免疫组化

免疫组化 1. 尽量取新鲜组织，组织块不要过大，过大可适当延长固定时间，根据要固定的组织选择 不同的固定液。 2. 先向容器中加入适量固定液，为组织块5-10倍，再投入组织块，以避免组织块粘附在容 器壁上 3. 梯度脱水，70%乙醇1 X 1h; 4. 80%乙醇2 X 1h; 5. 90%乙醇 1X 1h; 6. 100%乙醇 3X 1h或30min 7. 二甲苯 3X 20min 8. 58-60度石蜡浸蜡，2X 1h;或第二道过夜 9. 包埋，脱模，可保存在室温或4度冰箱 10. 切片，贴片 11. 60度烤片过夜 12. 二甲苯 15min，二甲苯5min 13. 100%乙醇 2X 2min 14. 90%乙醇 1X 2min 15. 80%乙醇 1X 2min 16. 70%乙醇 1X 2min 17. 水洗 1X 5min 18. 苏木素 染色，根据苏木素配制方法不同，染色时间不同 19. 水洗1X 10min 20. 1%盐酸酒精 摇6-8下，至蓝色消失 21. 水洗1X 10min 22. 70%乙醇 1X 2min 23. 80%乙醇 1X 2min 24. 90%乙醇溶解的酚红 染色 5-10秒，根据酚红配制时间决定 25. 90%乙醇 1X 2min 26. 100%乙醇 2X 2min 27. 二甲苯5min，二甲苯15min 28. 用中性树脂封片 冰冻切片 1. 讲冷冻切片机降温，冷冻室温-20度，刀架-20度，根据组织的要求调整 2. 取新鲜组织，组织块不要过大，如果立即做可以直接把组织块加OCT包埋在-20度切片 机内速冻，OCT全部变白后即可，如果因组织块过大有部分暴漏，要再补OCT将组织 块全部包埋在OCT中，可适当冻久点，冻得时间长组织容易切不容易碎;如果不立即 做，可将组织块加OCT后冻在-80冰箱，如果组织有外膜，可加OCT后在室温适当放 置一段时间，以利于OCT浸透(如果切片时发现组织碎裂或内部破碎可能因为OCT浸 透不好或冷冻不好，可放在室温融化后重新冷冻) 3. 将模块涂上一层OCT，冻硬后将组织放在上面，加OCT包埋整个组织，放在冷冻切片 机内，OCT全白后可切片 4. 选择适当厚度，切片 5. 切片展开后，用室温的玻片直接平行压在切片上，OCT接触到室温玻片会融化，讲组织 贴在玻片上 6. 切好的玻片可在室温放置30min-1h左右，可使组织贴的更牢 7. 切好的片子放在-80冰箱保存 8. 剩余的组织块可用锡纸包好冻在-80度冰箱。 9. 如果组织切片前没有固定，可将片子浸在固定液中固定片刻，根据自己组织特点及要做 的实验选择固定液和固定时间。 10. 染色观察