重的影响,但尿液含有尿酸盐,碳酸钙, RBC,WBC等多种干扰物质,颜色深浅也容易影响比色法测定 结果:另一方面,对区分正常与轻度异常的蛋白尿灵敏度较 差,低水平的本周氏蛋白或轻链蛋白可能不被测定,而高浓度 的本周氏蛋白或轻链蛋白会引起结果明显偏低.干化学法由于 其试剂干片结构特点,具有过滤层,能有效降低上述干扰因素 的影响,测定结果稳定,同时其标准值来源于NISTSRM927b 参考标准品,其测定系统具可溯源性,因此,两种方法中,干 化学测定结果准确,可信度高;但其方法对于尿比重小于1.010 或大于1.025的大体积(2500mU标本,可能会产生高的24 小时尿蛋白浓度.某些药物也会影响结果,另外试剂经济成本 较高,必须配套专用仪器,不利于在小型医院检验科的应用. 综合考虑,尿液中蛋白尿结果对于肾小球性,肾小管性等病变 早期具有极大意义,干化学法与邻苯j酚显色湿化学法结果有 差异,由于其结果具可溯源性,因此有条件的实验室应使用干 化学方法检测尿蛋白. 参考文献 [1]方芳,王广杰.连苯三酚红法测定尿蛋白的方法学评价[J】l实用医技 杂志,2007,14(2O):l16. 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