香砂养胃丸中厚朴酚与和厚朴酚的提取及测定

香砂养胃丸中厚朴酚与和厚朴酚的提取及测定 【摘要】目的:快速提取及测定香砂养胃丸中厚朴酚及和厚朴酚｡:用ASE300型快速溶剂萃取系统进行快速萃取香砂养胃丸中厚朴酚及和厚朴酚, 利用反相高效液相色谱法测定厚朴酚及和厚朴酚的含量,Diamonsil(TM)C18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相:甲醇-水-冰醋酸(79?21?0.25),流速:1.0mL/min,检测波长:294nm,柱温:23?,结果:HPLC法测得在范围内呈良好线性关系,和厚朴酚的平均回收率为100.89%,RSD为1.41%; 厚朴酚的平均回收率为99.83%,RSD为1.61%｡结论:本方法简便､准确､专属性强,能有效地控制香砂养胃丸的质量｡ 【关键词】:厚朴酚 和厚朴酚 香砂养胃丸 RP-HPLC 【中图分类号】R975+.1;R284.1 【文献标识码】A 【文章编号】1007-8517(2008)07-0013-03 香砂养胃丸是由木香,砂仁,厚朴(姜制),白术, 陈皮, 茯苓, 半夏(制), 香附(醋制),枳实(炒),豆蔻(去壳),广藿香,甘草等中药组成[1]｡具有温中和胃｡用于不思饮食,胃脘满闷或泛酸水等｡现代药理学研究表明,厚朴具有抗菌､抗病毒､抗过敏､影响胃肠活动､肌肉松弛和中枢抑制等作用[2]｡厚朴中的厚朴酚及和厚朴酚是起主要药理作用的化合物, 最近的研究表明,其中厚朴酚[3]与和厚朴酚[4]有抑制癌细胞的潜能,厚朴酚与和厚朴酚将会有更加广泛的医药用途｡提取及测定这两种酚是控制香砂养胃丸制剂质量的主要方式｡ 本文进行了新的提取及测定香砂养胃丸中厚朴酚及和厚朴酚方法的研究,用ASE300型快速溶剂萃取系统进行快速萃取厚朴酚及和厚朴酚,利用反相高效液相色谱法测定厚朴酚及和厚朴酚的含量,结果理想,报告如下｡ 1材料与方法 1.1 材料与试剂香砂养胃丸为某制药公司上市产品｡提取用无水乙醇､甲醇为纯,HPLC甲醇为色谱纯,厚朴酚､和厚朴酚品由中国药品生物制品检定所提供｡ 1.2仪器: 美国DIONEX公司ASE300型加速溶剂萃取机;美国DIONEX公司P680LPG型高效液相色谱仪;RE-52型旋转蒸发仪｡ 1.3方法 1.3.1 香砂养胃丸中酚类物质的快速提取用ASE300型快速溶剂萃取机进行,采用优选的方法提取,取干燥的香砂养胃丸,粉碎,过60目筛,取3.0g,按4?1的比例加入硅藻土混匀后装入萃取池,编程进行萃取实验(萃取压力为1500psi､酒精度60%､提取3次､提取温度71?､提取时间为10min/次),萃取结束后,用RE-52型旋转蒸发仪浓缩,定容至25ml,取样进行HPLC测定含量｡ 1.3.2 HPLC色谱条件色谱柱:Diamonsil(TM)C18 (250mm×4.6mm, 5μm), 流动相为样量:20μl｡ 1.3.3 线性范围考察精密称取厚朴酚､和厚朴酚对照品适量,加甲醇制成每1mL含厚朴酚以及和厚朴酚均为400, 200, 100, 50, 25, 12.5,6.25μg的标准品浓度梯度,分别吸取溶甲醇-水-冰醋酸(79?21?0.25),流速为1.0ml/min,检测波长:294nm,柱温:23?,进液20ul,注入HPLC仪测定｡以对照品浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线, 进行线性回归｡ 1.3.4 精密度试验取快速萃取制备的样品溶液,重复进样6次,记录色谱峰面积,计算RSD｡ 1.3.5 重复性试验用快速萃取方法制备5份供试品溶液,依RP-HPLC法测定厚朴酚与和厚朴酚的色谱峰面积,计算RSD｡1.3.6 稳定性试验取样品,每隔2h进样1次,共进样5次,考察供试品溶液的稳定性｡1.3.7 回收率试验取已测知含量的样品6份,分别精密加入对照品适量,依RP-HPLC法测定,计算回收率,RSD｡ 2结果 2.1 HPLC结果及标准品线性关系在前述色谱条件下,厚朴酚与和厚朴酚与其他成分能够很好地分离(图1);以对照品浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,进行线性回归｡厚朴酚浓度在6.25~400ug/mL和厚朴酚浓度在6.25~400ug/mL范围内与峰面积线性关系良好｡回归方程为: 厚朴酚Y=0.435991X+3.423161, R:0.999694; 和厚朴酚Y=0.609061X+4.516839, R:0.999526｡ 3讨论 本研究用美国DIONEX公司ASE-300型快速溶剂萃取系统提取香砂养胃丸中的厚朴酚与和厚朴酚,效果理想,可以快速而准确地提取香砂养胃丸中的厚朴酚与和厚朴酚,专业检测机构可借鉴本法提取检测厚朴酚与和厚朴酚｡ 2.2精密度试验结果取快速萃取制备的样品溶液,重复进样6次,记录色谱峰面积,计算得厚朴酚与和厚朴酚的RSD分别为0.85%,1.02%｡ 2.3重复性试验用快速萃取方法制备5份供试品溶液,依RP-HPLC法测定厚朴酚与和厚朴酚的色谱峰面积,计算RSD｡计算得厚朴酚与和厚朴酚的RSD分别为1.91%,1.53%｡ 2.4稳定性试验取样品,每隔2h进样1次,共进样6次,结果供试品溶液在12h内稳定,厚朴酚与和厚朴酚的RSD分别为1.77%,1.39%｡ 2.5回收率试验取已测知含量的样品6份,分别精密加入对照品适量,依RP-HPLC法测定,结果见表1､表2, 和厚朴酚的平均回收率为100.89%,RSD为1.41%;厚朴酚的平均回收率为99.83%,RSD为1.61%;本研究的RP-HPLC测定法的回收率较好,方法是可行的｡ 本文的研究者考察了十多种测定厚朴药的RP-HPLC条件(结果另文报道),以本文报道的色谱条件最优,不仅分离效果､重复性､稳定性等指标理想,而且省时经济,测定一个样品只需约20分钟,药典2005年版介绍的HPLC法用的流动相为乙腈-水-冰醋酸(60?40?4),则需要近40分钟｡ 参考文献 [1]中国药典委员会.中华人民共和国药典.2005年版.一部.北京,化学工业出版社,2005:525~526. [2]陈笈,王伯初.厚朴的药理研究进展.重庆大学学报:自然科学版,2005,28(9):136~139. [3]Johnstone P, Sung SY, Anderson C, etal.The natural product honokiol potentiates radiation sensitizat ioninduced by SiRNAADAM 9knockdown in prostate cancercells. Radiotherapy and Oncology,2006,78(Suppl1):S76~S77. [4]DongXu, QinghuaLu, XunHu.Down-regulation of P-glyco protein expressionin MDR breastcancer cell MCF-7/ADR by honokiol.Cancer Letters, 2006, 243(2):274~280. (收稿日期:2008.4.3)