天麻

3提取工艺考察指标的选择 3.1化学成分指标的选择 据文献报道，天麻中天麻素、天麻贰 元、香荚兰醇、香荚兰素为明确有效成 分，且多以天麻素作为指标成分。 为验证天麻素作为评价指标的合理 性，采用与TFY功能主治相关的抑制血 小板释放5一HT为指标来评价。药效实 验结果见10 表1天麻素对照品抗血小板释放5一HT作用 (14C一5HT法) cpm值 释放A (%) 放率 释放抑制 率(%) ? ?样 品 终浓度耐 ml 23 ??? ?? ??? ?? ?? ? 正常对照组 .00土140.45 苯唾Q组 10 2270 10 2090 10 1997 .40士113.98 .60士130.14 .63 24 36 36 天麻素 2268.10士374.78 13.19 ?? ??? ??? 注(1)与正常对照组比较;(2)总计数:5620.00士195.75 (cpm) ; _1=M, 1526.00士44.93;提取率: 72.'3496 ; (3)天麻素，中国生物药品检定所供应;(4)均系直接加入反应体系，故以反应体系中药 物终浓度计算给药剂量。 结果表明，天麻素有一定抗血小板释 放5一HT作用。 3.2 浸膏收率 浸膏是固体制剂发挥疗效的物质基 其收得率高低直接影响制剂工艺，故 为提取指标是合理、有效的控制手 3.3 乙醇溶出物收率 根据预试试验，天麻提取液需经大孔 树脂处理，用乙醇洗脱或用高浓度乙醇溶 解天麻提取物浸膏，说明有效物质基础主 要存在乙醇的溶出物中，故乙醇溶出物的 收率可直接影响药效和工艺，宜作为考察 提取效果的指标。 4 不同提取方法研究 4.1动态水提取工艺 预试试验可知，天麻饮片煎煮提取， 极难滤过。文献报道，冷水浸演能提取天 麻素，天麻注射剂工艺之一为水加压提 取。综合考虑，即采用温浸法提取。实验 时，以天麻粗颗粒200g为研究量，选择 1., (34)正交表，以天麻素含量、浸膏收 率、70%乙醇溶出物收率为考察指标，筛 选影响因素，其测定方法如下: 4.1.1浸膏收率测定 合并提取液，滤过，调整Y 3000ml, 再从中取2份50m1，倾入已干燥称重的 蒸发皿中，水浴浓缩至干，移入105r-烘 箱干燥3小时，取出，置干燥器中冷却 30分钟后，取出称重，计算。 :浸膏收得率%二300 x W,(称重量)/50W(投料量) ·3 · X IOM 4.1.2 7096 (J醉溶出物收率浏定 从上述相当于生药200g的提取液中， R取相当于生药100g的提取液，浓缩至 150in1，加入 95%乙醇，使含醉量达 7096,静置，抽滤，准确测定滤液体积， 从中量取2份50m1倾入已干燥称重的蒸 发皿内，水浴浓缩至干，移入105'C烘箱 干燥3小时，取出，置干燥器中冷却30 分钟后，取出称重，计算。 公式:7096乙醇溶出物收率 (%)= 10096 4.1.3 天麻素含量浏定 v(抽滤后滤液体积)x w,(称重量)/50 w (投料量) 按照高效液相色谱法 (中国药典 1995年版部附录VID)测定。 4.1.3.1色谱条件与系统适应性试验 用硅胶作为填充剂，柱温25r,，正 己烷一乙酸乙0一甲醉 (3:1 0.9)为流 动相，流速lml/rrdn,检测波长270nm, 理论板数按天麻素峰计算，应不低于 50000 4.1.3.2对照品溶液的制备 精密称取天麻素对照品(81℃干燥1 小时)适量，加甲醇溶解，并稀释，制成 每1m1中含l00pg的溶液，作为对照品溶 液。 4.1.3.3 供试品溶液的制备 精密吸取上述适量溶液，置25cn1量 瓶中，加入乙醇201n1溶解，加乙醇至刻 度，摇匀;放置橙清，取上清液用 0. 45t=的微孔滤膜过滤，取续滤液作为 供试品溶液。 4.1.3.4 测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶 液各10111，注入液相色谱仪，测定即得。 4.1.4 重复验证实验 根据正交试验结果，确定了提取工 艺，并按此工艺进行了重复性验证试验， 结果见表20 表2 天麻温浸重复验证实验结果 实验号 浸膏收率(%) 天麻素含量(%) 70%乙醇溶出物收率(%) ? ?? ?? ?? ?? ? ? ?? ?、? ? 13.53 14.20士0.5 ?? ?? ?? ?? ?? ?? ? ? ? ? ? ? ? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ? ， ? ， ? ?、? ?? ? ? 6 X上SD 51.75土3.32 0.4010.07 重复性验证实验结果表明，该工艺稳 定可行。 4.2醉提取工艺 用正交试验法考察醇浓度、提取温 度、提取时间及提取次数对提取效果ff'影 nh.以天麻粗颗粒100g为研究量，达择 I.,, (34)正交表，以醇浸膏收率、天麻素 含量为考察指标，其测定方法女日下: 4.2.1 醉浸膏收率浏定 合并:醇回流提取液，滤过，准确量取 体积，从中量取50m1或25nil按上述浸膏 收率测定方法测定，即得。 4 7..之 二麻素含量测定 l,q密吸取上述适量醇洽液 :土述汉 定方法测定。 很据正交试验结果，得出最化Z. +a--(I( 流提取条件。考虑生产实际情况，在满灯 回流提取效果的前提下，尽量减少!'_, i}用 量，降低生产成木，故对溶媒用量进行忧 化实验 调优思路为减夕溶媒川 量，增加提取次数或提取时间。 4.2.3 重复验证实验 通过调优实验选择出实验夕沼鑫o最终 确定醇回流提取工艺并按此工艺进行重复 性验证试验.结果见表30 表3 天麻醉回流提取重复验证试验结果 实验号 醇浸出物收率(%) 醇提水沉液浸膏收率(%) 天麻素含量<%) 1 14.印 12.79 0.42 14.63 13.89 1.2.98 13.74 0.47 0.50 ? ? ? ? .88 0.41 0.44 0.46 ?? ?? ?? ? ?、 ?、 ?? ?? ?? ?? ? ， ?、 ? 13. X士SI) 14.20上0.5 13.19土0.35 士0.03 RSD( 90 ) 3.50 2.64 8.74 重复验证实验结果表明，该工艺稳定可行。 5提取工艺确定 5.1不同提取工艺的性状比较 见下表 表4 天麻不同提取方法性状比较 提取方法 动态水提取 醇提取 色泽 粘度 乳白色、混浊 粘稠 金黄色、透明 不粘稠 5.2 不同提取工艺的TLC分析 供试液制备:各取相当于生药log的 A1种提取方法所得提取液，分别于水浴上 蒸卜，用95%乙醉挤解滤过至2rril, 天麻素对照品制备;取天麻素对照品 ?rrag,容于2m1无水乙醇即得。 天麻对照药材制备:取夭麻对照药材 坛，力L入20m1704/( ，乙醇，水浴回流1小 ;、犷，掂过，滤液水溶挥干乙醇,残渣加人 )5 乙醇溶解，使成lint, 储层板:硅胶G加。.346 CMCNa, 自制，厚度300urn, 点样:供试液与对照液分别点样31,1, 展开剂:乙醚一乙酸乙醋 (5:2), 展开方式:上行展开，展跟15cin*, 显色 喷以1%高锰酸钾溶液 TLC图谱见图2 由图2.可知 两种提取方法对天麻各 成分都有较好的提取效果，且均含有天t, 素, 5.3 不同提取工艺的含量分析 将天麻3种不同提取方法所得提取液 分别测定天麻素含量及浸膏收率，结果见 表50 表5 天麻不同提取方法含量测定结果 提取方法 动态水提取 醇提取 渗辘法 天麻t -I含量(%) 0418 0.494 0.232 沁料诵率('}16 ) 50.7.` 14.23 10.12