荷兰赛迪ceditest口蹄疫病毒O型抗体检测试剂盒说明书

荷兰赛迪诊断公司 ceditest / 瑞士 prionics公司 华南总代 广州测迪生物科技有限公司 技术咨询，购买联系方式 020-84386071 杨 手机号码 13610174887 qq 1851480094 荷兰赛迪 ceditest/瑞士 prionics公司口蹄疫病毒 O型抗体检测试剂盒 荷兰赛迪诊断公司 Ceditest /PrioCHEK® FMDV type O ELISA for detection of antibodies against Foot-and-Mouth Disease Virus Serotype O 口蹄疫病毒 O型抗体检测试剂盒 适合于检测牛、绵羊、山羊和猪的血清 (以试剂盒内的英文说明为准) 一、简介 对畜牧产业来讲，口蹄疫是一个相当大的经济威胁，这种高传染性疾病影响所有的偶蹄类动物，并且在世 界上广泛传播。FMD病毒可以分为 7种有差异的血清型，这种血清型可以用传统的血清学方法诊断。现在 在许多国家，用疫苗可以有效的控制这种疾病。然而，在许多国家这种疾病没有被禁止，相反疫苗却被禁 止使用。在欧盟自从 1991年就禁止使用预防口蹄疫的疫苗，并且用屠宰已感染的动物、或预防性屠宰来 控制口蹄疫的传染。为了在将来控制疫病的爆发，将会使用疫苗。 K.J S rensen在 1998年就已经进一步发展并阐述了 FMDV-type O ELISA。以这些反应物为基础， CediDiagnostics B.V.已经研制成了 ELISA试剂盒。几个 FMDV参考实验室已经充分认可了 Ceditest? type O ELISA。Ceditest? FMDV-type O试剂盒可以检测 2 x 90个样品，试剂盒的板孔是可拆卸的，也适合样 品较少的实验。 二、参考 1 S rensen K.J., Madsen K.G., Madsen E.S., Salt J.S. Nqindi J. Mackay D.K.J. Differentiation of infection from vaccination in foot-and-mouth disease by the detection of antibodies to the non-structural proteins 3D, 3AB and 3ABC in ELISA using antigens expressed in baculovirus. Arch Virol (1998) 143: 1461-1476 2 S rensen K.J., Madsen K.G., Madsen E.S., Salt J.S. Nqindi J. Mackay D.K.J. FMDV type O ELISA using antigens expressed in baculovirus. Arch Virol (1998) 三、Application of the Ceditest? FMDV-type O应用 The Ceditest FMDV-type O可以检测抗 FMDV-type O型的的抗体。ELISA可以检测已感染动物的血清的 FMDV，这种血清会导致已接种或没接种的动物的感染。 四、Ceditest FMDV-type O检测原理 荷兰赛迪诊断公司 ceditest / 瑞士 prionics公司 华南总代 广州测迪生物科技有限公司 技术咨询，购买联系方式 020-84386071 杨 手机号码 13610174887 qq 1851480094 Ceditest FMDV-type O ELISA是一种阻断 ELISA。FMDV-type O抗原和特殊单克隆抗体有反作用力，阻 碍样品里的特殊抗体反应。 酶标板包被灭活的 FMDV-type O抗原。进行检测时需要把待测处理样品加到酶标板中，孵育 1小时清洗 酶标板，再加酶联结合物。在室温下孵育 1小时。再清洗，之后再加可以直接使用的底物和终止液。在 450 nm下读取 OD值。 参考血清 1是空白。参考血清 2有高的阻断率（＝阳性对照），参考血清 3有相对底的阻断率（＝弱阳性 对照）。参考血清 4是阴性对照，用于计算样品的阻断率。 Ceditest FMDV-type O试剂盒可以检测牛、猪、绵羊、山羊的血清。 五、一般评述 如果没有前面的注意事项，此说明书的一些信息很容易变化。但是 Cedi-Diagnostics B.V自从公布起一直 都十分完整精确。Cedi-Diagnostics B.V对使用以上操作方法产生的结果负责。 六、Ceditest FMDV-type O试剂盒组成 1. 酶标板 2块 2 test strip plates in an aluminium foil bag 2. 浓缩酶标记物，1瓶 1 vial conjugate (concentrated) 3. 参考血清 1，1瓶（直接使用）1 vial reference serum 1(ready-to –use) 4. 参考血清 2，1瓶（直接使用）1 vial reference serum 2(ready-to –use) 5. 参考血清 3，1瓶（直接使用）1 vial reference serum 3(ready-to –use) 6. 参考血清 4，1瓶（直接使用）1 vial reference serum 4(ready-to –use) 7. 浓缩稀释缓冲液，1瓶 1vial dilution buffer (concentrated) 8. 冻干马血清，1瓶 1 vial horse serum (lyophilized) 9. 去离子水，1瓶 1 vial demineralized water 10. 底物，1瓶（直接使用） 1 vial chromogen/substrate solution (ready-to –use) 11. 终止液，1瓶（直接使用）1 vial stop solution (ready-to –use) 12. 浓缩洗液， 1瓶 1 vial washing fluid (concentrated) 13. 孵育用盖子 1个 1 lid to cover the strips during incubation 14. 封铝箔袋用的黑夹子 1个 1 black closure to reseal the aluminium bag 七、储存条件 如果试剂盒不马上使用，需要储存在 2°C - 8°C ，直到过期，不能再继续使用。 八、注意事项 1.注意瓶子上的标签和底物溶液 2.终止液是强酸，避免接触到皮肤和眼睛。 3.在使用前所有试剂必须恢复到室温 20-25°C。 荷兰赛迪诊断公司 ceditest / 瑞士 prionics公司 华南总代 广州测迪生物科技有限公司 技术咨询，购买联系方式 020-84386071 杨 手机号码 13610174887 qq 1851480094 九、预备措施 1. 马血清溶液：用试剂盒提供的去离子水溶解冻干马血清（参看瓶上标签）。当不用的时候储存在–20oC。 2.稀释缓冲液：用去离子水 1：4稀释浓缩的稀释缓冲液。4体积去离子水稀释 1体积稀释缓冲液。 3.ELISA缓冲液：用稀释缓冲液稀释马血清溶液，体积比为 1：19。每两条需要 3.5ml。 4.酶标记物：用 ELISA缓冲液稀释酶标记物（参看瓶上标签）。每两条需要 1.8ml。 5.洗液：洗液共需要 12升。用 200倍的去离子水稀释洗液（参看瓶上标签）。 6.洗板可以用洗板机。如果不用，要用大于 200μl的移液器。在最后一次冲洗时轻轻拍打酶标板。 十、待测样品 1.血清样品在 4°C 下可储存几天。在 -20°C下可以储存更长的时间。 2.冻干试剂处理： 2.1需要在室温下使其平衡。 2.2垂直放置试剂，轻轻摇动试剂，以免试剂挂在瓶壁上。 2.3小心打开瓶盖。 2.4按照标签上的说明加入去离子水。 2.5冻干试剂溶解后盖上瓶塞。轻轻摇动瓶子，使未溶解的冻干试剂溶解。 2.6在使用前允许溶液静置最少 15分钟。 2.7轻轻摇动瓶子摇动瓶子，避免出现气泡。 十一、检测步骤 1.孵育待测血清 1.1 吸取 90 μlELISA缓冲液到所有孔。 1.2 吸取 10 μl参考血清 1到 A1 和 B1孔。 1.3 吸取 10 μl参考血清 2到 C1 和 D1孔。 1.4 吸取 10 μl参考血清 3到 E1 和 F1孔。 1.5 吸取 10 μl参考血清 4到 G1 和 H1孔。 1.6 吸取 10 μl样品到剩余孔中。 1.7 用孵育盖盖上酶标板。 1.8 在 20–25°C的室温下孵育 1小时。 1.9 倒掉酶标板中的液体，用洗液洗板 6次。在最后一次冲洗时轻轻拍打酶标板。 2.孵育酶标结合物和底物溶液 2.1 吸取 100 μl酶标结合物溶液到所有孔。 2.2 用孵育盖盖上酶标板。 2.3 在 20–25°C 室温下孵育 1小时。 3.孵育底物 3.1 倒掉酶标板中的液体，用洗液洗板 6次。在最后一次冲洗时轻轻拍打酶标板。 3.2 吸取 100 μl底物溶液到所有孔。 3.3 在 20–25°C 室温下孵育 15分钟。 荷兰赛迪诊断公司 ceditest / 瑞士 prionics公司 华南总代 广州测迪生物科技有限公司 技术咨询，购买联系方式 020-84386071 杨 手机号码 13610174887 qq 1851480094 3.4 吸取 100 μl终止液到所有孔。 3.5 读数前混匀微孔中液体。 注意 从加底物溶液开始的第一个孔计时 15分钟后立即按照加底物同样的顺序和速度加终止液，混匀孔中 液体。 4．读板和计算结果 4.1 在加入终止液 15分钟内在 450 nm下读取 OD值。 4.2 计算 A1和 B1的 OD450平均值。（=空白值）。 4.3 计算样品校正值，用样品 OD值减去空白值为样品校正值。 4.4 计算 G1和 H1的 OD450平均值。（= OD450最大值）。 4.5 根据下面的公式计算出检测血清阻断率 (PI)。 注意 所有样品的 OD450 值和阴性对照的平均值比较计算出(PI)值 PI = 100 –(OD450 样品- OD450空白 ) / (OD450最大值- OD450空白)x 100 5. 确认 5.1 A1和 B1的 OD450平均值（=空白值）小于 0.250。 5.2 最大 OD450 maximum的校正值不小于 1.000。 5.3 参考血清 2阻断率的平均值必须大于 70% 。 5.4 参考血清 3阻断率的平均值必须小于 50%。 5.5 不满足这些标准的结果应该排除。 6. Percentage Inhibition PI = <50% 阴性 不含 FMDV type O型抗体 PI = >50% 阳性 含 FMDV type O型抗体 十二、Ceditest FMDV-NS的计算格 Test results of the Ceditest FMDV- NS . Kit lot nr: ______ Plate 1 Plate 2 Plate 3 Plate 4 Plate 5 Test date 0 0 0 0 0 Mean OD450 of negative control (=OD max) 0 0 0 0 0 Percentage Inhibition (PI) of weak positive control 0 0 0 0 0 Percentage Inhibition (PI) of positive control 0 0 0 0 0