生物化工专业优秀论文 费氏丙酸杆菌维生素b,12生物合成基因的克隆和解析

生物化工专业优秀论文 费氏丙酸杆菌维生素b,12生物合成基因的克隆和解析 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 生物化工专业优秀论文 费氏丙酸杆菌维生素B<,12>生物合成基因 的克隆和解析 关键词:维生素B12 生物合成基因 费氏丙酸杆菌 基因解析 基因克隆 生物合 成 摘要:维生素B&lt;,12&gt;是一种哺乳动物所必需的维生素，具有广泛的生理学作用，但是哺乳动物自身却不能合成，仅有某些特定的微生物才能合成维生素B&lt;,12&gt;如杆菌，沙门氏菌，丙酸菌和假单胞菌。目前，工业上主要利用脱氮假单胞菌和费氏丙酸杆菌进行维生素 B&lt;,12&gt;的生产。由于费氏丙酸杆菌不产生任何毒素，被美国FDA认定为GRAS(Generlly reagard as safe)，其发酵过程能耗低，染菌概率小。因此，费氏丙酸杆菌在维生素B12的发酵生产上占据了越来越重要的地位。为了详尽代谢过程，阐明合成途径，迄今为止，人们已经获得了大部分费氏丙酸杆菌维生素B&lt;,12&gt;生物合成相关的基因，但是，应用费氏丙酸杆菌发酵生产维生素B&lt;,12&gt;的生物合成途径仍不明确。 本研究以 p;lt;,12&gt;生物费氏丙酸杆菌为出发菌株，克隆、解析了与维生素B&am 合成相关的部分基因。首先，应用遗传互补法，将费氏丙酸杆菌IFO12424株的染色体基因文库，电击转化到Salmonella typhimurium Cob?领域的缺失突变 株TT10858中，进行P.freudenreichi Cob?领域维生素B&lt;,12&gt; 生物合成基因的筛选，结果得到了4206bp的DNA片段，命名为P4。解析结果表 -苏氨酸-O-3-明，该片段包含了一个部分的和三个完整的读写框，依次为编码L磷酸盐脱羧酶的cobD，编码腺苷钻啉酰胺(AdoCbi)激酶和AdoCbi-P鸟苷酸转移酶的cobU，负责催化AdoCbi-GDP与α-ribazole连接，完成腺苷钴胺素(AdoCbI)最终合成的cobS，及编码转录调节蛋白的cobR。 然后，根据所得cobD的碱基序列，相应引物，应用LA PCR&lt;&#39;TM&gt; in vitro Cloning Kit，获得了cobD上游3290bp的序列信息，命名为P3。经序列分析，发现此片段包含了编码钴啉酸a，c-二酰胺合成酶的cbiA、负责传递腺苷将钴啉胺酸a，c-二酰胺转化生成腺苷钴啉胺酸a，c-二酰胺的cobA，催化腺苷钴啉胺酸a，c-二酰胺酰胺化生成腺苷钴啉胺酸的cbiP以及cobD的上游区域。 最后，将两者合并后得到全长为7308bp的DNA片段，命名为P7。经ORF检索和同源性分析，发现此片段包含了一个部分ORF和5个完整的ORF，依次为cbiP，cobA，cbiA(cbiA-cobD)，cobU，cobS和cobR，它们编码的蛋白负责催化费氏丙酸杆菌发酵生产维生素B&lt;,12&gt;过程中，从钴啉胺酸a，c-二酰胺到最终AdoCbI的生成。因此，发现这些基因为探索费氏丙酸杆菌维生素B&lt;,12&gt;的生物合成途经将具有一定的理论意义。 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 正文内容 维生素B&lt;,12&gt;是一种哺乳动物所必需的维生素，具有广泛的生理学作用，但是哺乳动物自身却不能合成，仅有某些特定的微生物才能合成维生素B&lt;,12&gt;如杆菌，沙门氏菌，丙酸菌和假单胞菌。目前，工业上主要利用脱氮假单胞菌和费氏丙酸杆菌进行维生素 B&lt;,12&gt;的生产。由于费氏丙酸杆菌不产生任何毒素，被美国FDA认定为GRAS(Generlly reagard as safe)，其发酵过程能耗低，染菌概率小。因此，费氏丙酸杆菌在维生素B12的发酵生产上占据了越来越重要的地位。为了详尽代谢过程，阐明合成途径，迄今为止，人们已经获得了大部分费氏丙酸杆菌维生素B&lt;,12&gt;生物合成相关的基因，但是，应用费氏丙酸杆菌发酵生产维生素B&lt;,12&gt;的生物合成途径仍不明确。 本研究以 ;,12&gt;生物费氏丙酸杆菌为出发菌株，克隆、解析了与维生素B&lt合成相关的部分基因。首先，应用遗传互补法，将费氏丙酸杆菌IFO12424株的染色体基因文库，电击转化到Salmonella typhimurium Cob?领域的缺失突变 株TT10858中，进行P.freudenreichi Cob?领域维生素B&lt;,12&gt; 生物合成基因的筛选，结果得到了4206bp的DNA片段，命名为P4。解析结果表 -苏氨酸-O-3-明，该片段包含了一个部分的和三个完整的读写框，依次为编码L磷酸盐脱羧酶的cobD，编码腺苷钻啉酰胺(AdoCbi)激酶和AdoCbi-P鸟苷酸转移酶的cobU，负责催化AdoCbi-GDP与α-ribazole连接，完成腺苷钴胺素(AdoCbI) ，及编码转录调节蛋白的cobR。 然后，根据所得cobD的碱最终合成的cobS 基序列，设计相应引物，应用LA PCR&lt;&#39;TM&gt; in vitro Cloning Kit，获得了cobD上游3290bp的序列信息，命名为P3。经序列分析，发现此片段包含了编码钴啉酸a，c-二酰胺合成酶的cbiA、负责传递腺苷将钴啉胺酸a，c-二酰胺转化生成腺苷钴啉胺酸a，c-二酰胺的cobA，催化腺苷钴啉胺酸a，c-二酰胺酰胺化生成腺苷钴啉胺酸的cbiP以及cobD的上游区域。 最后，将两者合并后得到全长为7308bp的DNA片段，命名为P7。经ORF检索和同源性分析，发现此片段包含了一个部分ORF和5个完整的ORF，依次为cbiP，cobA，cbiA(cbiA-cobD)，cobU，cobS和cobR，它们编码的蛋白负责催化费氏丙酸杆菌发酵生产维生素B&lt;,12&gt;过程中，从钴啉胺酸a，c-二酰胺到最终AdoCbI的生成。因此，发现这些基因为探索费氏丙酸杆菌维生素B&lt;,12&gt;的生物合成途经将具有一定的理论意义。 维生素B&lt;,12&gt;是一种哺乳动物所必需的维生素，具有广泛的生理学作用，但是哺乳动物自身却不能合成，仅有某些特定的微生物才能合成维生素B&lt;,12&gt;如杆菌，沙门氏菌，丙酸菌和假单胞菌。目前，工业上主要利用脱氮假单胞菌和费氏丙酸杆菌进行维生素B&lt;,12&gt;的生产。由于费氏丙酸杆菌不产生任何毒素，被美国FDA认定为GRAS(Generlly reagard as safe)，其发酵过程能耗低，染菌概率小。因此，费氏丙酸杆菌在维生素B12的发酵生产上占据了越来越重要的地位。为了详尽代谢过程，阐明合成途径，迄今为止，人们已经获得了大部分费氏丙酸杆菌维生素 B&lt;,12&gt;生物合成相关的基因，但是，应用费氏丙酸杆菌发酵生产维生素B&lt;,12&gt;的生物合成途径仍不明确。 本研究以费氏丙酸杆菌为出发菌株，克隆、解析了与维生素B&lt;,12&gt;生物合成相关的部分基因。首先，应用遗传互补法，将费氏丙酸杆菌IFO12424株的染色体基 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 因文库，电击转化到Salmonella typhimurium Cob?领域的缺失突变株TT10858中，进行P.freudenreichi Cob?领域维生素B&lt;,12&gt;生物合成基因的筛选，结果得到了4206bp的DNA片段，命名为P4。解析结果表明，该片段包含了一个部分的和三个完整的读写框，依次为编码L-苏氨酸-O-3-磷酸盐脱羧酶的cobD，编码腺苷钻啉酰胺(AdoCbi)激酶和AdoCbi-P鸟苷酸转移酶的cobU，负责催化AdoCbi-GDP与α-ribazole连接，完成腺苷钴胺素(AdoCbI)最终合成的cobS，及编码转录调节蛋白的cobR。 然后，根据所得cobD的碱基序列，设计相应引物，应用LA PCR&lt;&#39;TM&gt; in vitro Cloning Kit，获得了cobD上游3290bp的序列信息，命名为P3。经序列分析，发现此片段包含了编码钴啉酸a，c-二酰胺合成酶的cbiA、负责传递腺苷将钴啉胺酸a，c-二酰胺转化生成腺苷钴啉胺酸a，c-二酰胺的cobA，催化腺苷钴啉胺酸a，c-二酰胺酰胺化生成腺苷钴啉胺酸的cbiP以及cobD的上游区域。 最后，将两 。经ORF检索和同源性分析，者合并后得到全长为7308bp的DNA片段，命名为P7 发现此片段包含了一个部分ORF和5个完整的ORF，依次为cbiP，cobA，cbiA(cbiA-cobD)，cobU，cobS和cobR，它们编码的蛋白负责催化费氏丙酸杆菌发酵生产维生素B&lt;,12&gt;过程中，从钴啉胺酸a，c-二酰胺到最终AdoCbI的生成。因此，发现这些基因为探索费氏丙酸杆菌维生素B&lt;,12&gt;的生物合成途经将具有一定的理论意义。 维生素B&lt;,12&gt;是一种哺乳动物所必需的维生素，具有广泛的生理学作用，但是哺乳动物自身却不能合成，仅有某些特定的微生物才能合成维生素B&lt;,12&gt;如杆菌，沙门氏菌，丙酸菌和假单胞菌。目前，工业上主要利用脱氮假单胞菌和费氏丙酸杆菌进行维生素B&lt;,12&gt;的生产。由于费氏丙酸杆菌不产生任何毒素，被美国FDA认定为GRAS(Generlly reagard as safe)，其发酵过程能耗低，染菌概率小。因此，费氏丙酸杆菌在维生素B12的发酵生产上占据了越来越重要的地位。为了详尽代谢过程，阐明合成途径，迄今为止，人们已经获得了大部分费氏丙酸杆菌维生素 B&lt;,12&gt;生物合成相关的基因，但是，应用费氏丙酸杆菌发酵生产维生素B&lt;,12&gt;的生物合成途径仍不明确。 本研究以费氏丙酸杆菌为出发菌株，克隆、解析了与维生素B&lt;,12&gt;生物合成相关的部分基因。首先，应用遗传互补法，将费氏丙酸杆菌IFO12424株的染色体基因文库，电击转化到Salmonella typhimurium Cob?领域的缺失突变株TT10858中，进行P.freudenreichi Cob?领域维生素B&lt;,12&gt;生物合成基因的筛选，结果得到了4206bp的DNA片段，命名为P4。解析结果表明，该片段包含了一个部分的和三个完整的读写框，依次为编码L-苏氨酸-O-3-磷酸盐脱羧酶的cobD，编码腺苷钻啉酰胺(AdoCbi)激酶和AdoCbi-P鸟苷酸转移酶的cobU，负责催化AdoCbi-GDP与α-ribazole连接，完成腺苷钴胺素(AdoCbI)最终合成的cobS，及编码转录调节蛋白的cobR。 然后，根据所得cobD的碱基序列，设计相应引物，应用LA PCR&lt;&#39;TM&gt; in vitro Cloning Kit，获得了cobD上游3290bp的序列信息，命名为P3。经序列分析，发现此片段包含了编码钴啉酸a，c-二酰胺合成酶的cbiA、负责传递腺苷将钴啉胺酸a，c-二酰胺转化生成腺苷钴啉胺酸a，c-二酰胺的cobA，催化腺苷钴啉胺酸a，c-二酰胺酰胺化生成腺苷钴啉胺酸的cbiP以及cobD的上游区域。 最后，将两者合并后得到全长为7308bp的DNA片段，命名为P7。经ORF检索和同源性分析，发现此片段包含了一个部分ORF和5个完整的ORF，依次为cbiP，cobA， 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 cbiA(cbiA-cobD)，cobU，cobS和cobR，它们编码的蛋白负责催化费氏丙酸杆菌发酵生产维生素B&lt;,12&gt;过程中，从钴啉胺酸a，c-二酰胺到最终AdoCbI的生成。因此，发现这些基因为探索费氏丙酸杆菌维生素B&lt;,12&gt;的生物合成途经将具有一定的理论意义。 维生素B&lt;,12&gt;是一种哺乳动物所必需的维生素，具有广泛的生理学作用，但是哺乳动物自身却不能合成，仅有某些特定的微生物才能合成维生素B&lt;,12&gt;如杆菌，沙门氏菌，丙酸菌和假单胞菌。目前，工业上主要利用脱氮假单胞菌和费氏丙酸杆菌进行维生素B&lt;,12&gt;的生产。由于费氏丙酸杆菌不产生任何毒素，被美国FDA认定为GRAS(Generlly reagard as safe)，其发酵过程能耗低，染菌概率小。因此，费氏丙酸杆菌在维生素B12的发酵生产上占据了越来越重要的地位。为了详尽代谢过程，阐明合成途径，迄今为止，人们已经获得了大部分费氏丙酸杆菌维生素 B&lt;,12&gt;生物合成相关的基因，但是，应用费氏丙酸杆菌发酵生产维生素B&lt;,12&gt;的生物合成途径仍不明确。 本研究以费氏丙酸杆菌为出发菌株，克隆、解析了与维生素B&lt;,12&gt;生物合成相关的部分基因。首先，应用遗传互补法，将费氏丙酸杆菌IFO12424株的染色体基因文库，电击转化到Salmonella typhimurium Cob?领域的缺失突变株TT10858中，进行P.freudenreichi Cob?领域维生素B&lt;,12&gt;生物合成基因的筛选，结果得到了4206bp的DNA片段，命名为P4。解析结果表明，该片段包含了一个部分的和三个完整的读写框，依次为编码L-苏氨酸-O-3-磷酸盐脱羧 ，编码腺苷钻啉酰胺(AdoCbi)激酶和AdoCbi-P鸟苷酸转移酶的cobU，酶的cobD 负责催化AdoCbi-GDP与α-ribazole连接，完成腺苷钴胺素(AdoCbI)最终合成 ，及编码转录调节蛋白的cobR。 然后，根据所得cobD的碱基序列，的cobS 设计相应引物，应用LA PCR&lt;&#39;TM&gt; in vitro Cloning Kit，获得了cobD上游3290bp的序列信息，命名为P3。经序列分析，发现此片段包含了编码钴啉酸a，c-二酰胺合成酶的cbiA、负责传递腺苷将钴啉胺酸a，c-二酰胺转化生成腺苷钴啉胺酸a，c-二酰胺的cobA，催化腺苷钴啉胺酸a，c-二酰胺酰胺化生成腺苷钴啉胺酸的cbiP以及cobD的上游区域。 最后，将两者合并后得到全长为7308bp的DNA片段，命名为P7。经ORF检索和同源性分析，发现此片段包含了一个部分ORF和5个完整的ORF，依次为cbiP，cobA，cbiA(cbiA-cobD)，cobU，cobS和cobR，它们编码的蛋白负责催化费氏丙酸杆菌发酵生产维生素B&lt;,12&gt;过程中，从钴啉胺酸a，c-二酰胺到最终AdoCbI的生成。因此，发现这些基因为探索费氏丙酸杆菌维生素B&lt;,12&gt;的生物合成途经将具有一定的理论意义。 维生素B&lt;,12&gt;是一种哺乳动物所必需的维生素，具有广泛的生理学作用，但是哺乳动物自身却不能合成，仅有某些特定的微生物才能合成维生素B&lt;,12&gt;如杆菌，沙门氏菌，丙酸菌和假单胞菌。目前，工业上主要利用脱氮假单胞菌和费氏丙酸杆菌进行维生素B&lt;,12&gt;的生产。由于费氏丙酸杆菌不产生任何毒素，被美国FDA认定为GRAS(Generlly reagard as safe)，其发酵过程能耗低，染菌概率小。因此，费氏丙酸杆菌在维生素B12的发酵生产上占据了越来越重要的地位。为了详尽代谢过程，阐明合成途径，迄今为止，人们已经获得了大部分费氏丙酸杆菌维生素 B&lt;,12&gt;生物合成相关的基因，但是，应用费氏丙酸杆菌发酵生产维生素B&lt;,12&gt;的生物合成途径仍不明确。 本研究以费氏丙酸 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 杆菌为出发菌株，克隆、解析了与维生素B&lt;,12&gt;生物合成相关的部分基因。首先，应用遗传互补法，将费氏丙酸杆菌IFO12424株的染色体基因文库，电击转化到Salmonella typhimurium Cob?领域的缺失突变株TT10858中，进行P.freudenreichi Cob?领域维生素B&lt;,12&gt;生物合成基因的筛选，结果得到了4206bp的DNA片段，命名为P4。解析结果表明，该片段包含了一个部分的和三个完整的读写框，依次为编码L-苏氨酸-O-3-磷酸盐脱羧酶的cobD，编码腺苷钻啉酰胺(AdoCbi)激酶和AdoCbi-P鸟苷酸转移酶的cobU，负责催化AdoCbi-GDP与α-ribazole连接，完成腺苷钴胺素(AdoCbI)最终合成的cobS，及编码转录调节蛋白的cobR。 然后，根据所得cobD的碱基序列，设计相应引物，应用LA PCR&lt;&#39;TM&gt; in vitro Cloning Kit，获得了cobD上游3290bp的序列信息，命名为P3。经序列分析，发现此片段包含了编码钴啉酸a，c-二酰胺合成酶的cbiA、负责传递腺苷将钴啉胺酸a，-二酰胺转化生成腺苷钴啉胺酸a，c-二酰胺的cobA，催化腺苷钴啉胺酸a，c-c 二酰胺酰胺化生成腺苷钴啉胺酸的cbiP以及cobD的上游区域。 最后，将两者合并后得到全长为7308bp的DNA片段，命名为P7。经ORF检索和同源性分析，发现此片段包含了一个部分ORF和5个完整的ORF，依次为cbiP，cobA，cbiA(cbiA-cobD)，cobU，cobS和cobR，它们编码的蛋白负责催化费氏丙酸杆菌 ，c-二酰胺到最终发酵生产维生素B&lt;,12&gt;过程中，从钴啉胺酸a AdoCbI的生成。因此，发现这些基因为探索费氏丙酸杆菌维生素B&lt;,12&gt;的生物合成途经将具有一定的理论意义。 维生素B&lt;,12&gt;是一种哺乳动物所必需的维生素，具有广泛的生理学作用，但是哺乳动物自身却不能合成，仅有某些特定的微生物才能合成维生素B&lt;,12&gt;如杆菌，沙门氏菌，丙酸菌和假单胞菌。目前，工业上主要利用脱氮假单胞菌和费氏丙酸杆菌进行维生素B&lt;,12&gt;的生产。由于费氏丙酸杆菌不产生任何毒素，被美国FDA认定为GRAS(Generlly reagard as safe)，其发酵过程能耗低，染菌概率小。因此，费氏丙酸杆菌在维生素B12的发酵生产上占据了越来越重要的地位。为了详尽代谢过程，阐明合成途径，迄今为止，人们已经获得了大部分费氏丙酸杆菌维生素 B&lt;,12&gt;生物合成相关的基因，但是，应用费氏丙酸杆菌发酵生产维生素B&lt;,12&gt;的生物合成途径仍不明确。 本研究以费氏丙酸杆菌为出发菌株，克隆、解析了与维生素B&lt;,12&gt;生物合成相关的部分基因。首先，应用遗传互补法，将费氏丙酸杆菌IFO12424株的染色体基因文库，电击转化到Salmonella typhimurium Cob?领域的缺失突变株TT10858中，进行P.freudenreichi Cob?领域维生素B&lt;,12&gt;生物合成基因的筛选，结果得到了4206bp的DNA片段，命名为P4。解析结果表明，该片段包含了一个部分的和三个完整的读写框，依次为编码L-苏氨酸-O-3-磷酸盐脱羧酶的cobD，编码腺苷钻啉酰胺(AdoCbi)激酶和AdoCbi-P鸟苷酸转移酶的cobU，负责催化AdoCbi-GDP与α-ribazole连接，完成腺苷钴胺素(AdoCbI)最终合成的cobS，及编码转录调节蛋白的cobR。 然后，根据所得cobD的碱基序列，设计相应引物，应用LA PCR&lt;&#39;TM&gt; 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in vitro Cloning Kit，获得了cobD上游3290bp的序列信息，命名为P3。经序列分析，发现此片段包含了编码钴啉酸a，c-二酰胺合成酶的cbiA、负责传递腺苷将钴啉胺酸a，c-二酰胺转化生成腺苷钴啉胺酸a，c-二酰胺的cobA，催化腺苷钴啉胺酸a，c-二酰胺酰胺化生成腺苷钴啉胺酸的cbiP以及cobD的上游区域。 最后，将两者合并后得到全长为7308bp的DNA片段，命名为P7。经ORF检索和同源性分析，发现此片段包含了一个部分ORF和5个完整的ORF，依次为cbiP，cobA，cbiA(cbiA-cobD)，cobU，cobS和cobR，它们编码的蛋白负责催化费氏丙酸杆菌发酵生产维生素B&lt;,12&gt;过程中，从钴啉胺酸a，c-二酰胺到最终AdoCbI的生成。因此，发现这些基因为探索费氏丙酸杆菌维生素B&lt;,12&gt;的生物合成途经将具有一定的理论意义。 维生素B&lt;,12&gt;是一种哺乳动物所必需的维生素，具有广泛的生理学作用，但是哺乳动物自身却不能合成，仅有某些特定的微生物才能合成维生素B&lt;,12&gt;如杆菌，沙门氏菌，丙酸菌和假单胞菌。目前，工业上主要利用脱氮假单胞菌和费氏丙酸杆菌进行维生素B&lt;,12&gt;的生产。由于费氏丙酸杆菌不产生任何毒素，被美国FDA认定为GRAS(Generlly reagard as safe)，其发酵过程能耗低，染菌概率小。因此，费氏丙酸杆菌在维生素B12的发酵生产上占据了越来越重要的地位。为了详尽代谢过程，阐明合成途径，迄今为止，人们已经获得了大部分费氏丙酸杆菌维生素 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 B&lt;,12&gt;生物合成相关的基因，但是，应用费氏丙酸杆菌发酵生产维生素B&lt;,12&gt;的生物合成途径仍不明确。 本研究以费氏丙酸杆菌为出发菌株，克隆、解析了与维生素B&lt;,12&gt;生物合成相关的部分基因。首先，应用遗传互补法，将费氏丙酸杆菌IFO12424株的染色体基因文库，电击转化到Salmonella typhimurium Cob?领域的缺失突变株TT10858中，进行P.freudenreichi Cob?领域维生素B&lt;,12&gt;生物合成基因的筛选，结果得到了4206bp的DNA片段，命名为P4。解析结果表明，该片段包含了一个部分的和三个完整的读写框，依次为编码L-苏氨酸-O-3-磷酸盐脱羧酶的cobD，编码腺苷钻啉酰胺(AdoCbi)激酶和AdoCbi-P鸟苷酸转移酶的cobU，负责催化AdoCbi-GDP与α-ribazole连接，完成腺苷钴胺素(AdoCbI)最终合成的cobS，及编码转录调节蛋白的cobR。 然后，根据所得cobD的碱基序列，设计相应引物，应用LA PCR&lt;&#39;TM&gt; in vitro Cloning 。经序列分析，发现此片Kit，获得了cobD上游3290bp的序列信息，命名为P3 段包含了编码钴啉酸a，c-二酰胺合成酶的cbiA、负责传递腺苷将钴啉胺酸a，c-二酰胺转化生成腺苷钴啉胺酸a，c-二酰胺的cobA，催化腺苷钴啉胺酸a，c-二酰胺酰胺化生成腺苷钴啉胺酸的cbiP以及cobD的上游区域。 最后，将两者合并后得到全长为7308bp的DNA片段，命名为P7。经ORF检索和同源性分析， ，依次为cbiP，cobA，发现此片段包含了一个部分ORF和5个完整的ORF cbiA(cbiA-cobD)，cobU，cobS和cobR，它们编码的蛋白负责催化费氏丙酸杆菌发酵生产维生素B&lt;,12&gt;过程中，从钴啉胺酸a，c-二酰胺到最终AdoCbI的生成。因此，发现这些基因为探索费氏丙酸杆菌维生素B&lt;,12&gt;的生物合成途经将具有一定的理论意义。 维生素B&lt;,12&gt;是一种哺乳动物所必需的维生素，具有广泛的生理学作用，但是哺乳动物自身却不能合成，仅有某些特定的微生物才能合成维生素B&lt;,12&gt;如杆菌，沙门氏菌，丙酸菌和假单胞菌。目前，工业上主要利用脱氮假单胞菌和费氏丙酸杆菌进行维生素B&lt;,12&gt;的生产。由于费氏丙酸杆菌不产生任何毒素，被美国FDA认定为GRAS(Generlly reagard as safe)，其发酵过程能耗低，染菌概率小。因此，费氏丙酸杆菌在维生素B12的发酵生产上占据了越来越重要的地位。为了详尽代谢过程，阐明合成途径，迄今为止，人们已经获得了大部分费氏丙酸杆菌维生素 B&lt;,12&gt;生物合成相关的基因，但是，应用费氏丙酸杆菌发酵生产维生素B&lt;,12&gt;的生物合成途径仍不明确。 本研究以费氏丙酸杆菌为出发菌株，克隆、解析了与维生素B&lt;,12&gt;生物合成相关的部分基因。首先，应用遗传互补法，将费氏丙酸杆菌IFO12424株的染色体基因文库，电击转化到Salmonella typhimurium Cob?领域的缺失突变株TT10858中，进行P.freudenreichi Cob?领域维生素B&lt;,12&gt;生物合成基因的筛选，结果得到了4206bp的DNA片段，命名为P4。解析结果表明，该片段包含了一个部分的和三个完整的读写框，依次为编码L-苏氨酸-O-3-磷酸盐脱羧酶的cobD，编码腺苷钻啉酰胺(AdoCbi)激酶和AdoCbi-P鸟苷酸转移酶的cobU，负责催化AdoCbi-GDP与α-ribazole连接，完成腺苷钴胺素(AdoCbI)最终合成的cobS，及编码转录调节蛋白的cobR。 然后，根据所得cobD的碱基序列，设计相应引物，应用LA PCR&lt;&#39;TM&gt; in vitro Cloning Kit，获得了cobD上游3290bp的序列信息，命名为P3。经序列分析，发现此片段包含了编码钴啉酸a，c-二酰胺合成酶的cbiA、负责传递腺苷将钴啉胺酸a， 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 c-二酰胺转化生成腺苷钴啉胺酸a，c-二酰胺的cobA，催化腺苷钴啉胺酸a，c-二酰胺酰胺化生成腺苷钴啉胺酸的cbiP以及cobD的上游区域。 最后，将两者合并后得到全长为7308bp的DNA片段，命名为P7。经ORF检索和同源性分析，发现此片段包含了一个部分ORF和5个完整的ORF，依次为cbiP，cobA，cbiA(cbiA-cobD)，cobU，cobS和cobR，它们编码的蛋白负责催化费氏丙酸杆菌发酵生产维生素B&lt;,12&gt;过程中，从钴啉胺酸a，c-二酰胺到最终AdoCbI的生成。因此，发现这些基因为探索费氏丙酸杆菌维生素B&lt;,12&gt;的生物合成途经将具有一定的理论意义。 维生素B&lt;,12&gt;是一种哺乳动物所必需的维生素，具有广泛的生理学作用，但是哺乳动物自身却不能合成，仅有某些特定的微生物才能合成维生素B&lt;,12&gt;如杆菌，沙门氏菌，丙酸菌和假单胞菌。目前，工业上主要利用脱氮假单胞菌和费氏丙酸杆菌进行维生素B&lt;,12&gt;的生产。由于费氏丙酸杆菌不产生任何毒素，被美国FDA认定为GRAS(Generlly reagard as safe)，其发酵过程能耗低，染菌概率小。因此，费氏丙酸杆菌在维生素B12的发酵生产上占据了越来越重要的地位。为了详尽代谢过程，阐明合成途径，迄今为止，人们已经获得了大部分费氏丙酸杆菌维生素 B&lt;,12&gt;生物合成相关的基因，但是，应用费氏丙酸杆菌发酵生产维生素B&lt;,12&gt;的生物合成途径仍不明确。 本研究以费氏丙酸杆菌为出发菌株，克隆、解析了与维生素B&lt;,12&gt;生物合成相关的部分基因。首先，应用遗传互补法，将费氏丙酸杆菌IFO12424株的染色体基因文库，电击转化到Salmonella typhimurium Cob?领域的缺失突变株TT10858中，进行P.freudenreichi Cob?领域维生素B&lt;,12&gt;生物合成基因的筛选，结果得到了4206bp的DNA片段，命名为P4。解析结果表明，该片段包含了一个部分的和三个完整的读写框，依次为编码L-苏氨酸-O-3-磷酸盐脱羧酶的cobD，编码腺苷钻啉酰胺(AdoCbi)激酶和AdoCbi-P鸟苷酸转移酶的cobU，负责催化AdoCbi-GDP与α-ribazole连接，完成腺苷钴胺素(AdoCbI)最终合成的cobS，及编码转录调节蛋白的cobR。 然后，根据所得cobD的碱基序列，设计相应引物，应用LA PCR&lt;&#39;TM&gt; 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