96年 10月 19日署授食字第 0961800343號公告
食品中脂肪酸及反式脂肪酸之檢驗方法
Method of Test for Fatty Acids and Trans Fatty Acids in Food
1.適用範圍:本檢驗方法適用於食品中脂肪酸及反式脂肪酸之檢驗。
2.檢驗方法:氣相層析法(gas chromatography, GC)。
2.1.裝置:
2.1.1.氣相層析儀:
2.1.1.1.檢出器:火燄離子檢出器(flame ionization detector,
FID)。
2.1.1.2.層析管:CP-Sil 88毛細管,內膜厚度 0.20 µm,內徑
0.25 mm × 100 m,或同級品。
2.2.試藥:正己烷、氫氧化鈉、甲醇、氯化鈉、無水硫酸鈉、14%三
氟化硼甲醇溶液均採用化學試藥特級。
2.3.脂肪酸標準品:
2.3.1.飽和脂肪酸甲基酯標準品:四烷酸甲基酯(tetranoic methyl
ester, 4:0)、六烷酸甲基酯(hexanoic methyl ester, 6:0)、八烷酸
甲基酯(octanoic methyl ester, 8:0)、十烷酸甲基酯(decanoic
methyl ester, 10:0)、十二烷酸甲基酯(dodecanoic methyl ester,
12:0)、十四烷酸甲基酯(tetradecanoic methyl ester, 14:0)、十
六烷酸甲基酯(hexadecanoic methyl ester, 16:0)、十八烷酸甲
基酯 (octadecanoic methyl ester, 18:0)、二十烷酸甲基酯
(eicosanoic methyl ester, 20:0)、二十二烷酸甲基酯(docosanoic
methyl ester, 22:0)及二十四烷酸甲基酯(tetracosanoic methyl
ester, 24:0)等對照用標準品。
2.3.2.反式脂肪酸甲基酯標準品:9-反式 -十六碳烯酸甲基酯
(9-trans-hexadecenoic methyl ester, 9t-16:1)、4-反式-十八碳烯
酸甲基酯(4-trans-octadecenoic methyl ester, 4t-18:1)、5-反式-
十 八 碳 烯 酸 甲 基 酯 (5-trans-octadecenoic methyl ester,
5t-18:1)、6-反式 -十八碳烯酸甲基酯 (6-trans-octadecenoic
methyl ester, 6t-18:1) 、 7- 反 式 十 八 碳 烯 酸 甲 基 酯
(7-trans-octadecenoic methyl ester, 7t-18:1)、8-反式-十八碳烯
酸甲基酯(8-trans-octadecenoic methyl ester, 8t-18:1)、9-反式-
十 八 碳 烯 酸 甲 基 酯 (9-trans-octadecenoic methyl ester,
9t-18:1)、10-反式-十八碳烯酸甲基酯(10-trans-octadecenoic
methyl ester, 10t-18:1)、 11-反式 -十八碳烯酸甲基酯
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(11-trans-octadecenoic methyl ester, 11t-18:1)、12-反式-十八碳
烯酸甲基酯(12-trans-octadecenoic methyl ester, 12t-18:1)、13-
反式-十八碳烯酸甲基酯(13-trans-octadecenoic methyl ester,
13t-18:1)、14-反式-十八碳烯酸甲基酯(14-trans-octadecenoic
methyl ester, 14t-18:1)、 15-反式 -十八碳烯酸甲基酯
(15-trans-octadecenoic methyl ester, 15t-18:1)、16-反式-十八碳
烯酸甲基酯(16-trans-octadecenoic methyl ester, 16t-18:1)、
9-,12-反式十八碳二烯酸甲基酯 (9,12-trans-octadecadienoic
methyl ester, 9t,12t-18:2)、9-順式,13-反式-十八碳二烯酸甲基
酯(9-cis,13-trans-octadecadienoic methyl ester, 9c,13t-18:2)、8-
反 式 ,12- 順 式 - 十 八 碳 二 烯 酸 甲 基 酯 (8-trans,
12-cis-octadecadienoic methyl ester, 8t,12c-18:2)、9-順式,12-
反式 -十八碳二烯酸甲基酯 (9-cis,12-trans-octadecadienoic
methyl ester, 9c,12t-18:2)、9-反式,12-順式-十八碳二烯酸甲基
酯(9-trans,12-cis-octadecadienoic methyl ester, 9t,12c-18:2)、9-
反 式 ,15- 順 式 - 十 八 碳 二 烯 酸 甲 基 酯
(9-trans,15-cis-octadecadienoic methyl ester, 9t,15c-18:2)、10-
反 式 ,15- 順 式 - 十 八 碳 二 烯 酸 甲 基 酯
(10-trans,15-cis-octadecadienoic methyl ester, 10t,15c-18:2) 、
9- 反 式 ,12- 反 式 ,15- 反 式 - 十 八 碳 三 烯 酸 甲 基 酯
(9-trans,12-trans,15-trans-octadecatrienoic methyl ester,
9t,12t,15t-18:3)、9-反式,12-反式,15-順式-十八碳三烯酸甲基
酯 (9-trans,12-trans,15-cis-octadecatrienoic methyl ester,
9t,12t,15c-18:3)、9-反式,12-順式,15-反式-十八碳三烯酸甲基
酯 (9-trans,12-cis,15-trans-octadecatrienoic methyl ester,
9t,12c,15t-18:3)、9-順式,12-反式,15-反式-十八碳三烯酸甲基
酯 (9-cis,12-trans,15-trans-octadecatrienoic methyl ester,
9c,12t,15t-18:3)、9-順式,12-順式,15-反式-十八碳三烯酸甲基
酯 (9-cis,12-cis,15-trans-octadecatrienoic methyl ester,
9c,12c,15t-18:3)、9-順式,12-反式,15-順式-十八碳三烯酸甲基
酯 (9-cis,12-trans,15-cis-octadecatrienoic methyl ester,
9c,12t,15c-18:3)及 9-反式,12-順式,15-順式-十八碳三烯酸甲
基 酯 (9-trans,12-cis,15-cis-octadecatrienoic methyl ester,
9t,12c,15c-18:3)等對照用標準品。
2.3.3.順式脂肪酸甲基酯標準品:9-順式 -十四碳烯酸甲基酯
(9-cis-tetradecenoic methyl ester, 9c-14:1)、9-順式-十六碳烯酸
甲基酯(9-cis-hexadecenoic methyl ester, 9c-16:1)、6-順式-十八
碳烯酸甲基酯(6-cis-octadecenoic methyl ester, 6c-18:1)、7-順
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式 -十八碳烯酸甲基酯 (7-cis-octadecenoic methyl ester,
7c-18:1)、 8-順式 -十八碳烯酸甲基酯 (8-cis-octadecenoic
methyl ester, 8c-18:1)、 9-順式 -十八碳烯酸甲基酯
(9-cis-octadecenoic methyl ester, 9c-18:1)、10-順式-十八碳烯
酸甲基酯(10-cis-octadecenoic methyl ester, 10c-18:1)、11-順式
- 十 八 碳 烯 酸 甲 基 酯 (11-cis-octadecenoic methyl ester,
11c-18:1)、12-順式-十八碳烯酸甲基酯(12-cis-octadecenoic
methyl ester, 12c-18:1)、 13-順式 -十八碳烯酸甲基酯
(13-cis-octadecenoic methyl ester, 13c-18:1)、14-順式-十八碳
烯酸甲基酯(14-cis-octadecenoic methyl ester, 14c-18:1)、15-
順式 -十八碳烯酸甲基酯 (15-cis-octadecenoic methyl ester,
15c-18:1) 、 9-,13- 順 式 - 十 八 碳 二 烯 酸 甲 基 酯
(9-,13-cis-octadecadienoic methyl ester, 9c,13c-18:2)、9-,12-順
式 -十八碳二烯酸甲基酯 (9-,12-cis-octadecadienoic methyl
ester, 9c,12c-18:2)、 9-,14-順式 -十八碳二烯酸甲基酯
(9-,14-cis-octadecadienoic methyl ester, 9c,14c-18:2)、9-,15-順
式 -十八碳二烯酸甲基酯 (9-,15-cis-octadecadienoic methyl
ester, 9c,15c-18:2)、9-,12-,15-順式 -十八碳三烯酸甲基酯
(9-,12-,15-cis-octadecatrienoic methyl ester, 9c,12c,15c-18:3)及
11-順式-二十碳烯酸甲基酯(11-cis-eicosenoic methyl ester,
11c-20:1)等對照用標準品。
2.3.4.共軛式脂肪酸甲基酯標準品:9-順式,11-反式-十八碳二烯酸
甲 基 酯 (9-cis,11-trans-octadecadienoic methyl ester,
9c,11t-18:2)、 10-反式 ,12-順式 -十八碳二烯酸甲基酯
(10-trans,12-cis-octadecadienoic methyl ester, 10t,12c-18:2)等
對照用標準品。
2.3.5.內部標準品:二十一烷酸甘油酯(triheneicosanoin, 21:0 TAG)
對照用標準品。
2.4.器具及材料:
2.4.1.加熱器(Block heater):50~200℃。
2.4.2.旋渦混合器(Vortex mixer)。
2.4.3.褐色玻璃瓶:15 mL,附 Teflon 瓶蓋。
2.4.4.褐色樣品瓶:2 mL,附瓶蓋。
2.5.標準溶液之配製:
稱取脂肪酸甲基酯對照用標準品各約 50 mg,精確稱定,以正
己烷溶解,並定容至 10 mL,供作標準原液。臨用時再以正己
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烷稀釋,供作標準溶液。
2.6.內部標準溶液之配製:
稱取二十一烷酸甘油酯對照用標準品約 500 mg,精確稱定,以
正己烷溶解,並定容至 100 mL,供作內部標準溶液。
2.7.粗脂肪之萃取:
稱取相當於含脂肪 100~200 mg之適量檢體,精確稱定,加入內
部標準溶液 2 mL,依 CNS5036 N6117「食品中粗脂肪之檢驗」
萃取粗脂肪,以正己烷溶解並定容至 10 mL。
2.8.檢液之調製:
取 2.7節之溶液 1 mL,置於褐色玻璃瓶中,加入 1N氫氧化鈉甲
醇溶液 1 mL,充填氮氣,拴緊瓶蓋,以旋渦混合器震盪 30秒,
置於加熱器中,以 80℃皂化 15 分鐘,取出冷卻。加入 14%三
氟化硼甲醇溶液(註)1 mL,充填氮氣,拴緊瓶蓋,以旋渦混合器
震盪 30秒,置於加熱器中,以 110℃酯化 15分鐘,取出冷卻。
精確量取正己烷 1 mL,加入上述之褐色玻璃瓶內,拴緊瓶蓋,
以旋渦混合器震盪 1分鐘,加入飽和氯化鈉溶液 6 mL,拴緊瓶
蓋,輕輕震搖,靜置分層,取上層液至褐色樣品瓶中,加入少
量無水硫酸鈉,供作檢液。
註:三氟化硼為有毒物質,相關實驗需於抽氣櫃內進行。
2.9.鑑別試驗及脂肪酸含量測定:
精確量取檢液及標準溶液各 1 µL,注入氣相層析儀中,參照下
列層析條件進行氣相層析,就檢液與標準溶液所得波峰之滯留
時間比較鑑別之,並依下列計算式求出各脂肪酸之含量(%):
2.9.1.檢體中各脂肪酸甲基酯之含量(WFAMEx):
Ax × Rx × Wis × 1.004
WFAMEx (g)=
Ais
Ax:各脂肪酸甲基酯之波峰面積。
Ais:內部標準品之波峰面積。
Rx:各脂肪酸甲基酯與二十一烷酸甲基酯在火燄離子檢出器
之相對反應係數,詳如表一。
Wis:內部標準品之添加量(g)。
1.004:二十一烷酸甘油酯轉變為甲基酯之係數。
2.9.2.檢體中脂肪之總含量(%):
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Σ(WFAMEx × FTAGx) × 100
檢體中脂肪之總含量(%)=
W
WFAMEx:檢體中各脂肪酸甲基酯之含量(g)。
FTAGx:各脂肪酸甲基酯轉換為三酸甘油酯之係數,詳如表二。
W:取樣分析檢體之重量(g)。
2.9.3.檢體中各脂肪酸之含量(Wx):
Wx(g)=WFAMEx × FFAx
WFAMEx:檢體中各脂肪酸甲基酯之含量(g)。
FFAx:各脂肪酸甲基酯轉換為脂肪酸之係數,詳如表二。
2.9.4.檢體中飽和脂肪酸之含量(%):
ΣWSAFAx × 100
檢體中飽和脂肪酸之含量(%)=
W
ΣWSAFAx:由 2.9.3節所得之各飽和脂肪酸之含量總和(g)。
W:取樣分析檢體之重量(g)。
2.9.5.檢體中順式單元不飽和脂肪酸之含量(%):
ΣWMUFAx × 100
檢體中順式單元不飽和脂肪酸之含量(%)=
W
ΣWMUFAx:由 2.9.3 節所得之各順式單元不飽和脂肪酸之含量
總和(g)。
W:取樣分析檢體之重量(g)。
2.9.6.檢體中順式多元不飽和脂肪酸之含量(%):
ΣWPUFAx × 100
檢體中順式多元不飽和脂肪酸之含量(%)=
W
ΣWPUFAx:由 2.9.3節所得之各順式多元不飽和脂肪酸之含量總
和(g)。
W:取樣分析檢體之重量(g)。
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2.9.7.檢體中反式脂肪酸之含量(%):
ΣWTFAx×100
檢體中反式脂肪酸之含量(%)=
W
ΣWTFAx:由 2.9.3節所得之各反式脂肪酸之含量總和(g)。
W:取樣分析檢體之重量(g)。
氣相層析測定條件:
層析管溫度:初溫:170℃,40 min
溫度上升速率:3℃/min
終溫:200℃,25 min
檢出器溫度:300℃
注入器溫度:250℃
移動相氣體氦氣流速:0.75 mL/min
分流比:40:1
附註:
1.本檢驗方法最低檢出限量為 0.05%。
2.食品中若有影響檢驗結果之物質,應自行探討。
3.各脂肪酸甲基酯層析圖譜,請參考 The American Oil Chemists'
Society Official Method Ce 1h-05。
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表一、各脂肪酸甲基酯與二十一烷酸甲基酯在火燄離子檢出器之相對
反應係數
脂肪酸 Rx 脂肪酸 Rx 脂肪酸 Rx 脂肪酸 Rx
4:0 1.5742 14:1 1.0587 18:2 1.0087 22:1 0.9881
5:0 1.4324 15:0 1.0540 18:3 1.0017 22:2 0.9825
6:0 1.3378 15:1 1.0457 18:4 0.9949 22:3 0.9769
7:0 1.2702 16:0 1.0422 19:0 1.0142 22:4 0.9713
8:0 1.2195 16:1 1.0345 20:0 1.0067 22:5 0.9655
9:0 1.1802 16:2 1.0267 20:1 1.0005 22:6 0.9599
10:0 1.1486 16:3 1.0189 20:2 0.9943 23:0 0.9882
11:0 1.1228 16:4 1.0111 20:3 0.9880 24:0 0.9830
12:0 1.1013 17:0 1.0318 20:4 0.9819 24:1 0.9779
12:1 1.0910 17:1 1.0244 20:5 0.9665
13:0 1.0831 18:0 1.0225 21:0 1.0000
14:0 1.0675 18:1 1.0155 22:0 0.9939
表二、各脂肪酸甲基酯轉換為脂肪酸或三酸甘油酯之係數
脂肪酸 FFAx FTAGx 脂肪酸 FFAx FTAGx
4:0 0.8627 0.9868 18:4 0.9517 0.9954
6:0 0.8923 0.9897 20:0 0.9570 0.9959
8:0 0.9114 0.9915 20:1 0.9568 0.9959
10:0 0.9247 0.9928 20:2 0.9565 0.9958
11:0 0.9300 0.9933 20:3 0.9562 0.9958
12:0 0.9346 0.9937 20:4 0.9560 0.9958
13:0 0.9386 0.9941 20:5 0.9557 0.9958
14:0 0.9421 0.9945 21:0 0.9588 0.9961
14:1 0.9417 0.9944 22:0 0.9604 0.9962
15:0 0.9453 0.9948 22:1 0.9602 0.9962
15:1 0.9449 0.9947 22:2 0.9600 0.9962
16:0 0.9481 0.9950 22:3 0.9598 0.9961
16:1 0.9477 0.9950 22:4 0.9595 0.9961
17:0 0.9507 0.9953 22:5 0.9593 0.9961
17:1 0.9503 0.9952 22:6 0.9590 0.9961
18:0 0.9530 0.9955 23:0 0.9620 0.9964
18:1 0.9527 0.9955 24:0 0.9633 0.9965
18:2 0.9524 0.9954 24:1 0.9632 0.9965
18:3 0.9520 0.9954
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