喷塑外固定材料葡聚糖型聚氨酯的生物学评价

喷塑外固定材料葡聚糖型聚氨酯的生物学评价 学位论文原创性声明 本人郑重声明:所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下进行的研究工作及所取得的研究成果。据我所知，除文中特别加以标注和致谫,的地方外，论文中不含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得福建中医药大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并表示谢意。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名:哜蜘„ 签字同期:,。,。年易月夕日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解福建中医学院有关保留和使用学位论文的规定，即:研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属福建中医药大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅。本人授权福建中医药大学可以公布学位论文的全部或部分，并编入有关数据库进行检索，可以允许采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后遵守此规定)本学位论文属于(必须在以下相应方框内打“?”，否则一律按“非保密论文”处理): ,、保密论文:口本学位论文属于保密，在——年解密后适用本授权书。 ,、非保密论文:囝本学位论文不属于保密范围，适用本授权书。是否同意授权以下单位(必须在以下相应方框内打“?”，否则一律按“同意授权”处理): ,、囱同意授权 口不同意授权 清华大学“中国学术期刊(光盘版)电子杂志社”将本人学位论文进行电子和网络出版，并编入,,,，系列数据库(《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》和《中国知识资源总库》)。 , ,、囱同意授权 口不同意授权 中国科学技术信息研究所将小入学,童论文收录剑《,,,围学位论文全文数据库》，并进行信息服务，同时本人保留在其他媒体发表论文的权利。本人签名: 签字同期:,,,?年歹 月岁 日导师签名: 签字同期:,,，,年 彳月多日讨论 , , ? ? ? ? ? ? ,结论, , ? ? ? ? ? ? ,参考文献 ? ? ? ? ? ( ,致谢, , ? ? ? ? ? ? , ,、?,厶。一)亡,附 图一 , ? ? ? ? ? ? , ,,课综述 ? ? ? ? ? ( ,, 喷塑外固定材料葡聚糖型聚氨酯的生物学评价 中文摘要目的:探讨可能成为骨科外固定材料石膏绷带、小夹板等的替代物葡聚糖型聚氨酯的生物安全性，按照国家——医疗器械生物学评价标准的一系列实验要求对其进行早期生物学评价，为临床应用提供可靠的理论依据。:按照,,,,,,,,,医疗器械生物学评价第二、五、十、十一部分的标准要求，结合葡聚糖型聚氨酯预期的特定用途，选取合适样本进行合理实验:急性经皮毒性实验、皮肤刺激实验、致敏实验及体外细胞毒性实验。急性经皮毒性实验:采用浸提液急性经皮毒性实验方法，观察豚鼠敷贴后, ,内的生活习性、体重的变化，并且给予行肝脏病理组织学检查，判断材料的毒性;皮肤刺激实验:采用直接接触法，观察白发家兔接触后,,的皮肤变化，计算原发性刺激指数(,，，)，评定刺激的反应类型;致敏实验:采用最大剂量致敏法，观察激发后浸提液对豚鼠的致敏性，计算出致敏率，评定致敏等级;体外细胞毒性实验:采用,,,法，观察其对,,,,,小鼠成纤维细胞生长、增殖的影响，测定加样后的,、,、,,的,,值，计算,,,，评定细胞毒性等级。结果:(,)急性经皮毒性实验:动物的活动表现均无明显差异，皮肤无红斑、水肿，毛发通顺，亮泽，不干枯，眼睛及粘膜无变化，反应灵敏，尿液清晰，大便呈粒状无异常，肝脏的,,染色未见有明显差异，实验组与空白组之间的体重无差异(,,,(,,)，表明了该材料的浸提液未对白化豚鼠产生毒性反应;(,)皮肤刺激实验:在除去 接触物后, ,皮肤破损组有两只家兔勉强可见有红斑，,，，等于,(,,，,, ,后仍未褪去，在,, ,后见一只家兔的皮肤已恢复正常，,，，等于,(,,，在,,,观察另外一只家兔皮肤亦恢复，无红斑水肿，,，，等于,，,，，均在,—,(,,，表明了改材料对破损皮肤具有轻微的刺激作用;(,)致敏实验:实验组动物在激发后各时点均未观察到红斑、水肿现象，评分为,，致敏率不为,，与空白组无差异，与阳性组存在显著性的差异，表明该材料无致敏性; (,)体外细胞毒性实验:,,,、,,,,浸提液的实验组与空白组相比较细胞测得,,值无明显的差异，相对增值率相比较未见有差异，与阳性组向比较存在显著差异，细胞毒性?,级、正常，表明对,,,,,细胞无毒性作用。结论:葡聚糖型聚氨酯无毒、无刺激、无致敏和未对细胞增殖产生影响，具有良好的生物安全性，可作为无毒性材料用于临床。关键词:葡聚糖型聚氨酯，生物学评价，急性经皮毒性实验，致敏实验，皮肤刺激实验，体外细胞毒性实验 ,,,,,,,;,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,—,,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,—, ,,;,,,,,;,,,,:,, ,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,(,,;,,,,, ,,,, ,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,、,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,; 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,、,二硝基氯苯、完全氟式佐剂、硫化钠、乙醚、十二烷基硫酸钠石蜡油:汕头市西陇化学工厂有限公司; 伊红染色液、苏木素染色液:福州迈新生物有限公司; ,,,,高糖，胎牛血清(,,,)、胰蛋白酶:,,,,,公司; 氨苄青霉素、硫酸链霉素、无菌,,,,?,溶液:北京化工厂产品:,、一般实验器材 若干, ,,注射器:江西洪大医疗器械集团有限公司; 无刺激性胶布:北京康美特医用材料有限公司; 若干无菌纱布:河南省蓝天医疗器械有限公司;,、实验器材 电子天平:，,, ,,,,， 北京赛多利斯仪器系统有限公司; 电热恒温鼓风干燥箱:,,,一,,,,,，上海一恒科技有限公司; 切片机:,,,,,,，,,,;,公司; 包埋机:,,,,,,,,，常州市郝思琳医用仪器有限公司; 组织脱水机:,,一,,,—,(,，武汉中天鸿博医疗设备有限公司; 烤片机:,,—,, ,,,,，武汉中天鸿博医疗设备有限公司; 电热恒温水浴箱:,,一,,,型上海惊鸿实验设备有限公司; 喷塑外固定材料葡聚糖型聚氨酯的生物学评价 倒置相差显微镜:，,,,，,,,,,,公司; 微量可调加样器:,,,,,, ,,,; 酶标仪:,,,, ,,,，,,,,,,,; 超净工作台:,，,,,,,公司; ,,。培养箱:,,,,,,公司; 酶标仪:,,,,,,，,，,—,,,; 离心器:,,,一,,,，上海安亭科学仪器厂飞鸽牌; 立式压力蒸汽灭菌器:,,,—,,一,,,，上海博讯实业有限公司医疗设备厂; 电热恒温鼓风干燥箱:,,,一,,,,,，上海一恒科技有限公司; 海尔冰箱:,,,一,,,,,,，,,，,,; 医用超声清洗器: ,,一,,,,，昆山市超声仪器有限公司; 微量振荡器:,,—,， 常州国华电器公司; 液氮罐:福州联创特种气体有限公司; ,,;,,细胞培养瓶、,,孔细胞培养板、聚丙烯细胞冻存管、移液器，细胞计数板，一次性滤器:,,,,,,公司。二、实验方法与观察指标,、急性经皮毒性实验按国标,,,,,,,,,(,,一,,,,进行,(,动物造模 ,,,,只豚鼠按体重性别随机分为,组，即完整皮肤空白组，破损皮肤空白组，完整皮肤实验组，破损皮肤实验组，每组,,只，雌雄各半。于给药前,, ,硫化钠，在豚鼠背部脱毛，面积约,, ;,,，同等条件下饲养，待脱毛后,, ,观察脱毛区皮肤未见有异常。用, ,,注射器针头在无菌条件下对破损组豚鼠背部划,号，以微出血为限，造成皮肤破损，称取并每只豚鼠的重量。,(,实验步骤 ?将葡聚糖型聚氨酯研成粉末，敷于实验区， ,层无菌纱布覆盖，无刺激胶布固定; ?封闭接触,, ,，揭除胶布纱布，,,?温水轻轻擦拭干净; ?分别在第,、,、,、, ,观察豚鼠体重、体重、毛发、眼睛和粘膜、呼吸、循环、中枢神经系统、四肢活动的变化及破损处的皮肤伤口愈合; ?观察,天后乙醚处死，大体解剖，取出,(, ;, ,的肝组织，行病理组织学检查。,(,病理组织标本制作 ?固定:标本在中性缓冲福尔马林(,,,,(,)固定液中固定,, ,: ?脱水与透明:按,,,乙醇,次、,,,乙醇,次、,,,乙醇,次、,,,乙醇,次、,,,,乙醇,次的顺序脱水，各浓度下,, ,,,，二甲苯透明,, ,,,; ?浸蜡:,,,的石蜡二甲苯液中浸蜡 ,, ,,,，,,,,的石蜡液中浸蜡,, ,,,: ?包埋:取出脱水后的组织，将标本组织放到包埋台上进行包埋，后置于冷凝台上冷 福建中医药大学硕士学位论文却，待组织蜡块冷却后即可; ?切片:修整蜡块，在切片机上进行组织切片，厚度为,,,，进行连续切片; ?贴片:选取理想的组织切片，提取展好的组织切片置于载玻片,,,位置，然后于烤箱内烤干，控制在,,?，,, ,,,: ?染色:二甲苯透明, ,,,、, ,,,,、, ,,,，无水乙醇, ,,,、, ,,,、, ,,,，,,,、,,,、,,,、,,,、,,,乙醇各, ,,,，蒸馏水, ,,,，苏木精,,,,, ,,,，蒸馏水,, , ,(,一,,盐酸酒精分色液, ,，蒸馏水, ,，,,,,蒸馏水加,滴氨水, ,，蒸馏水, ,，,,,、,,,乙醇, ,,,，,,,,(醇浸提载破片, ,,,，,,,,(醇浸提载破片, ,,,，,,,,，醇浸提载玻片, ,,,，伊红, ,,,，,,,,(醇淹浸提载玻片, ,，无水乙醇浸提载玻片, ,,,，无水乙醇浸提载玻片, ,,,，无水乙醇浸提载玻片, ,,,，纯二甲苯浸提载玻片, ,,,、, , 封片:擦除残余二甲苯，滴一滴树胶于取材的切片上，盖玻片封片; ?,,: ? 观察:将做好的组织切片置于光镜下进行观察其组织结构，并采用图像采集系统进行采集图片。,(,观察指标 观察皮肤有无红斑、水肿，皮肤伤口愈合情况，毛发变化、眼睛及粘膜变化，体重增长、二便及肝脏病理变化。,、皮肤刺激实验按国标,,,,,,,,,,,,:,,,,进行,(,动物模型 白发家兔,只，动物房饲养, ,后，于给药前,, ,将动物背部两侧对称脱毛,, ;,×,, ;,，待脱毛后,, ,观察脱毛区皮肤未见有异常，将脱毛部位分为四个区域，以每只家兔背部左侧为实验区，右侧为对照区，每侧分前后两区，分别为破损皮肤区和破损皮肤区(如图,)。 尾部 图,皮肤应用部位,(,实验步骤 ?无菌条件下，, ,,注射器针头在破损区域划,号，以微出血为限，造成皮肤破损，破损面积, ,,, , ;,: 喷塑外固定材料葡聚糖型聚氨酯的生物学评价 ?将浸透浸提液的,层, ;,, , ;,纱布，如图,所示敷贴于动物背部两侧实验组区域，将浸透浸提介质(生理盐水)的纱布块大小与对侧相同，敷贴在对照接触部位，用半封闭性包扎带固定敷料; ?敷贴,, ,擦去受试物，温水洗净，观察皮肤变化。,(,实验观察指标,(,(,动物观察指标 去除受试物后,、,,、,,、,, ,，观察并记录各接触部位情况，按规定评分系统(见表,)，描述每一规定时间内实验区域皮肤红斑和水肿反应情况并评分。 表,皮肤反应评分标准,(,(,结果 原发性刺激指数(,，，),每只动物原发性刺激记分相加,动物总数。根据规定的标准评价反应类型(见表,)。 表,免原发性刺激反应类型 反应类型(刺激性) 原发性刺激指数(,，，) 极轻微(无) ,(,,,(,, 轻度 .