去除白细胞的悬浮红细胞临床应用研究

去除白细胞的悬浮红细胞临床应用研究 去除白细胞的悬浮红细胞临床应用研究 河北医药2007年3月第29卷—HebeiMedicalJour—nal,Mar2007,Vol29,No.3 去除白细胞的悬浮红细胞临床应用研究 张艳华马炳杰梁玉琴计静文苏英姿扬少玲贺静 【摘要】目的研究使用滤器制备去白细胞全血和去白细胞悬浮红细胞的技术,检测过滤前后血 液质量变化,临床观察降低非溶血液性输血反应的发生率.方法用白细胞过滤器和无菌接1:7的方法 制备出50袋(规格为200m1)去白全血和去白悬浮红细胞制剂,并对此进行质量检测,临床调查输血人次 36328.临床选择23例(占总输血人次的0.0633%).既往有多次输血史,并且发生过2次以上输血反应 的患者,输注去白细胞血液制剂时,所发生的输血反应情况.结果我站制备的去白细胞血液制剂,白 细胞去除率平均为(99.844-0.05)%,过滤后白细胞残余量为(2.234?0,314)×lo6个1200ml.23例患者 输注不去白血液制剂时出现输血反应率为5.43%;输注去白细胞血液制剂时,输血反应率为0.047%. 结论白细胞滤器制备去白细胞血液制剂能有效地预防和降低白细胞抗体所致的同种免疫性非溶性输 血反应,有临床应用价值. 【关键词】白细胞滤器;去白细胞血液;输血反应 白细胞作为血液细胞中的重要成分,在机体防御外来病原 体与抗原侵入等免疫过程中起着重要作用.临床上应用白细 胞制剂,治疗白细胞数量极度低下的严重感染,抗生素治疗无 效的特殊情况下具有一定的意义.现代医学表明,血液中非治 疗性成分如白细胞等是一种"污染物",其同种异体输注会产生 白细胞抗体,从而引起一系列副作用,如非溶血性发热反应,淋 巴细胞抗原(HLa)同种异体免疫反应,血小板输注无效,移植物 抗宿主病.同时白细胞还是一些嗜白细胞病毒,如巨细胞病毒 的载体,输注含有白细胞的血液制剂,将具有传染这些病毒的 危险.因此,血液及其成分去除白细胞对输血安全和临床具有 重要作用].为此课题组研究制备了去白细胞血液制剂,并反 复进行了质量检测,观察研究了临床应用情况,取得了非 常满意的疗效. 1白细胞去除方法 白细胞作为一种"污染物"可采用多种方法去除,主要有离 心去白膜法,洗涤法,冰冻去甘油法,过滤法,照射法,其中过滤 法最为理想.过滤法是指采用白细胞专用滤器,滤除血液制剂 中的白细胞.世界上第1代血液过滤器诞生于20世纪6o年 代,主要用于滤除血液中的微聚物,以防止成人呼吸窘迫综合 征.70年代开发出了第2代血液过滤器,白细胞去除率可达 90%.可有效地预防非血液性发热反应.进入80年代后开发 出了第3代高效去除白细胞滤器,以膜状(聚酯无纺布作滤芯) 滤材制作的扁平结构.白细胞去除率可达99.9%以上,它的作 用机制主要是阻滞,架桥,拦截,吸附等.本文具体介绍用第3 代白细胞滤器和无菌接的方法,去除储存前全血,悬浮红细胞 中白细胞技术. 1.1材料(1)血液来源:用CPDA血袋采集的全血(规格为 作者单位:066001河北省秦皇岛市中心血站 245 ? 输血研究? 200,400ml/袋)或悬浮红细胞制剂(规格为1个单位,袋),采集 后置2qC,6qC条件下保存424h.(2)耗材:一次性白细胞滤 器,由成都双流双陆医疗器械有限公司提供.(3)设备:低温大 容量离心机:由美国贝克曼(Backman)公司提供;无菌接口机:由 德国进口驳接机公司提供;热合机:由苏州医疗器械有限公司, 韩国进口热合机提供. 1.2制备方法(1)全血过滤:用CPDA血袋采集的200ml或 4OOml全血(采集后1—5d),通过无菌导管连接器将采集的血 液与白细胞过滤器相连,连接成功后,将血袋悬挂于支架上,依 重力作用自然过滤,待完全过滤后(过滤时间大约6,10min)排 除空气,对接配血管及打印标签,核对无误后,热合下过滤后的 血袋,此即为制备的去白细胞全血.(2)悬浮红细胞制剂的过 滤:用ACD—B联袋采集血液,规格为200或400ml全血(采集后 1,5d,经过离心(离心转数为3500r/rain,离心时间为10min, 离心温度为4qC),去除上层血浆即得红细胞制剂.通过无菌导 管连接器将装有红细胞制剂的血袋与白细胞过滤器相连,连接 成功后,将血袋悬挂于支架上,依重力作用自然过滤,待完全过 滤后(过滤时间大约5,8min)排除空气,对接配血管及打印标 签,核对无误后,热合下过滤后的血袋,此即为制备的去白细胞 悬浮红细胞. 2去白细胞血液的质量检测 2.1设备及试剂PoeH.100iSysines系列全自动细胞计数仪,试 剂为仪器配套试剂,NAGE(YlqE计数板,Olympus显微镜,AC一980 型电解质分析仪(奥迪康),Nageotte白细胞计数板,723一PC型可 见分光光度计(上海).试剂由中国医学科学院血液学研究所, 北京化学试剂厂提供. 2.2检测方法参照(GB18469—2001全血成分血质量》和 《中国医药行业标准》检测项目.用重量法称过滤前后血 液的重量,并求得容量,按照《全国临床检验操作规程》所规定 的方法检测血样的白细胞计数,血液保存末期的血浆(游离)血 246医生筮鲞第3期HebeiMedicalJournal,Mar2OO7.vo129,No.3 红蛋白浓度.用血球计数仪检测血液血红蛋白总量和红细胞 比积.采用电解质分析仪,检测保存末期去白全血的K,Na 离子浓度及pH值.血液保存末期无菌试验,使用硫乙醇酸盐 和改良马丁培养基(中国药品生物制品检定所提供),采用直接 接种法. 白细胞去除率计算:白细胞去除率(%)= ,c嚣赣遵oo%,,过滤前白细胞讦数×过滤前血液积 红细胞回收率计算:红细胞回收率(%)= c籍器薅oo%,过滤前红细胞比积×过滤前血液体积, 血液溶血率计算:溶血率(%)= (100一细胞比积)×血浆(游离)血红蛋白浓度 血红蛋白总量 2.3检测结果(1)去白细胞血液过滤前后白细胞含量及去除 率检测结果,血液过滤后白细胞残余量平均为(3.207?0.005) ×106个/200ml,白细胞去除率平均为(99.08?0.005)%.(2) 过滤前后血液红细胞回收率检测结果,红细胞回收率为(90.37 ?1.31)%,均大于85%.(3)过滤前后红细胞渗透脆性检测结 果,红细胞渗透脆性过滤前后无变化.(4)去白细胞血液保存 末期无菌试验结果,无细菌生长.(5)去白细胞血液保存末期 血浆(游离)血红蛋白浓度及溶血率,血液血浆(游离)血红蛋白 浓度为(0.354?0.10).g/L;小于530mg/L,溶血率为(0.12?0. 05)%,小于0.8%.(6)去白细胞全血保存末期K离子浓度为 (19.0?3.5mmo1)/L;Na离子浓度为(134?13.4mmo1)/L;pH值 7.11?0.17,均符合国家标准.(7)去白细胞血液保存末期的 HBsAg,HIV.Ab,HCV.Ab,梅毒抗体检测均为阴性,ALT正常 3临床应用观察 3.1病例来源选择自2004年1月至2OO6年11月期间,在我 市各大医院住院治疗的患者,临床调查输血人次36328,既往有 多次输血史(2—4次),并发生过两次或两次以上发热反应者共 23例,占0.0633%,其中男9例,女14例,年龄962岁,这些病 例中,急性白血病2例,慢性粒细胞白血病4例,再生障碍性贫 血2例,尿毒症3例,全身烧伤1例,肝硬化3例,失血性休克2 例,产后大出血2例,上消化道出血4例. 3.2观察方法上述患者再次输注血液时,使用白细胞滤器过 滤的去白全血或去白悬浮红细胞,输注前用地塞米松等抗过敏 药物.输血的输注速度根据临床实际需要,由专人负责观察记 录病人,输血前后的临床反应.输前30min,输中30,60,90,120 min,输后30,60min分别测患者体温,脉搏,心率,血压.观察是 否有其他不良反应发生. 3.3评价方法和标准输血反应诊断,参照上海医学院华山医 院林果为等《非溶血性输血反应调查的药物预防效果的评价》, 输血中或输血后即刻出现下列症状之一的,即判定有输血反 应,体温升高1?,并高于38~C(排除其他疾病所引起的体温升 高),明显畏寒,肉眼可见的皮疹,血压下降,胸闷,呼吸困难,未 出现上述症状者为无输血反应. 3.4观察结果输注未去白细胞血液制剂与输注过滤制备的 去白血液制剂引起发热反应率比较:23例患者既往共输注血液 制剂92例次(包括全血,悬浮红细胞,洗涤红,血小板等).共发 生发热反应5例次,反应率为5.43.%.现输注去白血液制剂, (去白全血,去白悬浮红细胞)23例共输注210例次,发热反应 (以输血前后体温上升?1?为标准)共1例次,此例上消化道出 血患者输血后体温升高2~C以上,并出现胸闷气短等症状,发生 输血反应率为0.047%.与输注未去除白细胞血液制剂的发热 反应率比较明显下降(P<0.05). 4讨论 当前在血液疾病的支持疗法中,输血应用最为广泛,尤其是 对难治性贫血性疾病(如再生障碍性贫血,慢性粒细胞性贫血等) 及肿瘤,器官移植,大出血等疾患.因此安全输血已成为当今国 内外临床治疗中最关注的问题之一.据统计均有2%10%的 输血患者可能发生轻重不等的输血反应,而发热反应又是其中最 常见者,约占输血总反应率的24%一44%.其发生的原因主要有 两个方面,一是采血,分离,输血器具和保存液污染了热源或细 菌,由于现代化工业集中产生输血器具及制剂此情况已得到了较 好的控制;二是由于因多次接受输血或妊娠产生了白细胞抗体或 血小板抗体,以后再次输注含有白细胞的血液制剂,产生抗原抗 体反应而引起发热.其机制一般认为是白细胞抗体破坏了供者 不合的白细胞,释放出热源质而造成发热.我们通过临床应用观 察,23例患者以前发生过发热性输血反应为5.43%,输注成都双 流双陆医疗器械有限公司开发研制的白细胞滤器过滤制备的去 白细胞血液制剂,发生输血反应为0.047%,而且1例患者输注去 白全血或去白悬浮红细胞制剂发生了输血反应,而后来改用洗涤 红细胞制剂时,不再发生输血反应,说明发生反应的原因是对血 浆蛋白过敏有关系.所以我站制备的去白细胞血液制剂可有效 地预防和降低非溶血性输血反应的发生.目前认为,白细胞残留 量?2.5×106个/200ml时,就能有效地预防非溶血性输血发热 反应(N}唧)的发生;预防或延缓对HLA的同种免疫和血小板 输注无效;预防输血相关移植物抗宿主病(G?);预防贮存红细 胞的细菌生长.同时因去除血液中的微聚物,可预防成人呼吸窘 迫综合征的发生. 综上所述,应用白细胞滤器过滤血液的技术,克服了以往 各种去除白细胞方法的不足,结合无菌接口的方法,杜绝了血 液污染,保证了血液的常规保存时间.使用了采血后24h以内 过滤,避免了随着血液存放时间的延长白细胞崩解而释放 出细胞因子如白介素,肿瘤坏死因子等对过滤效果的影响,提 高了白细胞去除率及红细胞回收率.此方法操作简便并对受 血者既安全又无毒副作用,尤其适用于需经常反复输血患者, 妊娠妇女,预行器官移植患者,既往有过输血反患者,在临床具 有较高的实用价值J. 参考文献 1赵树铭,林武存,刘景汉.白细胞去除及临床应用进展.中国实验血液 学杂志,2OO2,10:478-482. 2刘景汉.欧阳锡林.去白细胞输血基础和临床应用研究进展.中国输 血杂志,2001,14:252.255. (收稿日期:2OO7—01—12)