食品中脂肪酸及反式脂肪酸之檢驗方法

96年 10月 19日署授食字第 0961800343號公告 食品中脂肪酸及反式脂肪酸之檢驗方法 Method of Test for Fatty Acids and Trans Fatty Acids in Food 1.適用範圍：本檢驗方法適用於食品中脂肪酸及反式脂肪酸之檢驗。 2.檢驗方法：氣相層析法(gas chromatography, GC)。 2.1.裝置： 2.1.1.氣相層析儀： 2.1.1.1.檢出器：火燄離子檢出器(flame ionization detector, FID)。 2.1.1.2.層析管：CP-Sil 88毛細管，內膜厚度 0.20 µm，內徑 0.25 mm × 100 m，或同級品。 2.2.試藥：正己烷、氫氧化鈉、甲醇、氯化鈉、無水硫酸鈉、14%三 氟化硼甲醇溶液均採用化學試藥特級。 2.3.脂肪酸標準品： 2.3.1.飽和脂肪酸甲基酯標準品：四烷酸甲基酯(tetranoic methyl ester, 4:0)、六烷酸甲基酯(hexanoic methyl ester, 6:0)、八烷酸 甲基酯(octanoic methyl ester, 8:0)、十烷酸甲基酯(decanoic methyl ester, 10:0)、十二烷酸甲基酯(dodecanoic methyl ester, 12:0)、十四烷酸甲基酯(tetradecanoic methyl ester, 14:0)、十 六烷酸甲基酯(hexadecanoic methyl ester, 16:0)、十八烷酸甲 基酯 (octadecanoic methyl ester, 18:0)、二十烷酸甲基酯 (eicosanoic methyl ester, 20:0)、二十二烷酸甲基酯(docosanoic methyl ester, 22:0)及二十四烷酸甲基酯(tetracosanoic methyl ester, 24:0)等對照用標準品。 2.3.2.反式脂肪酸甲基酯標準品：9-反式 -十六碳烯酸甲基酯 (9-trans-hexadecenoic methyl ester, 9t-16:1)、4-反式-十八碳烯 酸甲基酯(4-trans-octadecenoic methyl ester, 4t-18:1)、5-反式- 十 八 碳 烯 酸 甲 基 酯 (5-trans-octadecenoic methyl ester, 5t-18:1)、6-反式 -十八碳烯酸甲基酯 (6-trans-octadecenoic methyl ester, 6t-18:1) 、 7- 反 式 十 八 碳 烯 酸 甲 基 酯 (7-trans-octadecenoic methyl ester, 7t-18:1)、8-反式-十八碳烯 酸甲基酯(8-trans-octadecenoic methyl ester, 8t-18:1)、9-反式- 十 八 碳 烯 酸 甲 基 酯 (9-trans-octadecenoic methyl ester, 9t-18:1)、10-反式-十八碳烯酸甲基酯(10-trans-octadecenoic methyl ester, 10t-18:1)、 11-反式 -十八碳烯酸甲基酯 1 96年 10月 19日署授食字第 0961800343號公告 (11-trans-octadecenoic methyl ester, 11t-18:1)、12-反式-十八碳 烯酸甲基酯(12-trans-octadecenoic methyl ester, 12t-18:1)、13- 反式-十八碳烯酸甲基酯(13-trans-octadecenoic methyl ester, 13t-18:1)、14-反式-十八碳烯酸甲基酯(14-trans-octadecenoic methyl ester, 14t-18:1)、 15-反式 -十八碳烯酸甲基酯 (15-trans-octadecenoic methyl ester, 15t-18:1)、16-反式-十八碳 烯酸甲基酯(16-trans-octadecenoic methyl ester, 16t-18:1)、 9-,12-反式十八碳二烯酸甲基酯 (9,12-trans-octadecadienoic methyl ester, 9t,12t-18:2)、9-順式,13-反式-十八碳二烯酸甲基 酯(9-cis,13-trans-octadecadienoic methyl ester, 9c,13t-18:2)、8- 反 式 ,12- 順 式 - 十 八 碳 二 烯 酸 甲 基 酯 (8-trans, 12-cis-octadecadienoic methyl ester, 8t,12c-18:2)、9-順式,12- 反式 -十八碳二烯酸甲基酯 (9-cis,12-trans-octadecadienoic methyl ester, 9c,12t-18:2)、9-反式,12-順式-十八碳二烯酸甲基 酯(9-trans,12-cis-octadecadienoic methyl ester, 9t,12c-18:2)、9- 反 式 ,15- 順 式 - 十 八 碳 二 烯 酸 甲 基 酯 (9-trans,15-cis-octadecadienoic methyl ester, 9t,15c-18:2)、10- 反 式 ,15- 順 式 - 十 八 碳 二 烯 酸 甲 基 酯 (10-trans,15-cis-octadecadienoic methyl ester, 10t,15c-18:2) 、 9- 反 式 ,12- 反 式 ,15- 反 式 - 十 八 碳 三 烯 酸 甲 基 酯 (9-trans,12-trans,15-trans-octadecatrienoic methyl ester, 9t,12t,15t-18:3)、9-反式,12-反式,15-順式-十八碳三烯酸甲基 酯 (9-trans,12-trans,15-cis-octadecatrienoic methyl ester, 9t,12t,15c-18:3)、9-反式,12-順式,15-反式-十八碳三烯酸甲基 酯 (9-trans,12-cis,15-trans-octadecatrienoic methyl ester, 9t,12c,15t-18:3)、9-順式,12-反式,15-反式-十八碳三烯酸甲基 酯 (9-cis,12-trans,15-trans-octadecatrienoic methyl ester, 9c,12t,15t-18:3)、9-順式,12-順式,15-反式-十八碳三烯酸甲基 酯 (9-cis,12-cis,15-trans-octadecatrienoic methyl ester, 9c,12c,15t-18:3)、9-順式,12-反式,15-順式-十八碳三烯酸甲基 酯 (9-cis,12-trans,15-cis-octadecatrienoic methyl ester, 9c,12t,15c-18:3)及 9-反式,12-順式,15-順式-十八碳三烯酸甲 基 酯 (9-trans,12-cis,15-cis-octadecatrienoic methyl ester, 9t,12c,15c-18:3)等對照用標準品。 2.3.3.順式脂肪酸甲基酯標準品：9-順式 -十四碳烯酸甲基酯 (9-cis-tetradecenoic methyl ester, 9c-14:1)、9-順式-十六碳烯酸 甲基酯(9-cis-hexadecenoic methyl ester, 9c-16:1)、6-順式-十八 碳烯酸甲基酯(6-cis-octadecenoic methyl ester, 6c-18:1)、7-順 2 96年 10月 19日署授食字第 0961800343號公告 式 -十八碳烯酸甲基酯 (7-cis-octadecenoic methyl ester, 7c-18:1)、 8-順式 -十八碳烯酸甲基酯 (8-cis-octadecenoic methyl ester, 8c-18:1)、 9-順式 -十八碳烯酸甲基酯 (9-cis-octadecenoic methyl ester, 9c-18:1)、10-順式-十八碳烯 酸甲基酯(10-cis-octadecenoic methyl ester, 10c-18:1)、11-順式 - 十 八 碳 烯 酸 甲 基 酯 (11-cis-octadecenoic methyl ester, 11c-18:1)、12-順式-十八碳烯酸甲基酯(12-cis-octadecenoic methyl ester, 12c-18:1)、 13-順式 -十八碳烯酸甲基酯 (13-cis-octadecenoic methyl ester, 13c-18:1)、14-順式-十八碳 烯酸甲基酯(14-cis-octadecenoic methyl ester, 14c-18:1)、15- 順式 -十八碳烯酸甲基酯 (15-cis-octadecenoic methyl ester, 15c-18:1) 、 9-,13- 順 式 - 十 八 碳 二 烯 酸 甲 基 酯 (9-,13-cis-octadecadienoic methyl ester, 9c,13c-18:2)、9-,12-順 式 -十八碳二烯酸甲基酯 (9-,12-cis-octadecadienoic methyl ester, 9c,12c-18:2)、 9-,14-順式 -十八碳二烯酸甲基酯 (9-,14-cis-octadecadienoic methyl ester, 9c,14c-18:2)、9-,15-順 式 -十八碳二烯酸甲基酯 (9-,15-cis-octadecadienoic methyl ester, 9c,15c-18:2)、9-,12-,15-順式 -十八碳三烯酸甲基酯 (9-,12-,15-cis-octadecatrienoic methyl ester, 9c,12c,15c-18:3)及 11-順式-二十碳烯酸甲基酯(11-cis-eicosenoic methyl ester, 11c-20:1)等對照用標準品。 2.3.4.共軛式脂肪酸甲基酯標準品：9-順式,11-反式-十八碳二烯酸 甲 基 酯 (9-cis,11-trans-octadecadienoic methyl ester, 9c,11t-18:2)、 10-反式 ,12-順式 -十八碳二烯酸甲基酯 (10-trans,12-cis-octadecadienoic methyl ester, 10t,12c-18:2)等 對照用標準品。 2.3.5.內部標準品：二十一烷酸甘油酯(triheneicosanoin, 21:0 TAG) 對照用標準品。 2.4.器具及材料： 2.4.1.加熱器(Block heater)：50~200℃。 2.4.2.旋渦混合器(Vortex mixer)。 2.4.3.褐色玻璃瓶：15 mL，附 Teflon 瓶蓋。 2.4.4.褐色樣品瓶：2 mL，附瓶蓋。 2.5.標準溶液之配製： 稱取脂肪酸甲基酯對照用標準品各約 50 mg，精確稱定，以正 己烷溶解，並定容至 10 mL，供作標準原液。臨用時再以正己 3 96年 10月 19日署授食字第 0961800343號公告 烷稀釋，供作標準溶液。 2.6.內部標準溶液之配製： 稱取二十一烷酸甘油酯對照用標準品約 500 mg，精確稱定，以 正己烷溶解，並定容至 100 mL，供作內部標準溶液。 2.7.粗脂肪之萃取： 稱取相當於含脂肪 100~200 mg之適量檢體，精確稱定，加入內 部標準溶液 2 mL，依 CNS5036 N6117「食品中粗脂肪之檢驗」 萃取粗脂肪，以正己烷溶解並定容至 10 mL。 2.8.檢液之調製： 取 2.7節之溶液 1 mL，置於褐色玻璃瓶中，加入 1N氫氧化鈉甲 醇溶液 1 mL，充填氮氣，拴緊瓶蓋，以旋渦混合器震盪 30秒， 置於加熱器中，以 80℃皂化 15 分鐘，取出冷卻。加入 14%三 氟化硼甲醇溶液(註)1 mL，充填氮氣，拴緊瓶蓋，以旋渦混合器 震盪 30秒，置於加熱器中，以 110℃酯化 15分鐘，取出冷卻。 精確量取正己烷 1 mL，加入上述之褐色玻璃瓶內，拴緊瓶蓋， 以旋渦混合器震盪 1分鐘，加入飽和氯化鈉溶液 6 mL，拴緊瓶 蓋，輕輕震搖，靜置分層，取上層液至褐色樣品瓶中，加入少 量無水硫酸鈉，供作檢液。 註：三氟化硼為有毒物質，相關實驗需於抽氣櫃內進行。 2.9.鑑別試驗及脂肪酸含量測定： 精確量取檢液及標準溶液各 1 µL，注入氣相層析儀中，參照下 列層析條件進行氣相層析，就檢液與標準溶液所得波峰之滯留 時間比較鑑別之，並依下列計算式求出各脂肪酸之含量(%)： 2.9.1.檢體中各脂肪酸甲基酯之含量(WFAMEx)： Ａx × Rx × Wis × 1.004 WFAMEx (g)＝ Ａis Ａx：各脂肪酸甲基酯之波峰面積。 Ａis：內部標準品之波峰面積。 Rx：各脂肪酸甲基酯與二十一烷酸甲基酯在火燄離子檢出器 之相對反應係數，詳如表一。 Wis：內部標準品之添加量(g)。 1.004：二十一烷酸甘油酯轉變為甲基酯之係數。 2.9.2.檢體中脂肪之總含量(%)： 4 96年 10月 19日署授食字第 0961800343號公告 Σ(WFAMEx × ＦTAGx) × 100 檢體中脂肪之總含量(%)＝ W WFAMEx：檢體中各脂肪酸甲基酯之含量(g)。 ＦTAGx：各脂肪酸甲基酯轉換為三酸甘油酯之係數，詳如表二。 W：取樣分析檢體之重量(g)。 2.9.3.檢體中各脂肪酸之含量(Wx)： Wx(g)＝WFAMEx × ＦFAx WFAMEx：檢體中各脂肪酸甲基酯之含量(g)。 ＦFAx：各脂肪酸甲基酯轉換為脂肪酸之係數，詳如表二。 2.9.4.檢體中飽和脂肪酸之含量(%)： ΣWSAFAx × 100 檢體中飽和脂肪酸之含量(%)＝ W ΣWSAFAx：由 2.9.3節所得之各飽和脂肪酸之含量總和(g)。 W：取樣分析檢體之重量(g)。 2.9.5.檢體中順式單元不飽和脂肪酸之含量(%)： ΣWMUFAx × 100 檢體中順式單元不飽和脂肪酸之含量(%)＝ W ΣWMUFAx：由 2.9.3 節所得之各順式單元不飽和脂肪酸之含量 總和(g)。 W：取樣分析檢體之重量(g)。 2.9.6.檢體中順式多元不飽和脂肪酸之含量(%)： ΣWPUFAx × 100 檢體中順式多元不飽和脂肪酸之含量(%)＝ W ΣWPUFAx：由 2.9.3節所得之各順式多元不飽和脂肪酸之含量總 和(g)。 W：取樣分析檢體之重量(g)。 5 96年 10月 19日署授食字第 0961800343號公告 2.9.7.檢體中反式脂肪酸之含量(%)： ΣWTFAx×100 檢體中反式脂肪酸之含量(%)＝ W ΣWTFAx：由 2.9.3節所得之各反式脂肪酸之含量總和(g)。 W：取樣分析檢體之重量(g)。 氣相層析測定條件： 層析管溫度：初溫：170℃，40 min 溫度上升速率：3℃/min 終溫：200℃，25 min 檢出器溫度：300℃ 注入器溫度：250℃ 移動相氣體氦氣流速：0.75 mL/min 分流比：40：1 附註： 1.本檢驗方法最低檢出限量為 0.05%。 2.食品中若有影響檢驗結果之物質，應自行探討。 3.各脂肪酸甲基酯層析圖譜，請參考 The American Oil Chemists' Society Official Method Ce 1h-05。 6 96年 10月 19日署授食字第 0961800343號公告 表一、各脂肪酸甲基酯與二十一烷酸甲基酯在火燄離子檢出器之相對 反應係數 脂肪酸 Rx 脂肪酸 Rx 脂肪酸 Rx 脂肪酸 Rx 4:0 1.5742 14:1 1.0587 18:2 1.0087 22:1 0.9881 5:0 1.4324 15:0 1.0540 18:3 1.0017 22:2 0.9825 6:0 1.3378 15:1 1.0457 18:4 0.9949 22:3 0.9769 7:0 1.2702 16:0 1.0422 19:0 1.0142 22:4 0.9713 8:0 1.2195 16:1 1.0345 20:0 1.0067 22:5 0.9655 9:0 1.1802 16:2 1.0267 20:1 1.0005 22:6 0.9599 10:0 1.1486 16:3 1.0189 20:2 0.9943 23:0 0.9882 11:0 1.1228 16:4 1.0111 20:3 0.9880 24:0 0.9830 12:0 1.1013 17:0 1.0318 20:4 0.9819 24:1 0.9779 12:1 1.0910 17:1 1.0244 20:5 0.9665 13:0 1.0831 18:0 1.0225 21:0 1.0000 14:0 1.0675 18:1 1.0155 22:0 0.9939 表二、各脂肪酸甲基酯轉換為脂肪酸或三酸甘油酯之係數 脂肪酸 ＦFAx ＦTAGx 脂肪酸 ＦFAx ＦTAGx 4:0 0.8627 0.9868 18:4 0.9517 0.9954 6:0 0.8923 0.9897 20:0 0.9570 0.9959 8:0 0.9114 0.9915 20:1 0.9568 0.9959 10:0 0.9247 0.9928 20:2 0.9565 0.9958 11:0 0.9300 0.9933 20:3 0.9562 0.9958 12:0 0.9346 0.9937 20:4 0.9560 0.9958 13:0 0.9386 0.9941 20:5 0.9557 0.9958 14:0 0.9421 0.9945 21:0 0.9588 0.9961 14:1 0.9417 0.9944 22:0 0.9604 0.9962 15:0 0.9453 0.9948 22:1 0.9602 0.9962 15:1 0.9449 0.9947 22:2 0.9600 0.9962 16:0 0.9481 0.9950 22:3 0.9598 0.9961 16:1 0.9477 0.9950 22:4 0.9595 0.9961 17:0 0.9507 0.9953 22:5 0.9593 0.9961 17:1 0.9503 0.9952 22:6 0.9590 0.9961 18:0 0.9530 0.9955 23:0 0.9620 0.9964 18:1 0.9527 0.9955 24:0 0.9633 0.9965 18:2 0.9524 0.9954 24:1 0.9632 0.9965 18:3 0.9520 0.9954 . 7