荷兰赛迪诊断公司 ceditest / 瑞士 prionics公司 华南总代 广州测迪生物科技有限公司
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荷兰赛迪 ceditest/瑞士 prionics公司口蹄疫病毒 O型抗体检测试剂盒
荷兰赛迪诊断公司
Ceditest /PrioCHEK® FMDV type O
ELISA for detection of antibodies against Foot-and-Mouth Disease Virus Serotype O
口蹄疫病毒 O型抗体检测试剂盒
适合于检测牛、绵羊、山羊和猪的血清
(以试剂盒内的英文说明
为准)
一、简介
对畜牧产业来讲,口蹄疫是一个相当大的经济威胁,这种高传染性疾病影响所有的偶蹄类动物,并且在世
界上广泛传播。FMD病毒可以分为 7种有差异的血清型,这种血清型可以用传统的血清学方法诊断。现在
在许多国家,用疫苗可以有效的控制这种疾病。然而,在许多国家这种疾病没有被禁止,相反疫苗却被禁
止使用。在欧盟自从 1991年就禁止使用预防口蹄疫的疫苗,并且用屠宰已感染的动物、或预防性屠宰来
控制口蹄疫的传染。为了在将来控制疫病的爆发,将会使用疫苗。
K.J S rensen在 1998年就已经进一步发展并阐述了 FMDV-type O ELISA。以这些反应物为基础,
CediDiagnostics B.V.已经研制成了 ELISA试剂盒。几个 FMDV参考实验室已经充分认可了 Ceditest? type
O ELISA。Ceditest? FMDV-type O试剂盒可以检测 2 x 90个样品,试剂盒的板孔是可拆卸的,也适合样
品较少的实验。
二、参考
1 S rensen K.J., Madsen K.G., Madsen E.S., Salt J.S. Nqindi J. Mackay D.K.J.
Differentiation of infection from vaccination in foot-and-mouth disease by the detection of antibodies to
the non-structural proteins 3D, 3AB and 3ABC in ELISA using antigens expressed in baculovirus. Arch
Virol (1998) 143: 1461-1476
2 S rensen K.J., Madsen K.G., Madsen E.S., Salt J.S. Nqindi J. Mackay D.K.J.
FMDV type O ELISA using antigens expressed in baculovirus. Arch Virol (1998)
三、Application of the Ceditest? FMDV-type O应用
The Ceditest FMDV-type O可以检测抗 FMDV-type O型的的抗体。ELISA可以检测已感染动物的血清的
FMDV,这种血清会导致已接种或没接种的动物的感染。
四、Ceditest FMDV-type O检测原理
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Ceditest FMDV-type O ELISA是一种阻断 ELISA。FMDV-type O抗原和特殊单克隆抗体有反作用力,阻
碍样品里的特殊抗体反应。
酶标板包被灭活的 FMDV-type O抗原。进行检测时需要把待测处理样品加到酶标板中,孵育 1小时清洗
酶标板,再加酶联结合物。在室温下孵育 1小时。再清洗,之后再加可以直接使用的底物和终止液。在 450
nm下读取 OD值。
参考血清 1是空白。参考血清 2有高的阻断率(=阳性对照),参考血清 3有相对底的阻断率(=弱阳性
对照)。参考血清 4是阴性对照,用于计算样品的阻断率。
Ceditest FMDV-type O试剂盒可以检测牛、猪、绵羊、山羊的血清。
五、一般评述
如果没有前面的注意事项,此说明书的一些信息很容易变化。但是 Cedi-Diagnostics B.V自从公布起一直
都十分完整精确。Cedi-Diagnostics B.V对使用以上操作方法产生的结果负责。
六、Ceditest FMDV-type O试剂盒组成
1. 酶标板 2块 2 test strip plates in an aluminium foil bag
2. 浓缩酶标记物,1瓶 1 vial conjugate (concentrated)
3. 参考血清 1,1瓶(直接使用)1 vial reference serum 1(ready-to –use)
4. 参考血清 2,1瓶(直接使用)1 vial reference serum 2(ready-to –use)
5. 参考血清 3,1瓶(直接使用)1 vial reference serum 3(ready-to –use)
6. 参考血清 4,1瓶(直接使用)1 vial reference serum 4(ready-to –use)
7. 浓缩稀释缓冲液,1瓶 1vial dilution buffer (concentrated)
8. 冻干马血清,1瓶 1 vial horse serum (lyophilized)
9. 去离子水,1瓶 1 vial demineralized water
10. 底物,1瓶(直接使用) 1 vial chromogen/substrate solution (ready-to –use)
11. 终止液,1瓶(直接使用)1 vial stop solution (ready-to –use)
12. 浓缩洗液, 1瓶 1 vial washing fluid (concentrated)
13. 孵育用盖子 1个 1 lid to cover the strips during incubation
14. 封铝箔袋用的黑夹子 1个 1 black closure to reseal the aluminium bag
七、储存条件
如果试剂盒不马上使用,需要储存在 2°C - 8°C ,直到过期,不能再继续使用。
八、注意事项
1.注意瓶子上的标签和底物溶液
2.终止液是强酸,避免接触到皮肤和眼睛。
3.在使用前所有试剂必须恢复到室温 20-25°C。
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九、预备
1. 马血清溶液:用试剂盒提供的去离子水溶解冻干马血清(参看瓶上标签)。当不用的时候储存在–20oC。
2.稀释缓冲液:用去离子水 1:4稀释浓缩的稀释缓冲液。4体积去离子水稀释 1体积稀释缓冲液。
3.ELISA缓冲液:用稀释缓冲液稀释马血清溶液,体积比为 1:19。每两条需要 3.5ml。
4.酶标记物:用 ELISA缓冲液稀释酶标记物(参看瓶上标签)。每两条需要 1.8ml。
5.洗液:洗液共需要 12升。用 200倍的去离子水稀释洗液(参看瓶上标签)。
6.洗板可以用洗板机。如果不用,要用大于 200μl的移液器。在最后一次冲洗时轻轻拍打酶标板。
十、待测样品
1.血清样品在 4°C 下可储存几天。在 -20°C下可以储存更长的时间。
2.冻干试剂处理:
2.1需要在室温下使其平衡。
2.2垂直放置试剂,轻轻摇动试剂,以免试剂挂在瓶壁上。
2.3小心打开瓶盖。
2.4按照标签上的说明加入去离子水。
2.5冻干试剂溶解后盖上瓶塞。轻轻摇动瓶子,使未溶解的冻干试剂溶解。
2.6在使用前允许溶液静置最少 15分钟。
2.7轻轻摇动瓶子摇动瓶子,避免出现气泡。
十一、检测步骤
1.孵育待测血清
1.1 吸取 90 μlELISA缓冲液到所有孔。
1.2 吸取 10 μl参考血清 1到 A1 和 B1孔。
1.3 吸取 10 μl参考血清 2到 C1 和 D1孔。
1.4 吸取 10 μl参考血清 3到 E1 和 F1孔。
1.5 吸取 10 μl参考血清 4到 G1 和 H1孔。
1.6 吸取 10 μl样品到剩余孔中。
1.7 用孵育盖盖上酶标板。
1.8 在 20–25°C的室温下孵育 1小时。
1.9 倒掉酶标板中的液体,用洗液洗板 6次。在最后一次冲洗时轻轻拍打酶标板。
2.孵育酶标结合物和底物溶液
2.1 吸取 100 μl酶标结合物溶液到所有孔。
2.2 用孵育盖盖上酶标板。
2.3 在 20–25°C 室温下孵育 1小时。
3.孵育底物
3.1 倒掉酶标板中的液体,用洗液洗板 6次。在最后一次冲洗时轻轻拍打酶标板。
3.2 吸取 100 μl底物溶液到所有孔。
3.3 在 20–25°C 室温下孵育 15分钟。
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3.4 吸取 100 μl终止液到所有孔。
3.5 读数前混匀微孔中液体。
注意 从加底物溶液开始的第一个孔计时 15分钟后立即按照加底物同样的顺序和速度加终止液,混匀孔中
液体。
4.读板和计算结果
4.1 在加入终止液 15分钟内在 450 nm下读取 OD值。
4.2 计算 A1和 B1的 OD450平均值。(=空白值)。
4.3 计算样品校正值,用样品 OD值减去空白值为样品校正值。
4.4 计算 G1和 H1的 OD450平均值。(= OD450最大值)。
4.5 根据下面的公式计算出检测血清阻断率 (PI)。
注意 所有样品的 OD450 值和阴性对照的平均值比较计算出(PI)值
PI = 100 –(OD450 样品- OD450空白 ) / (OD450最大值- OD450空白)x 100
5. 确认
5.1 A1和 B1的 OD450平均值(=空白值)小于 0.250。
5.2 最大 OD450 maximum的校正值不小于 1.000。
5.3 参考血清 2阻断率的平均值必须大于 70% 。
5.4 参考血清 3阻断率的平均值必须小于 50%。
5.5 不满足这些标准的结果应该排除。
6. 分析 Percentage Inhibition
PI = <50% 阴性 不含 FMDV type O型抗体
PI = >50% 阳性 含 FMDV type O型抗体
十二、Ceditest FMDV-NS的计算
格
Test results of the Ceditest FMDV- NS . Kit lot nr: ______
Plate 1 Plate 2 Plate 3 Plate 4 Plate 5
Test date 0 0 0 0 0
Mean OD450 of negative
control (=OD max)
0 0 0 0 0
Percentage Inhibition (PI)
of weak positive control
0 0 0 0 0
Percentage Inhibition (PI)
of positive control
0 0 0 0 0